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1、 实验实验 九九 土壤样品中微生物的分离与纯化 结果观察 各类微生物统计各类微生物统计：（：（CFU/gCFU/g）放线菌放线菌 细菌细菌 霉菌霉菌 第1页/共30页第2页/共30页第3页/共30页菌落计数菌落计数1.1.单个菌落单个菌落;2.;2.菌落数量菌落数量;3.;3.分布状况分布状况.3583510-510-63523633338(p208 页)第4页/共30页例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比菌落总数（CFUCFU/mL）报告方式（CFUCFU/mL）10-110-210-311360164201640016000或1.610422760295461.637750380
2、00或3.810432890271602.22710027000或2.71044无法计数4651513513000510000或5.1105527115270270或2.71026无法计数305123050031000或3.1104每毫升每毫升(g)(g)样品中菌落形成单位样品中菌落形成单位(CFU)(CFU)(p208,p33 页)=同一稀释度同一稀释度3 3次重复的平均菌落数次重复的平均菌落数 稀释倍数稀释倍数 10 10 第5页/共30页结果与分析（p34）1.（1）计数原则（p208）根根据据平平皿皿上上菌菌落落数数与与平平皿皿内内土土壤壤悬悬液液的的稀稀释释倍倍数数算算得得每每g土壤
3、中微生物的数量；土壤中微生物的数量；比较不同生境微生物组成和数量；比较不同生境微生物组成和数量；选择刚好能把细菌分开，而稀释倍数最低的平板（一般含菌落30300个）计算每克土样中微生物的数量思考题 为为什什么么在在放放线线菌菌计计数数时时要要加加入入10的的苯苯酚酚？而而在在霉霉菌菌计计数数时时要要加加入入几几滴滴80的的乳乳酸酸？如如果果要要用用牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨培培养养基基从从环环境境中中分分离离抗抗氨氨苄苄青青霉霉素素的的微微生生物物，应应该该如如何何进进行？行？第6页/共30页连续划线连续划线放射划线放射划线分区划分区划线线细菌分离细菌分离平板划线平板划线p32第7页/共30页
4、放线菌的形态结构（玻璃纸法）放线菌的形态结构（玻璃纸法）几种常见霉菌形态结构的观察几种常见霉菌形态结构的观察第8页/共30页第9页/共30页放线菌的形态观察放线菌的形态观察v 菌丝体菌丝体 基内菌丝基内菌丝 气生菌丝气生菌丝 孢子丝孢子丝v 孢子孢子 第10页/共30页第11页/共30页放线菌形态观察方法放线菌形态观察方法 插片法插片法 玻璃纸法：玻璃纸法：玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。印片
5、法印片法 试管直接观察法试管直接观察法第12页/共30页第13页/共30页第14页/共30页霉菌的形态观察霉菌的形态观察菌菌 丝丝 营养菌丝营养菌丝 粗细,足细胞,假根,隔膜 单核多核 气生菌丝气生菌丝 孢子梗,孢子囊 孢子孢子生长繁殖方式生长繁殖方式第15页/共30页第16页/共30页 根霉根霉(Rhizopus)毛霉毛霉(Mucor)曲霉曲霉(Aspergillus)青霉青霉(Penicillium)霉菌的形态观察霉菌的形态观察第17页/共30页根酶第18页/共30页第19页/共30页毛霉属：无匍匐菌丝、假根和囊托；犁头霉属和根霉属：有匍匐菌丝、假根和囊托；犁头霉属：孢囊梗不与假根相对，孢
6、子囊梨形；第20页/共30页曲霉第21页/共30页Aspergillus第22页/共30页第23页/共30页青霉第24页/共30页霉菌的形态观察方法霉菌的形态观察方法t 插片法插片法 t 玻璃纸法玻璃纸法 t 印片法印片法 t 试管直接观察法试管直接观察法 第25页/共30页 直接制片观察霉菌 在载玻片上加1d乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从菌落边缘处，挑取少量菌丝（或取很薄的一层切片），先于50%乙醇中浸一下，洗去脱落的孢子，再放在载玻片上的染液中，用解剖针将菌丝分开。盖上盖玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观察。第26页/共30页第27页/共30页结果结果 绘图说明绘图说明放线菌与霉菌自然生长状态的个体形放线菌与霉菌自然生长状态的个体形态特征。态特征。思考题思考题 怎样才能怎样才能在显微镜下在显微镜下观察到自然生长状态观察到自然生长状态的的 放线菌放线菌与与丝状真菌？丝状真菌？第28页/共30页 下下 次次 实实 验验 实验实验11.11.平板菌落计数法平板菌落计数法实验实验12.12.光电比浊计数光电比浊计数实验实验13.13.直接计数法直接计数法(显微镜显微镜)第29页/共30页感谢您的观看！第30页/共30页