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1、毕业论文毕业论文(b y ln wn)PPT格式建议格式建议如下：如下：一、研究目的一、研究目的二、技术路线二、技术路线三、研究材料三、研究材料四、研究方法四、研究方法五、研究结果五、研究结果六、主要结论六、主要结论七、创新点及今后努力方向七、创新点及今后努力方向八、致谢八、致谢第一页，共23页。香樟籽乙醇提取物成分香樟籽乙醇提取物成分(chng(chng fn)fn)及其抑菌活性研究及其抑菌活性研究Chemical composition and Chemical composition and Antibacterial activity of Antibacterial activity
2、 of the Ethanol extracts of the Ethanol extracts of Cinnamomum camphora seedCinnamomum camphora seed系所：生物系所：生物(shngw)科学系科学系专业：生物专业：生物(shngw)科学科学学号：学号：05124006 作者姓名：杨作者姓名：杨 顺顺指导老师：余海忠指导老师：余海忠第二页，共23页。一、研究目的一、研究目的随着社会的发展和我国综合国力的提高随着社会的发展和我国综合国力的提高,人人们对生活质量的要求日益们对生活质量的要求日益(ry)提高提高,对对生态农业、绿色食品、持续农业、生物多生
3、态农业、绿色食品、持续农业、生物多样性保护及环境保护的呼声越来越高。为样性保护及环境保护的呼声越来越高。为了与我国可持续发展策略相适应了与我国可持续发展策略相适应,研制开研制开发的新农药必须具有安全性高、残留低、发的新农药必须具有安全性高、残留低、无公害、生物活性高、选择性高、使用费无公害、生物活性高、选择性高、使用费用低等特性。植物性农药由于其原材料取用低等特性。植物性农药由于其原材料取自于天然植物自于天然植物,自然界有其顺畅的降解途自然界有其顺畅的降解途径径,具有无残留、无公害、不易产生抗药具有无残留、无公害、不易产生抗药性等优点性等优点,可广泛用于农作物病虫害防治。可广泛用于农作物病虫害
4、防治。第三页，共23页。香樟树系樟树属的常绿乔木植物,是我国亚热带绿阔叶林的主要树种之一,具有驱虫、防腐耐蛀的功能,樟树籽可提取色素、香料或樟油等物质制成植物农药，樟树籽为可再生资源,其应用前景广阔。我国很早就将樟树籽作为药物(yow)用于治病,并认为樟树籽有驱风散寒、行气止痛之功效，主要含有癸酸(C10)的樟树籽脂肪油已被试制成碳酸甘油脂,用于治疗脂肪代谢紊乱病症,并能降血脂及胆固醇。第四页，共23页。那么，这种对人体起作用的香樟籽,它的乙醇提取物对绿色木霉，酵母菌，黑曲霉，木质层孔菌，枯草芽孢杆菌等微生物会不会有抑制作用呢？其作用方式又如何？因此，本研究拟就,香樟籽乙醇提取物成分和抑菌活性
5、展开探讨。在实验中以香樟籽提取物为抑菌剂，对上述微生物生长及孢子(boz)萌发的影响进行试验，以研究其抑菌作用。第五页，共23页。香樟树籽第六页，共23页。二、技术二、技术(jsh)路线路线第七页，共23页。三、实验三、实验(shyn)材料材料1 1、供试植物、供试植物 香樟籽（香樟籽（Cinnamomum camphora seedsCinnamomum camphora seeds）采自湖北襄樊学院校）采自湖北襄樊学院校内。内。2 2、供试微生物、供试微生物 真菌：绿色木霉真菌：绿色木霉Trichoderma virideTrichoderma viride 啤酒酵母啤酒酵母Sacchar
6、omyces cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae 黑曲霉黑曲霉Aspergillus nigerAspergillus niger 木质木质(m zh)(m zh)层孔菌层孔菌Fomes ligneusFomes ligneus 细菌：枯草芽孢杆菌细菌：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisBacillus subtilis 以上五个菌株由襄樊学院化学工程与食品科学院廖雪义老师以上五个菌株由襄樊学院化学工程与食品科学院廖雪义老师提供，实验室置冰箱中待用。提供，实验室置冰箱中待用。第八页，共23页。1 1、香樟籽的粗提方法、香樟籽的粗提方法本实验利用醇浸
7、法提取，具体步骤如下：本实验利用醇浸法提取，具体步骤如下：（1 1）将采摘的紫色香樟籽盛在白瓷盘，置于鼓风干燥箱中烘烤）将采摘的紫色香樟籽盛在白瓷盘，置于鼓风干燥箱中烘烤（5050），使其干燥。然后用微型植物粉碎机粉碎（或用研钵研），使其干燥。然后用微型植物粉碎机粉碎（或用研钵研碎），得到粉末。（碎），得到粉末。（2 2）将上述粉末分装）将上述粉末分装(fn zhun)(fn zhun)到到250ml250ml磨磨口三角瓶中（倍体积），然后加无水乙醇浸泡，间隔口三角瓶中（倍体积），然后加无水乙醇浸泡，间隔24h24h收集初收集初提液，并在原瓶中加新的无水乙醇浸泡，收集所有初提液，并抽提液，并在
8、原瓶中加新的无水乙醇浸泡，收集所有初提液，并抽滤得过滤液。（滤得过滤液。（3 3）用旋转蒸发仪减压浓缩上述过滤液）用旋转蒸发仪减压浓缩上述过滤液,得膏状物。得膏状物。四、实验四、实验(shyn)方法方法第九页，共23页。2 2、气相色谱及质谱条件、气相色谱及质谱条件 香樟籽无水乙醇提取物组分的测定在襄樊市产品质量监督香樟籽无水乙醇提取物组分的测定在襄樊市产品质量监督检验所进行，所用仪器为气相色谱质谱联用仪。气相色谱条件：检验所进行，所用仪器为气相色谱质谱联用仪。气相色谱条件：DB-5msDB-5ms弹性石英毛细管色谱柱弹性石英毛细管色谱柱(0.25 mm30m(0.25 mm30m，0.25m
9、)0.25m)。升温程。升温程序：初始序：初始(ch sh)(ch sh)温度温度600C600C保持保持10min10min，以，以10Cmin-110Cmin-1至至800C800C，保，保持持15min15min，以，以20Cmin-120Cmin-1至至2000C2000C，以，以200Cmin-1200Cmin-1至至2200C2200C，保持，保持5 5 minmin。载气为氦气，流速。载气为氦气，流速0.8 mlmin-10.8 mlmin-1；进样口温度；进样口温度2200C2200C。质谱。质谱条件：离子源为条件：离子源为EIEI，电离电压，电离电压70eV70eV，离子源温
10、度，离子源温度2000C2000C，溶剂延迟，溶剂延迟时间，时间，7 min7 min，质谱扫描范围，质谱扫描范围m/z 40m/z 40400400；扫描周期；扫描周期0.5 S 0.5 S。第十页，共23页。3 3、生长速率测定法、生长速率测定法 1 1）从试管中挑取原种接种与液体培养基中，在）从试管中挑取原种接种与液体培养基中，在250C250C，光照条，光照条件下摇床培养。培养时间，不同的菌培养时间不同，以锥形瓶中有件下摇床培养。培养时间，不同的菌培养时间不同，以锥形瓶中有浑浊为宜（细小颗粒悬浮）。浑浊为宜（细小颗粒悬浮）。2 2）固体培养基融化后倒平板，待培养基凝固后吸取）固体培养基
11、融化后倒平板，待培养基凝固后吸取1ml1ml菌液菌液涂布，然后在涂布，然后在250C250C，光照培养箱中培养。倒平板时，倒一半即可，光照培养箱中培养。倒平板时，倒一半即可，摇均形成一薄层，以利于打菌饼。摇均形成一薄层，以利于打菌饼。3 3）取）取45ml45ml土豆土豆(tdu)(tdu)滤液于滤液于100ml100ml锥形瓶中，加入琼脂粉。锥形瓶中，加入琼脂粉。同样做同样做1515瓶；取瓶；取75ml75ml土豆土豆(tdu)(tdu)滤液于滤液于100ml100ml锥形瓶中，加入琼脂锥形瓶中，加入琼脂粉。同样做粉。同样做3 3瓶。然后于瓶。然后于1210C1210C灭菌灭菌30min30
12、min。第十一页，共23页。4）PDA固体培养基加热融化后，在恒温水浴锅中降温至固体培养基加热融化后，在恒温水浴锅中降温至500C左右。用左右。用10ml量筒（也可用移液枪）量取量筒（也可用移液枪）量取5ml香樟籽无水乙醇提取液，倒入装有香樟籽无水乙醇提取液，倒入装有45ml PDA培养基的锥形瓶中；用培养基的锥形瓶中；用10ml量筒量取对照液，倒入装有量筒量取对照液，倒入装有75ml PDA培养基的锥形瓶中，即比例为培养基的锥形瓶中，即比例为9：1。倒平板时，倒一半即可，摇均形。倒平板时，倒一半即可，摇均形成一薄层，以利于能平均倒成一薄层，以利于能平均倒3份平板。注：倒平板时，应在无菌环境中
13、操作，份平板。注：倒平板时，应在无菌环境中操作，但实验在酒精但实验在酒精(jijng)灯旁进行时，由于对照液（如乙醇）易挥发燃烧，靠灯旁进行时，由于对照液（如乙醇）易挥发燃烧，靠的太近会烧着。的太近会烧着。5）在酒精）在酒精(jijng)灯旁进行，打孔器沾酒精灯旁进行，打孔器沾酒精(jijng)后烧着灭菌，待降后烧着灭菌，待降温至室温后再打菌饼。温至室温后再打菌饼。6）接种环灭菌后挑取菌块于倒平板的培养皿中，每皿）接种环灭菌后挑取菌块于倒平板的培养皿中，每皿2块，菌饼反向置块，菌饼反向置于培养基上，光照培养箱培养。各菌培养条件见表于培养基上，光照培养箱培养。各菌培养条件见表1。第十二页，共23
14、页。7）观测时应在同一地方，同一人，同一把米尺测量，以尽量减少误差。）观测时应在同一地方，同一人，同一把米尺测量，以尽量减少误差。72h后观测；后观测；8）重复以上步骤）重复以上步骤(bzhu)，对五种供试菌种分别定时进行测定。，对五种供试菌种分别定时进行测定。9）生长抑制率的计算方法：）生长抑制率的计算方法：第十三页，共23页。4 4、孢子萌发法、孢子萌发法 本实验采用悬浮液测定法，具体步骤如下：本实验采用悬浮液测定法，具体步骤如下：1 1）取）取17ml17ml土豆滤液于土豆滤液于100ml100ml锥形瓶中，每种香樟籽无水乙醇提取液做锥形瓶中，每种香樟籽无水乙醇提取液做6 6瓶，瓶，然后
15、于然后于1210C1210C灭菌灭菌30min30min。2 2）用无菌生理盐水）用无菌生理盐水(shnglynshu)(shnglynshu)冲洗长满孢子的培养基，将孢子冲冲洗长满孢子的培养基，将孢子冲进锥形瓶中，用纱布滤去杂质。在每个装有液体培养基的锥形瓶中加入进锥形瓶中，用纱布滤去杂质。在每个装有液体培养基的锥形瓶中加入1ml1ml孢孢子悬浮液，其中子悬浮液，其中5 5瓶再加入瓶再加入2ml2ml香樟籽无水乙醇提取液，另香樟籽无水乙醇提取液，另1 1瓶加对照液瓶加对照液2ml2ml，达，达到到9 9：1 1比例，然后在摇床中培养。培养温度比表比例，然后在摇床中培养。培养温度比表1 1中的
16、最高温度高中的最高温度高10C10C（孢子培（孢子培养比病原菌温度高有利于萌发）。养比病原菌温度高有利于萌发）。3 3）孢子萌发）孢子萌发(以孢子芽管长度大于孢子短半径者为萌发以孢子芽管长度大于孢子短半径者为萌发)后，用无菌水稀后，用无菌水稀释到适当浓度释到适当浓度(以以1010 1010 低倍镜下低倍镜下,每个视野每个视野30304040个孢子为宜个孢子为宜)7)7，加到，加到血细胞计数板上，在血细胞计数板上，在10*1010*10倍显微镜下观测。倍显微镜下观测。4 4）孢子抑制率的计算方法：）孢子抑制率的计算方法：第十四页，共23页。1 1、香樟籽无水乙醇提取物组分、香樟籽无水乙醇提取物组
17、分 在前述色谱条件下分析，经计算机检索在前述色谱条件下分析，经计算机检索(质谱数据库质谱数据库 N N IST147,N IST27)IST147,N IST27)及人工解析及人工解析(ji x)(ji x)质谱并与标准图核对，用质谱并与标准图核对，用峰面积归一化法定量测出它们的相对含量，结果见表峰面积归一化法定量测出它们的相对含量，结果见表2 2。五、实验五、实验(shyn)结果结果第十五页，共23页。第十六页，共23页。2、香樟籽无水乙醇提取物对供试菌菌丝生长、香樟籽无水乙醇提取物对供试菌菌丝生长(shngzhng)的抑制的抑制活性活性 由表由表3可知，在可知，在5种供试菌中，香樟籽无水乙
18、醇提取液在种供试菌中，香樟籽无水乙醇提取液在浓度为浓度为0.016 g/ml时对黑曲霉的抑制率最高，为时对黑曲霉的抑制率最高，为49.42%，对木质层，对木质层孔菌的抑制率最小为孔菌的抑制率最小为7.14%；在浓度为；在浓度为0.008 g/ml时对黑曲霉的抑时对黑曲霉的抑制率最高，为制率最高，为4.65%，对啤酒酵母，木质层孔菌，枯草杆菌的抑制，对啤酒酵母，木质层孔菌，枯草杆菌的抑制率最小，都为率最小，都为0；且对；且对5种供试菌的抑制作用都随提取液浓度的升高种供试菌的抑制作用都随提取液浓度的升高而增强。而增强。第十七页，共23页。培养(piyng)72h后的黑曲霉（药液浓度）第十八页，共2
19、3页。菌饼接入到含不同浓度(nngd)药液的培养基中培养第十九页，共23页。3、香樟、香樟(xin zhn)籽无水乙醇提取物对供试菌孢子萌发的籽无水乙醇提取物对供试菌孢子萌发的抑制活性抑制活性由表由表4可知，在可知，在5种供试菌孢子中，香樟种供试菌孢子中，香樟(xin zhn)籽无水乙籽无水乙醇提取液在浓度为醇提取液在浓度为0.016g/ml时对黑曲霉孢子的抑制率最高，为时对黑曲霉孢子的抑制率最高，为60.00%，对木质层孔菌孢子的抑制率最小为，对木质层孔菌孢子的抑制率最小为12.00%；在浓度为；在浓度为0.008 g/ml时，对绿色木霉孢子的抑制率最高，为时，对绿色木霉孢子的抑制率最高，为
20、12.50%，对，对啤酒酵母孢子的抑制率最小，为啤酒酵母孢子的抑制率最小，为0；且对；且对5种供试菌孢子的抑制作种供试菌孢子的抑制作用都随提取液浓度的升高而增强。用都随提取液浓度的升高而增强。第二十页，共23页。六、主要结论六、主要结论采用气相色谱质谱联用仪分析香樟籽无水采用气相色谱质谱联用仪分析香樟籽无水乙醇提取物的主要组分为：癸酸乙醇提取物的主要组分为：癸酸(18.44%)、月桂酸、月桂酸(14.87%)、肉豆蔻酸、肉豆蔻酸(10.88%)、2-莰酮莰酮(10.46%)、a-松油醇松油醇(8.69%)、黄樟油素、黄樟油素(8.51%)、辛酸、辛酸(7.90%)、-蒎烯蒎烯(3.57%)、柠
21、檬烯、柠檬烯(2.52%)、莰烯、莰烯(2.48%)等等37种化合物。种化合物。(2)以提取物对供试菌菌丝生长的抑制率以提取物对供试菌菌丝生长的抑制率为考察指标，在为考察指标，在5种供试菌中，香樟籽种供试菌中，香樟籽无水乙醇提取液在浓度为无水乙醇提取液在浓度为0.016 g/ml时时对黑曲霉的抑制率最高，为对黑曲霉的抑制率最高，为49.42%，对，对木质层孔菌的抑制率最小为木质层孔菌的抑制率最小为7.14%；在；在浓度为浓度为 0.008 g/ml 时对黑曲霉的抑制时对黑曲霉的抑制率最高，为率最高，为4.65%，对啤酒酵母，木质，对啤酒酵母，木质层孔菌，枯草杆菌的抑制率最小，都为层孔菌，枯草杆
22、菌的抑制率最小，都为0；且对；且对5种供试菌的抑制作用都随提取种供试菌的抑制作用都随提取液浓度的升高液浓度的升高(shn o)而增强。而增强。(3)以孢子萌发抑制率为考察指标，在以孢子萌发抑制率为考察指标，在5种种供试菌孢子中，香樟籽无水乙醇提取液供试菌孢子中，香樟籽无水乙醇提取液在浓度为时对黑曲霉孢子的抑制率最高，在浓度为时对黑曲霉孢子的抑制率最高，为为60.00%，对木质层孔菌孢子的抑制率，对木质层孔菌孢子的抑制率最小为最小为12.00%；在浓度为；在浓度为0.008 g/ml时时，对绿色木霉孢子的抑制率最高，为，对绿色木霉孢子的抑制率最高，为12.50%，对啤酒酵母孢子的抑制率最小，对啤
23、酒酵母孢子的抑制率最小，为为0；且对；且对5种供试菌孢子的抑制作用都种供试菌孢子的抑制作用都随提取液浓度的升高随提取液浓度的升高(shn o)而增而增强。强。第二十一页，共23页。七、创新之处（1）香樟树具有速生性、观赏性、长寿性等特性,故种植极为普遍.自然落下香樟籽,数量很大，已经成为城市环境整治的一大负担。本实验的研究目的是科学地利用这些“废物”，对城市环境的保护和经济发展将会有重要的意义。（2）目前，香樟籽极少数被采集入药，对其研究主要集中在油脂产品的开发上，但对其活性物质参与农业用药剂这方面的研究为数不多，鲜见报道。因此，本实验拟通过对香樟籽活性物质对供试真菌和细菌控制展开深入研究，以
24、期发现一种新型天然抗菌剂，为保护环境、维护生态平衡、恢复和改善人类生存环境提供技术支持和保障。需改进的地方（1）醇浸法对香樟籽活性成分的提取有较高的产量,但处理过程比较麻烦、复杂,且所需溶剂数量较多，故需要(xyo)对此提取方式进行优化。另外，也可以采用水蒸汽蒸馏法进行提取，方法简便。（2）本实验只局限于小试范围,建议在中试时对提取的加工工艺、设备技术等方面作进一步的研究。（3）应该多选几种代表性的细菌做抑制实验，使研究结果更准确。同时需要(xyo)测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度（MBC），为最佳用药量提供一定依据。第二十二页，共23页。八、致八、致 谢谢 本文是在余海忠老师悉心指导下完的，从论文选题、实验设计到实验材料的采集、实验的实施、论文的撰写，导师都倾注大量的心血，导师学术上严谨的治学态度，对实验操作的严格要求以及对科学真理的执着追求的精神，一直鞭策着我努力奋进，并将使我受益终身，在此向导师表示由衷的感谢！在论文期间襄樊学院化学工程与食品科学院张火云、廖雪义、肖作安等老师都给予我热情的指导，并帮我解决实验过程中遇到的困难；另外在实验过程中还得到本实验室刘远琳等同学的热情支持和帮助以及班上同学吴飞鸽、邱川、胡光文给予的帮助，在此一并向他们表示衷心的感谢！感谢化学工程与食品科学院各位领导(ln do)、老师在大学四年里对我的谆谆教导、关心支持！第二十三页，共23页。