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1、关于蛋白质变性与沉淀第1页，讲稿共19张，创作于星期三一、实验目的一、实验目的 1.1.掌握蛋白质变性与沉淀的掌握蛋白质变性与沉淀的原理及各种沉淀方法；原理及各种沉淀方法；2.2.熟悉刻度吸量管的正确使熟悉刻度吸量管的正确使用；用；3.3.了解蛋白质变性与沉淀两了解蛋白质变性与沉淀两者的关系。者的关系。第2页，讲稿共19张，创作于星期三二、实验原理二、实验原理 （一）（一）蛋白质沉淀原理蛋白质沉淀原理 蛋白质蛋白质溶于水形成溶于水形成稳定稳定的胶体溶液，的胶体溶液，维持维持蛋白质蛋白质胶体溶液稳定因素：胶体溶液稳定因素：1.1.蛋白质蛋白质颗粒表面的颗粒表面的水化膜；水化膜；2.2.蛋白质蛋白
2、质颗粒表面的颗粒表面的电荷。电荷。去除上述稳定因素可使蛋白质沉淀去除上述稳定因素可使蛋白质沉淀析出析出。第3页，讲稿共19张，创作于星期三 蛋白质沉淀析出常用的方法有等电蛋白质沉淀析出常用的方法有等电点法、盐析法、重金属离子沉淀法、点法、盐析法、重金属离子沉淀法、有机酸试剂沉淀法、有机溶剂沉淀法有机酸试剂沉淀法、有机溶剂沉淀法等。等。第4页，讲稿共19张，创作于星期三（二）蛋白质变性原理（二）蛋白质变性原理 蛋白质受某些物理或化学因蛋白质受某些物理或化学因素的影响，空间结构发生改变，素的影响，空间结构发生改变，生物活性丧失。称为蛋白质变性。生物活性丧失。称为蛋白质变性。蛋白质变性，分可逆；不可
3、逆。蛋白质变性，分可逆；不可逆。第5页，讲稿共19张，创作于星期三三、实验仪器与试剂三、实验仪器与试剂 1.仪器试管、刻度吸量管、洗耳球等。2.试剂 5蛋白质蛋白质溶液、溶液、2.5蛋白质蛋白质溶溶液、液、10ZnSO4溶液、溶液、o.1mol/LNaOH、1三氯醋酸、无水乙醇、NaCl（固体）第6页，讲稿共19张，创作于星期三四、实验内容及四、实验内容及操作步骤操作步骤1.1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质2.2.乙醇沉淀蛋白质乙醇沉淀蛋白质（一）实验内容（一）实验内容（二）（二）操作步骤操作步骤第7页，讲稿共19张，创作于星期三1.1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质
4、重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质1 1）实验原理）实验原理COO-NH3+POH-H+重金属离子M+酸根X-COO-NH2PCOOHNH3+PCOO-M+NH2PCOOHNH3+X-PpH pIpH pI pI两性离子两性离子负电荷负电荷正电荷正电荷盐盐盐盐第8页，讲稿共19张，创作于星期三2）操作步骤操作步骤试剂（滴）试剂（滴）试管试管1 1试管试管2 2试管试管3 35%蛋白质溶液蛋白质溶液2D2D2D0.1mol/L NaOH2D10%ZnSO420D20D1%三氯醋酸三氯醋酸20D现象现象3 3）观察、记录实验现象，并解释之。）观察、记录实验现象，并解释之。第9页，讲稿共19张，创作于星期
5、三2.2.乙醇沉淀蛋白质乙醇沉淀蛋白质 1 1）实验原理）实验原理 乙醇溶解于水，破坏蛋白质乙醇溶解于水，破坏蛋白质分子的水化膜，加入少量中性盐分子的水化膜，加入少量中性盐抑制蛋白质的解离，使电荷减少，抑制蛋白质的解离，使电荷减少，沉淀更完全。沉淀更完全。第12页，讲稿共19张，创作于星期三2）操作步骤操作步骤试剂（试剂（mL）试管试管1 1试管试管2 22.5%蛋白质蛋白质溶液溶液0.5 mL0.5 mL结晶结晶NaCl数粒（适量）数粒（适量）无水无水乙醇乙醇1mL1mL现象现象3）观察、记录实验现象，并解释之。观察、记录实验现象，并解释之。第13页，讲稿共19张，创作于星期三 五、注意事项
6、五、注意事项 1.1.试剂瓶滴管不能交叉使用，否则污试剂瓶滴管不能交叉使用，否则污染试剂。染试剂。2.2.刻度吸量管不能交叉使用，否则污刻度吸量管不能交叉使用，否则污染试剂，影响反应现象。染试剂，影响反应现象。3.3.做完实验把把试剂按原样摆放，试做完实验把把试剂按原样摆放，试管和管和刻度吸量管冲刻度吸量管冲洗干净，桌面擦干净，洗干净，桌面擦干净，登记签名。登记签名。4.4.值日生听老师安排，认真打扫，经老值日生听老师安排，认真打扫，经老师批准才能离开实验室。师批准才能离开实验室。第16页，讲稿共19张，创作于星期三 六、思考题六、思考题 1.1.临床抢救重金属中毒患者，为临床抢救重金属中毒患
7、者，为什么用鸡蛋清或牛奶？什么用鸡蛋清或牛奶？2.2.蛋白液中加入适量乙醇，为什蛋白液中加入适量乙醇，为什么会产生沉淀？么会产生沉淀？3.3.蛋白液在碱性条件下加入蛋白液在碱性条件下加入ZnSO4，为什么会产生沉淀？，为什么会产生沉淀？4.4.蛋白液中加入三氯醋酸蛋白液中加入三氯醋酸 ，为什，为什么会产生沉淀？么会产生沉淀？第17页，讲稿共19张，创作于星期三 下次实验：下次实验：P74页页 激活剂及抑制剂对酶活性的影响激活剂及抑制剂对酶活性的影响实验报告明天交，请组长负起责任。实验报告明天交，请组长负起责任。谢谢同学们配合！谢谢同学们配合！第18页，讲稿共19张，创作于星期三感感谢谢大大家家观观看看第19页，讲稿共19张，创作于星期三