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1、关于致病菌的检验分支杆菌属及相似属第1页，讲稿共33张，创作于星期三第2页，讲稿共33张，创作于星期三 第第1 1节节 分枝杆菌属分枝杆菌属 (Mycobacterium)n分支杆菌是一类分支杆菌是一类细长或稍弯的杆菌细长或稍弯的杆菌，因有分枝生长趋势而得，因有分枝生长趋势而得名。此菌属的最显著特性为其胞壁中含有大量名。此菌属的最显著特性为其胞壁中含有大量类脂类脂，可达菌，可达菌体干重的体干重的40%，形成粗糙菌落，难用一般染料染色。，形成粗糙菌落，难用一般染料染色。第3页，讲稿共33张，创作于星期三 第第1 1节节 分枝杆菌属分枝杆菌属 (Mycobacterium)若设法使之着色后，又不易
2、以含若设法使之着色后，又不易以含3%HCI的酒精脱色。这种的酒精脱色。这种能能抵抗盐酸酒精脱色抵抗盐酸酒精脱色的细菌称为的细菌称为抗酸杆菌抗酸杆菌。本菌属种类颇多，其中可引起人类和动物疾病的有本菌属种类颇多，其中可引起人类和动物疾病的有:（1）人）人型、牛型以及禽型、牛型以及禽结核杆菌结核杆菌;（2）麻风杆菌麻风杆菌。这些细菌多为慢性感。这些细菌多为慢性感染，因长期迁延而致组织病变。染，因长期迁延而致组织病变。第4页，讲稿共33张，创作于星期三 第第1 1节节 分枝杆菌属分枝杆菌属 (Mycobacterium)n分支杆菌属主要有分支杆菌属主要有3种：结核分支杆菌种：结核分支杆菌(M.tube
3、rculosis)、牛分支杆、牛分支杆菌菌(M.bovis)、禽分支杆菌、禽分支杆菌(M.avium)，是引起人类以及畜禽结核，是引起人类以及畜禽结核病的病原体。这里只介绍病的病原体。这里只介绍结核分支杆菌结核分支杆菌。第5页，讲稿共33张，创作于星期三 一一 结核分支杆菌（结核分支杆菌（M.tuberculosis）1、形态与染色特性、形态与染色特性 细长略弯细长略弯,端钝园端钝园,0.41-4m，单个或分枝状排列，无荚膜、，单个或分枝状排列，无荚膜、无鞭毛、无芽胞。在陈旧的病灶无鞭毛、无芽胞。在陈旧的病灶和培养物中形态不典型，呈颗粒，和培养物中形态不典型，呈颗粒，串球，短棒，长丝形等。串球
4、，短棒，长丝形等。第6页，讲稿共33张，创作于星期三 一一 结核分支杆菌（结核分支杆菌（M.tuberculosis）结核杆菌常用结核杆菌常用萎萎-钠氏钠氏(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法染色，抗酸染色法染色，菌染成菌染成红红色色，其他非抗酸细菌及细胞等呈，其他非抗酸细菌及细胞等呈蓝蓝色色。第7页，讲稿共33张，创作于星期三 2、培养特性培养特性 专性需氧。营养要求高，在含专性需氧。营养要求高，在含蛋黄、蛋黄、马铃薯、甘油和天门冬素马铃薯、甘油和天门冬素等的固体培养等的固体培养基上才能生长。最适基上才能生长。最适pH6.5-6.8，最适，最适温度温度37，生长缓慢生长缓慢，接种后培养，
5、接种后培养3-4周周才出现肉眼可见菌落。才出现肉眼可见菌落。第8页，讲稿共33张，创作于星期三 2、培养特性培养特性 菌落干燥、坚硬、表面颗粒状、乳酪色菌落干燥、坚硬、表面颗粒状、乳酪色或黄色，或黄色，形似菜花形似菜花。液体培养呈粗糙皱纹状菌。液体培养呈粗糙皱纹状菌膜，加入水溶性脂肪酸膜，加入水溶性脂肪酸Tween-80，可降低结核，可降低结核杆菌表面的疏水性，使其呈杆菌表面的疏水性，使其呈均匀分散生长均匀分散生长，有，有利于药物敏感试验。利于药物敏感试验。第9页，讲稿共33张，创作于星期三 3、抵抗力抵抗力 n结核杆菌对某些理化因子抵抗力较强。结核杆菌对某些理化因子抵抗力较强。n在干痰中存活
6、在干痰中存活6-8个月；个月；n粘附于尘埃上，保持传染性粘附于尘埃上，保持传染性8-10d；n在在3%HCl或或NaOH溶液中耐受溶液中耐受30min，常以酸或碱，常以酸或碱处理污染的样品，以杀死杂菌，提高检出率；处理污染的样品，以杀死杂菌，提高检出率；n对湿热、紫外线、酒精抵抗力弱对湿热、紫外线、酒精抵抗力弱:液体加热液体加热62-63 15min，日光直射，日光直射2-3h，75%酒精数分钟即死亡。酒精数分钟即死亡。第10页，讲稿共33张，创作于星期三 4、变异性变异性n对链霉素、利福平、异烟肼等抗结核药物易产生耐药性。对链霉素、利福平、异烟肼等抗结核药物易产生耐药性。耐药菌株常伴随活力和
7、毒力减弱耐药菌株常伴随活力和毒力减弱，如异烟肼耐药菌株对豚鼠，如异烟肼耐药菌株对豚鼠的毒力消失，但对人仍有一定致病性。的毒力消失，但对人仍有一定致病性。n卡介菌卡介菌(Bacilli Calmette-Giierin,BCG)：卡：卡-介介（Calmette-Gerine）二氏将牛型结核杆菌培养于胆汁、甘）二氏将牛型结核杆菌培养于胆汁、甘油、马铃薯培养基，油、马铃薯培养基，经经230次传代，历时次传代，历时13年，年，其毒力发生其毒力发生变异，成为对人无致病性，而仍保持良好免疫性的菌株，变异，成为对人无致病性，而仍保持良好免疫性的菌株，接种人体后可获得对该菌的免疫力。接种人体后可获得对该菌的免
8、疫力。第11页，讲稿共33张，创作于星期三 5、致病因子致病因子n结核分支杆菌无内毒素、外毒素和侵袭性酶，其致病作用结核分支杆菌无内毒素、外毒素和侵袭性酶，其致病作用主要靠主要靠菌体成份菌体成份，特别是胞壁中所含的，特别是胞壁中所含的大量脂质大量脂质。脂质含量。脂质含量与结核杆菌的毒力相关，含量愈高毒力愈强。与结核杆菌的毒力相关，含量愈高毒力愈强。1、脂质（、脂质（Lipide）占菌体干重占菌体干重20-40%，胞壁干重的，胞壁干重的60%，主要是磷脂、脂肪酸和，主要是磷脂、脂肪酸和蜡质，大多与蛋白质或多糖结合成复合物。蜡质，大多与蛋白质或多糖结合成复合物。磷脂：刺激单核细胞增生，抑制蛋白酶的
9、分解作用，使病磷脂：刺激单核细胞增生，抑制蛋白酶的分解作用，使病灶组织溶解不完全，灶组织溶解不完全，形成干酪样坏死形成干酪样坏死。第12页，讲稿共33张，创作于星期三 脂肪酸：在脂质中比重较大，其中脂肪酸：在脂质中比重较大，其中6,6-二分枝酰二分枝酰-a,a-海澡糖海澡糖(6,6-Dimycocyl-a,a-D-trehalose)能能破坏细胞线粒体膜，毒破坏细胞线粒体膜，毒害微粒体酶类，抑制中性粒细胞游走和吞噬，引起慢性肉芽害微粒体酶类，抑制中性粒细胞游走和吞噬，引起慢性肉芽肿肿。具有该物质的结核杆菌毒株，在液体培养基中能紧密粘成。具有该物质的结核杆菌毒株，在液体培养基中能紧密粘成索状，称
10、为索状，称为索状因子索状因子(cordfactor)。蜡质蜡质D：为胞壁主要成分，是一种肽糖脂：为胞壁主要成分，是一种肽糖脂(Piptidoglycolipids)与分枝菌酸与分枝菌酸(My-colic acid)的复合物，的复合物，能引起能引起迟发型变态反应迟发型变态反应，并具有，并具有佐剂作用佐剂作用。第13页，讲稿共33张，创作于星期三 硫酸脑苷脂硫酸脑苷脂(salfatides)和硫酸多酰基化海澡糖和硫酸多酰基化海澡糖(Multiasiylated trehalose salfate)：存在于结核杆菌毒株胞壁，：存在于结核杆菌毒株胞壁，能能抑制吞噬细胞中的吞噬小体与溶酶体融合，使结核杆
11、菌在细胞内抑制吞噬细胞中的吞噬小体与溶酶体融合，使结核杆菌在细胞内存活存活。这类糖脂能结合中性红染料。产生中性红反应，借此可。这类糖脂能结合中性红染料。产生中性红反应，借此可鉴定结核杆菌的毒力。鉴定结核杆菌的毒力。2、蛋白质（、蛋白质（Protein）结核杆菌菌体内含数种蛋白质，重要的是结核菌素结核杆菌菌体内含数种蛋白质，重要的是结核菌素(tuberculin)，其与蜡质，其与蜡质D结合后，能结合后，能引起较强的迟发型变态反引起较强的迟发型变态反应应。蛋白质具免疫原性，但无保护作用。蛋白质具免疫原性，但无保护作用。第14页，讲稿共33张，创作于星期三3、多糖（、多糖（Polysuccharid
12、es）多糖常与脂质结合存在于胞壁中，主要有半乳糖，甘露醇、阿拉多糖常与脂质结合存在于胞壁中，主要有半乳糖，甘露醇、阿拉拍糖等。拍糖等。多糖可使中性粒细胞增多，引起病灶局部细胞浸润多糖可使中性粒细胞增多，引起病灶局部细胞浸润。4、核酸、核酸(Nucleic acid)核糖体核糖核酸核糖体核糖核酸(Ribonucleie acid ribosonic,rRNA)是本菌是本菌的免疫原，刺激机体产生的免疫原，刺激机体产生特异性细胞免疫特异性细胞免疫。第15页，讲稿共33张，创作于星期三 6、致病性致病性n结核杆菌的致病作用可能是细菌在组织细胞内顽结核杆菌的致病作用可能是细菌在组织细胞内顽强增殖引起的强
13、增殖引起的炎症反应炎症反应，以及诱导机体产生的迟，以及诱导机体产生的迟发型发型变态反应变态反应有关。有关。n结核杆菌可通过呼吸道、消化道和破损的皮肤粘结核杆菌可通过呼吸道、消化道和破损的皮肤粘膜进入机体，侵犯多种组织器官，引起相应器官膜进入机体，侵犯多种组织器官，引起相应器官的结核病，其中以的结核病，其中以肺结核肺结核最常见。动物则常见最常见。动物则常见内内脏脏（如肠道等）结核。（如肠道等）结核。第16页，讲稿共33张，创作于星期三 6、致病性致病性第17页，讲稿共33张，创作于星期三 7、免疫性免疫性 结核分支杆菌的结核分支杆菌的免疫原免疫原rRNA和和变应原结核菌素变应原结核菌素可诱发可诱
14、发机体产生由机体产生由T淋巴细胞介导的细胞免疫和迟发型变态反应。淋巴细胞介导的细胞免疫和迟发型变态反应。人类及动物对结核杆菌的感染率很高，但发病率却较人类及动物对结核杆菌的感染率很高，但发病率却较低，这表明机体感染结核杆菌可获得一定免疫力，其低，这表明机体感染结核杆菌可获得一定免疫力，其持持久性依赖于结核杆菌在机体内的活性久性依赖于结核杆菌在机体内的活性，一旦体内结核杆菌消失，一旦体内结核杆菌消失，抗结核免疫力也随之消失，这种免疫称为抗结核免疫力也随之消失，这种免疫称为有菌免疫有菌免疫或或传染性传染性免疫免疫(Infection immunify)。第18页，讲稿共33张，创作于星期三 8、微
15、生物诊断微生物诊断肺炎结核最好取早晨第一次肺炎结核最好取早晨第一次咯痰咯痰；肾或膀胱结核以；肾或膀胱结核以无菌导尿无菌导尿；肠结核采肠结核采粪便粪便，结核性脑膜炎取脑脊液；胸膜炎、腹膜炎或，结核性脑膜炎取脑脊液；胸膜炎、腹膜炎或骨髓结核等则骨髓结核等则穿刺取脓汁穿刺取脓汁。1、涂片染色、涂片染色 咯痰可直接涂片。用抗酸染色法，若镜检找到抗酸性杆咯痰可直接涂片。用抗酸染色法，若镜检找到抗酸性杆菌，可能是结核杆菌，菌，可能是结核杆菌，单凭形态染色不能确定是结核杆菌，单凭形态染色不能确定是结核杆菌，需进一步分离培养鉴定需进一步分离培养鉴定。标本中结核杆菌量少时应浓缩集菌后。标本中结核杆菌量少时应浓缩
16、集菌后再涂片染色镜检，以提高阳性检出率。再涂片染色镜检，以提高阳性检出率。第19页，讲稿共33张，创作于星期三 无菌直接采取的无菌直接采取的脑脊液和导尿脑脊液和导尿可直接离心集菌。可直接离心集菌。咯痰和粪便咯痰和粪便标标本需用本需用4%NaOH或或3%HCl或或6%H2SO4处理，然后用离心沉淀集处理，然后用离心沉淀集菌作抗酸染色检查、分离培养或动物试验。菌作抗酸染色检查、分离培养或动物试验。第20页，讲稿共33张，创作于星期三 2、分离培养、分离培养 结核分支杆菌生长缓慢，培养期长，当接种于固体培养基上（如青霉结核分支杆菌生长缓慢，培养期长，当接种于固体培养基上（如青霉素血液琼脂），以蜡封口
17、防止干燥。素血液琼脂），以蜡封口防止干燥。37培养培养4-6周后检查，该菌生长缓周后检查，该菌生长缓慢，慢，菌落干燥、颗粒状、乳酪色，菜花状菌落干燥、颗粒状、乳酪色，菜花状。3、动物试验、动物试验 常用常用豚鼠或地鼠豚鼠或地鼠鉴别疑似结核杆菌的分离培养物和其毒力。取浓缩鉴别疑似结核杆菌的分离培养物和其毒力。取浓缩集菌标本集菌标本1ml注射于豚鼠腹股沟皮下，经注射于豚鼠腹股沟皮下，经3-4周饲养观察，如出现局部淋巴周饲养观察，如出现局部淋巴结肿大，消瘦或结核菌素试验阳性，可及时剖检，注意观察结肿大，消瘦或结核菌素试验阳性，可及时剖检，注意观察淋巴结、淋巴结、肝、脾、肺肝、脾、肺等脏器有无结核病变
18、。等脏器有无结核病变。4、变态反应、变态反应 我国常用皮内法和点眼法，我国常用皮内法和点眼法，皮内法皮内法4mm以上为阳性；以上为阳性；2-4mm为可疑；为可疑；2mm以下为阴性。以下为阴性。可检出可检出9598%的结核病牛。的结核病牛。第21页，讲稿共33张，创作于星期三 9、预防、预防1、预防接种、预防接种 卡介苗接种是预防结核病的有效措施之一，广泛接种卡介苗能大大地降低卡介苗接种是预防结核病的有效措施之一，广泛接种卡介苗能大大地降低结核病的发病率。结核病的发病率。2、治疗、治疗 人类结核病的治疗在于控制疾病，促使病灶愈合，消除症状和防止人类结核病的治疗在于控制疾病，促使病灶愈合，消除症状
19、和防止复发。常用的药物有链霉素、对氨水杨酸钠、利福平、乙胺丁醇等。复发。常用的药物有链霉素、对氨水杨酸钠、利福平、乙胺丁醇等。各种抗结核药物如合并应用，有协同作用，且能降低耐药性的产生，减少各种抗结核药物如合并应用，有协同作用，且能降低耐药性的产生，减少毒性毒性。因耐药菌株出现较多，因此由病人体内人分离的结核菌株在。因耐药菌株出现较多，因此由病人体内人分离的结核菌株在治疗过程中应作治疗过程中应作药敏试验药敏试验。3、定期检测、定期检测 动物发病或检测阳性后一般不治疗，直接淘汰作无害化处理。动物发病或检测阳性后一般不治疗，直接淘汰作无害化处理。第22页，讲稿共33张，创作于星期三第23页，讲稿共
20、33张，创作于星期三 第第2节节 放线菌属放线菌属（Actinomyces）n是处于细菌和真菌之间的一群单细胞微生物，具有分支的细丝状是处于细菌和真菌之间的一群单细胞微生物，具有分支的细丝状菌丝；广泛存在于自然界，特别是土壤；菌丝；广泛存在于自然界，特别是土壤；n在自然界物质转化中起作用，许多抗生素都是由放线菌产生在自然界物质转化中起作用，许多抗生素都是由放线菌产生的（如链霉素、土霉素等）的（如链霉素、土霉素等）;n已知的病原菌有已知的病原菌有牛放线菌和依氏放线菌牛放线菌和依氏放线菌。第24页，讲稿共33张，创作于星期三放线菌属放线菌属1.形态与染色特性形态与染色特性 nG-，长短不一，多数为
21、分，长短不一，多数为分支状细菌丝组成的菌丝体；支状细菌丝组成的菌丝体；n菌丝横径约菌丝横径约12m，无隔，无隔膜，不具核膜；膜，不具核膜；n无运动性，无芽胞，非抗酸无运动性，无芽胞，非抗酸性。性。第25页，讲稿共33张，创作于星期三2.生理特性生理特性n厌氧或微需氧厌氧或微需氧(厌氧培厌氧培养时需养时需CO2)；n最适生长温度为最适生长温度为3032，致病性放线，致病性放线菌在菌在3740也生长也生长良好；良好；n中性偏碱中性偏碱pH环境适于环境适于生长；生长；n发酵葡萄糖、接触酶阴性、发酵葡萄糖、接触酶阴性、氧化酶阴性。氧化酶阴性。第26页，讲稿共33张，创作于星期三3.繁殖繁殖n断裂繁殖断
22、裂繁殖从菌从菌丝断片形成新的菌丝断片形成新的菌丝体；丝体；n孢子形成孢子形成主要主要繁殖方式繁殖方式第27页，讲稿共33张，创作于星期三4.致病性及其他特性致病性及其他特性n能致病的很少；已知的病原菌主能致病的很少；已知的病原菌主要有要有牛放线菌和依氏放线菌牛放线菌和依氏放线菌，引，引起牛、猪的放线菌病（以颌骨多起牛、猪的放线菌病（以颌骨多见）。见）。n对青霉素、链霉素、四环素、头对青霉素、链霉素、四环素、头孢霉素和林肯霉素敏感，可用于孢霉素和林肯霉素敏感，可用于治疗。治疗。第28页，讲稿共33张，创作于星期三 第第3节节 棒状杆菌属（棒状杆菌属（Corynebacterium）白喉杆菌白喉杆
23、菌(C.diphtheria):引起人类白喉的病原菌。引起人类白喉的病原菌。1、形态染色：、形态染色：G+细长杆菌，美兰染色两端有异染颗粒细长杆菌，美兰染色两端有异染颗粒(极体极体)。第29页，讲稿共33张，创作于星期三白喉杆菌白喉杆菌2、培养特性：需血清或血液，生长快，亚碲酸钾、培养特性：需血清或血液，生长快，亚碲酸钾琼脂上长成琼脂上长成黑色菌落黑色菌落。3、抵抗力：对干燥、寒冷和日光的抵抗力较其他、抵抗力：对干燥、寒冷和日光的抵抗力较其他无芽胞菌强；对热和消毒剂抵抗力较弱。无芽胞菌强；对热和消毒剂抵抗力较弱。4、致病与免疫、致病与免疫 （1）致病性）致病性 致病物质：侵袭力（白喉索状因子）
24、、外毒素毒性强，由致病物质：侵袭力（白喉索状因子）、外毒素毒性强，由A和和B两个片段组成，两个片段组成，A片段有毒，片段有毒，B片段无毒，起辅助作用片段无毒，起辅助作用。第30页，讲稿共33张，创作于星期三4、致病与免疫、致病与免疫 可引起人类白喉，易感者主要是儿童。可引起人类白喉，易感者主要是儿童。（2）免疫性：抗毒性免疫）免疫性：抗毒性免疫(IgG)，白喉痊愈后机体可获得牢固的免，白喉痊愈后机体可获得牢固的免疫力。疫力。第31页，讲稿共33张，创作于星期三白喉杆菌白喉杆菌5、微生物学诊断、微生物学诊断 （1）标本采取）标本采取:鼻咽拭子鼻咽拭子（2）直接涂片镜检）直接涂片镜检（3）分离培养鉴定）分离培养鉴定 6、防治原则、防治原则 （1）防）防类毒素自动免疫，抗毒素紧急预防。类毒素自动免疫，抗毒素紧急预防。（2）治）治抗毒素加抗生素。抗毒素加抗生素。第32页，讲稿共33张，创作于星期三感感谢谢大大家家观观看看第33页，讲稿共33张，创作于星期三