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1、微生物培训微生物培训2 2引言药品生产质量管理规范附录中明确规定：洁净区内的人数应当严加控制，凡在洁净区工作的人员（包括维修工、辅助人员）应当定期进行卫生和微生物方面的基础知识、洁净作业等方面的培训及考核，对进入洁净区临时的外部人员应进行指导和监督。细菌的形态：原核细胞型-细菌单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，叫菌落。细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落特征因种类而异。依据各种细菌在一定条件下形成的菌落特征具有一定的稳定性和专一性，这是衡量菌种纯度，辨认和鉴定菌
2、种的重要。真核细胞型-真菌（霉菌及酵母菌）真菌是一类有细胞壁，以寄生或腐生方式生存，能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物。包括：单细胞和多细胞两种。霉菌：是丝状真菌的俗称，意为“发霉的真菌发霉的真菌”，形成分枝繁茂的菌丝体，依靠产生形形色色的孢子进行繁殖。菌落形态一般比较疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状，不易挑取，正反面的颜色和边缘与中心颜色常不一致。最适宜生长温度:2228，最适宜pH5.56.0，霉菌生长需要温暖潮湿的环境(药典规定细菌培养温度为2328)霉菌真菌孢子能够在不利其生长的条件下干燥、热、紫外线和消毒剂）存活很长时间。黑曲霉 酵母菌是单细胞真核
3、微生物，喜欢在偏酸性且含糖较多的环境中生长；通常形态有球状、卵圆状、椭圆状、柱状和香肠状等；酵母菌有多种繁殖方式：包括有性繁殖和无性繁殖；菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起、质地均匀，颜色均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。真菌通常要比细菌大10倍。微生物五大共性体积小面积大：体积小面积大：个体极其微小，必须借助显微镜放大几倍、几百倍、上千倍，乃至数万倍才能看清吸收多转化快：吸收多转化快：食谱广泛，凡是动植物能利用的营养，微生物都能利用，大量的动植物不能利用的物质，甚至剧毒的物质，微生物照样可以视为美味佳肴。生长旺繁殖快：生长旺繁殖快：二分分裂是细菌最普遍、最主要的繁殖方式适应强变异
4、频：适应强变异频：能耐0196的低温，可在250300的高温条件下正常生长；分布广种类多：分布广种类多：微生物几乎无处不有，无孔不入，地球上有200万生物，其中微生物有20万种之多。微生物的生长规律微生物整个生长过程可以分为4个阶段 延滞期；对数期；稳定期；衰亡期。微生物的营养微生物的营养要求：微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等；微生物的营养类型：根据微生物对碳源的要求不同，可将其分为自养菌和异养菌两大营养类型；根据其生命活动所需能量的来源不同，可分为光能营养菌和化能营养菌。微生物对药品的影响正正面影响 利用微生物及其代谢产物制成药物。（疫苗、免疫制剂等）微生
5、物为药品的生产工艺提供了不可缺少的手段。（如发酵工艺）微生物学方法成为检测药物质量的重要手段（如抗生素效价测定、动物试验等）。负面影响 被微生物污染的药品会使其失去有效性。微生物污染药品可使其产生毒性。药品染菌的危害与控制药品染菌的危害 危及患者健康与生命安全 导致药品质量问题药品的微生物污染源 空气、原辅料、水、包装材料、厂房与设备、人员染菌对药品质量的影响 药物的物理性状改变、药物的化学成份变化、药物的疗效变化、引起热原防止药品染菌的措施 厂房环境控制、设备条件、空气净化、原辅料的控制、卫生管理措施、生产工艺卫生防止微生物污染的原则1.1.了解污染源 对药品生产全过程可能造成污染的来源，进
6、行深入的了解研究，从而设计一个完好的生产工艺，制定规章制度和标准操作规程，从各个环节采取消毒和卫生措施来防止微生物污染，使产品达到所要求的卫生学质量，包括稳定性及各种微生物参数。2.2.进行微生物监测 在药品生产过程中，应按GMP要求不断进行各项微生物卫生学监测。例如：对洁净室空气中的浮游菌、沉降菌的监测；对无菌设备清洁灭菌的验证；对非无菌药品进行细菌和活菌数测定和病原菌的限制性检查等。二、微生物的分布1、人体内外微生物2、水中的微生物3、空气中的微生物4、物料的微生物微生物的分布人是洁净区中最大的污染源！!1、人在代谢过程中会释放和分泌污染物。2、人体表面、衣服能沾染、携带污染物。3、人在洁
7、净室内的各种动作也会产生微粒和微生物。人体内外微生物的分布微生物的分布 法规要求药品生产质量管理规范中第四节中明确规定：1、应当对人员健康进行管理，并建立健康档案。直接接触药品的生产人员上岗前应当接受健康检查，每年至少进行一次健康检查。2、避免体表有伤口、患有传染病或其他可能污染药品疾病的人员从事直接接触药品生产。3、工作服的选材、式样及穿戴方式应当与所从事的工作和空气洁净度级别要求相适应。4、进入洁净生产区的人员不得化妆和佩带饰物。5、操作人员应当避免裸手直接接触药品、与药品直接接触的包装材料和设备表面水中的微生物水体是微生物广泛分布的第二个天然环境。水中的细菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄
8、物及垃圾等。药品生产质量管理规范第九十八条明确规定：纯化水、注射用水储罐和输送管道所用材料应当无毒、耐腐蚀；储罐的通气口应当安装不脱落纤维的疏水性除菌过滤器；管道设计和安装应当避免死角、盲管。纯化水、注射用水的制备、贮存和分配应当能够防止微生物的滋生。空气中的微生物空气不是微生物生长的良好场所，因为空气不含必要的水分和营养。空气中的微生物来自灰尘微粒，来自人的皮肤和衣服，以及谈话、咳嗽、打喷嚏等造成的飞沫。空气中微生物的数量取决于灰尘和活动状况。灰尘-“微生物的飞行器”因此空气侵袭我们产品的污染物的主要媒介。进入洁净区的空气要经过空气净化系统的处理。洁净区要定期消毒，使用的消毒剂不得对设备、物
9、料和成品产生污染。消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。工作时，不要快速走动，操作的动作要轻、幅度要小，避免不必要的走动和动作，不要频繁进出洁净室。物料的微生物1、药品生产所用的原辅料、与药品直接接触的包装材料应当符合相应的质量标准；2、对重复使用的盛装容器，应按SOP要求清洗干净；3、直接与药品（中间产品）接触的设备、工具、容器、内包装容器最后一次冲洗用水应与生产用水一致；4、物料净化包括物料清洁室、气闸或传递窗、备料室、废弃物料的出口专用传递设施等；5、物料应经净化或消毒灭菌后通过物料通道进入；6、生产过程中产生的废弃物出口不能与物料进口合用一气闸或传递窗，宜单独设置专用传递设施。微生物
10、的控制1、五个基本概念2、常用的消毒剂3、灭菌的方法微生物的控制五个基本概念：抑菌：抑制体内或体外的细菌生长繁殖。防腐：防止或抑制体外细菌繁殖的方法。细菌一般不死亡，使用同一化学药品在低浓度时为防腐剂，高浓度时为消毒剂无菌：不存在活菌消毒：杀灭物体上病原微生物的方法。并不一定杀死含芽孢的细菌或非病原微生物。用来消毒的药品叫消毒剂，一般消毒剂在常用浓度下只对细菌的繁殖体有效，对其芽孢则需提高消毒剂的浓度和延长作用时间。灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。比消毒要求高，它杀灭了包括细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。灭菌和消毒的比较共性：杀死微生物以控制其污染和防止污染区别：1、杀灭微生物完
11、全性的差异。灭菌要求完全杀灭微生物，灭菌后的药品不应含有活的微生物。而消毒不完全杀灭微生物，只能杀灭一部分微生物即病原微生物。这是相对的。因为强效消毒剂在适宜条件下可能达到灭菌效果；不适宜条件下灭菌，有不完全杀灭微生物的可能。2、方法上的差异：灭菌方法具有多样性，消毒常借化学物质。3、效果检查的差异：灭菌效果用无菌检查法检测，而消毒效果以消毒剂的小家评定。常用消毒剂灭菌方法：1、热力灭菌2、气体灭菌3、辐射灭菌4、过滤灭菌灭菌方法1、热力灭菌：主要利用高温的致死作用，使微生物的蛋白质和核酸等重要生物高分子发生变性、破坏，而导致细胞死亡。分为：干热灭菌和湿热灭菌两种灭菌方法(1)干热灭菌：灼烧与
12、火焰灭菌、干烤灭菌 灼烧主要用于接种工具灭菌，如接种针、接种环、刀、剪等在火焰上烧灼即可达到彻底灭菌。火焰灭菌是在无菌操作中，将试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反复通过火焰数次，利用火焰对管口等进行灭菌，防止管口污染，作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。干烤灭菌是利用热辐射及干热空气进行灭菌。灭菌方法(2)湿热灭菌法：通过热蒸汽或沸水使细菌蛋白质变性而杀灭微生物的方法。灭菌效率比干热灭菌法高。包括：煮沸灭菌、流通蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌煮沸灭菌：加热使水至沸而杀灭细菌的方法。凡不适于高压蒸汽灭菌的物品可常压下在水中煮沸一段时间达到灭菌目的。流通蒸汽灭菌：常压下，用蒸笼、蒸锅等在100灭菌。仅可杀死细
13、菌繁殖体，不能完全杀灭芽孢。灭菌方法高压蒸汽灭菌：通过加压提高蒸汽温度，用高压蒸汽灭菌，穿透力强、温度高、灭菌效果最好。是最可靠最适用最广泛的灭菌方法，凡耐高温和潮湿的物品可应用本法灭菌。注意事项：完全排出高压灭菌器内的冷空气。（冷空气存在时，同一表压下所达到的温度值偏低，不符合规定的要求，灭菌就不彻底。灭菌方法2、气体灭菌：利用化学消毒剂形成的气体来杀灭微生物。臭氧杀菌消毒广泛存在于自然界中，雷雨过后的空气有一种清新的感觉，是因为空中放电产生臭氧，消灭了空气中的微生物，净化了空气。臭氧具有强烈的杀菌消毒作用。其杀菌消毒原理是：臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧和单个氧分子，后
14、者具有很强的活性，对细菌具有很强的氧化作用，臭氧氧化灭菌方法 分解了细菌内氧化葡萄糖所必需的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为普通氧分子，不存在任何有毒残留物，故称为无污染消毒剂。不但对各种细菌（包括肝炎病毒、大肠杆菌、绿脓杆菌及杂菌等）有极强的杀灭能力，且对杀死霉菌也很有效。灭菌方法3、辐射灭菌（1）电离辐射:用引起电离的X射线、射线灭菌。电离辐射对微生物的致死作用，主要是细胞内生物化学的变化所致。辐射的药品、食品的安全问题：辐射灭菌用于药品或食品都应经过安全试验，完全有必要进行科学全面的评价，高剂量的辐射更应慎重。Co60辐射灭菌后，被辐射物质的温度升高很少，
15、一般仅约5，故Co60辐射灭菌又称“冷灭菌”。（2）电磁波辐射（包括紫外线波长190350nm、红外线波长0.771000m、微波波长11000mm）。灭菌方法紫外线灭菌1、紫外线辐射的穿透力很弱，因此主要用于无菌室、某些工作区的空气灭菌、物体表面灭菌。2、实践工作中在无菌室无菌柜净化工作台工作室及车间安装紫外灯，一般仅起杀死空气中部分微生物的作用，而不能起到完全灭菌的作用。3、紫外线消毒方法验证中紫外灯需确认的参数主要有紫外线的波长、紫外线强度、灯管的寿命。4、紫外灯消毒的效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关，还需通过验证来确定。5、注意事项：紫外线直射对眼、皮肤有损害。紫外线照射过程中产生臭氧，臭氧过多对眼及鼻腔有刺激，产生头晕、胸闷、血压降低，所以无菌室及净化工作台紫外线照射停止后，请稍等片刻，让臭氧消散，方可进行实验操作。灭菌方法4、过滤灭菌：以物理的方法除去介质中的微生物，是一种机械除菌方法，这种机械叫除菌过滤器。常将空气或液体中的微生物及杂质用不同材料制成的薄膜滤器过滤得到无菌、无杂质的空气或液体。繁殖型细菌很少小于1m，芽孢大小为0.5m或更小些，所以过滤器或滤膜的孔径大小必须小道足以阻止细菌和芽孢进入孔径之内，一般选用孔径为0.22m。结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！48