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1、第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术第第1节节蛋白蛋白质质的提取和分离的提取和分离新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术学习导航学习导航1.知道蛋白知道蛋白质质分离和提取技分离和提取技术术的基本原理。的基本原理。2.尝试尝试蛋白蛋白质质的提取和分离。的提取和分离。重、重、难难点点新知初探新知初探思维启动思
2、维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术新知初探思维启动新知初探思维启动一、蛋白一、蛋白质质分离提分离提纯纯技技术术1.将将生生物物体体内内的的蛋蛋白白质质提提取取出出来来并并加加以以分分离离，就就可可以以得得到到高高纯纯度度的的、甚甚至至是是_的的蛋白蛋白质质。2.包括离心技包括离心技术术、层层析技析技术术和和电电泳技泳技术术等。其等。其中，中，_技技术术最最为为快捷灵敏、快捷灵敏、简简便易行。便易行。单单一种一种类类电电泳泳新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺
3、冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术二、二、电电泳技泳技术术及分离蛋白及分离蛋白质质的原理的原理1.电电泳泳现现象象：作作为为带带电电粒粒子子，蛋蛋白白质质在在电电场场中中可可以以向向与与其其自自身身所所带带电电荷荷_的的电电极极方方向移向移动动。2.电电泳技泳技术术分离蛋白分离蛋白质质的原理的原理(1)蛋蛋白白质质含含有有游游离离的的氨氨基基和和羧羧基基，是是_电电解解质质，在一定，在一定pH条件下条件下带带有有电电荷。荷。相反相反两性两性新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术(2
4、)蛋白蛋白质质在在电场电场中可以向与其自身所中可以向与其自身所带电带电荷荷_的的电电极方向移极方向移动动。(3)蛋蛋白白质质所所带带的的电电荷荷数数越越多多，移移动动得得_；电电荷数相同荷数相同时时，分子量，分子量_，则则移移动动越快。越快。三、三、“血清蛋白的提取和分离血清蛋白的提取和分离”活活动动程序程序1.点点样样：将新制血清将新制血清5 L、质质量量浓浓度度为为0.4 g/mL的的_和和质质量分数量分数为为0.1%的的_指示指示剂剂等体等体积积混匀后，用微量加混匀后，用微量加样样器吸取器吸取5 L样样品，小心加到品，小心加到电电泳泳样样品槽的胶面上。品槽的胶面上。相反相反越快越快越小越
5、小蔗糖溶液蔗糖溶液溴酚溴酚蓝蓝新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术2.电电泳泳3.染染 色色：用用 质质 量量 分分 数数 为为 0.05%的的_染色液染色液对对凝胶凝胶进进行染色。行染色。4.脱脱色色：用用体体积积分分数数为为7%的的_对对凝凝胶板胶板进进行浸泡漂洗数次，直至底色脱行浸泡漂洗数次，直至底色脱净净。5.制干胶板：制干胶板：将已将已_的凝胶板放在的凝胶板放在_中浸泡中浸泡3 h4 h后，放在两后，放在两层层透气的透气的_中中间间自然干燥。自然干燥。考考马马斯亮斯亮蓝蓝R250醋
6、酸溶液醋酸溶液脱色脱色保存液保存液玻璃玻璃纸纸新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术判一判判一判(1)蛋蛋白白质质和和DNA都都可可以以用用电电泳泳的的方方法法进进行行分分离离纯纯化。化。()(2)在在同同一一个个电电场场电电泳泳后后，在在凝凝胶胶中中形形成成的的一一个个带纹带纹就是一种就是一种单纯单纯蛋白蛋白质质。()(3)在在电电泳泳时时，应应先先将将稳稳压压稳稳流流电电泳泳仪仪调调到到2030 mA，再使，再使样样品品进进入分离胶。入分离胶。()(4)分离操作正确的前提下，如果分离操作正
7、确的前提下，如果带纹带纹均匀、均匀、狭窄、平整，狭窄、平整，则说则说明分离效果比明分离效果比较较好。好。()新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术四、其他蛋白四、其他蛋白质质的提取与分离的提取与分离1.牛奶中酪蛋白的提取与牛奶中酪蛋白的提取与检测检测(1)当当pH_时时，酪酪蛋蛋白白的的溶溶解解度度降降低低，并并析析出出沉沉淀淀。用用_除除去去酪酪蛋蛋白白沉沉淀淀中中的的_后，即得到后，即得到纯纯的酪蛋白。的酪蛋白。(2)酪蛋白中含有酪氨酸，能与酪蛋白中含有酪氨酸，能与_试剂试剂起起颜颜色反色
8、反应应，首先生成白色沉淀，加，首先生成白色沉淀，加热热后后变变成成红红色。色。4.8酒精酒精脂肪脂肪米米伦伦新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术2.卵清蛋白卵清蛋白质质的分离的分离选选取取鸡鸡、鸭鸭、鹅鹅、鹌鹑鹌鹑等等动动物的新物的新鲜鲜_做做实验实验材料。采用材料。采用_法分离卵清蛋白法分离卵清蛋白质质。卵清卵清电电泳泳新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术想一想想一想可可否否利利用用蛋蛋
9、白白质质的的提提取取与与分分离离技技术术快快速速诊诊断断早期癌早期癌变变？【提示提示】可以。只需从早期患者的尿液、可以。只需从早期患者的尿液、血液或血液或细细胞裂解液中提取少量蛋白胞裂解液中提取少量蛋白质样质样品品,采采用蛋白用蛋白质质指指纹图谱纹图谱技技术术，就可以更加快速、，就可以更加快速、简简便、准确地便、准确地对细对细胞癌胞癌变变作出作出诊诊断。断。新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术要点突破讲练互动要点突破讲练互动要点一要点一电电泳的常用方法泳的常用方法1.琼琼脂糖凝胶脂糖凝胶电电
10、泳：泳：由于由于琼琼脂糖本身不脂糖本身不带电带电荷，所以，各种分子在荷，所以，各种分子在电场电场中的迁移速率因中的迁移速率因各种分子的各种分子的带电带电性性质质差异、分子大小、形状差异、分子大小、形状不同而不同，从而得以分离。不同而不同，从而得以分离。新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术2.聚丙聚丙烯酰烯酰胺凝胶胺凝胶电电泳泳(1)凝胶形成：凝胶形成：新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术(
11、2)加入加入SDS作用：使蛋白作用：使蛋白质发质发生完全生完全变变性，性，解聚成解聚成单单条条肽链肽链；与各种蛋白；与各种蛋白质质形成蛋白形成蛋白质质SDS复合物，复合物，SDS所所带负电带负电荷的量荷的量远远远远超超过过了蛋白了蛋白质质分子原有分子原有电电荷量，掩盖了不同蛋白荷量，掩盖了不同蛋白质间质间的的电电荷差荷差别别，使，使电电泳迁移率完全取决于泳迁移率完全取决于分子的大小。分子的大小。新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术3.结结果分析果分析(1)不不同同蛋蛋白白质质的的混混合合溶溶
12、液液，在在经经过过同同一一个个电电场场电电泳泳后后，会会在在凝凝胶胶上上形形成成不不同同的的带带纹纹，每每一种一种带纹带纹可能就是一种蛋白可能就是一种蛋白质质。(2)如果要如果要对对每一条每一条带纹带纹作作进进一步的研究，只一步的研究，只需将需将带纹带纹剪下，分剪下，分别别予以洗脱，然后予以洗脱，然后对对洗脱洗脱液中的蛋白液中的蛋白质质做做进进一步分离。一步分离。新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术特特别别提提醒醒琼琼脂脂糖糖凝凝胶胶电电泳泳操操作作简简单单，电电泳速度快，泳速度快，样样品不
13、需事先品不需事先处处理。理。琼琼脂脂糖糖凝凝胶胶电电泳泳后后区区带带易易染染色色，样样品品极极易易洗脱，便于定量洗脱，便于定量测测定。定。测测定蛋白定蛋白质质相相对对分子分子质质量通常用量通常用SDS聚聚丙丙烯酰烯酰胺凝胶胺凝胶电电泳，原因是在一定泳，原因是在一定浓浓度范度范围围内聚丙内聚丙烯酰烯酰胺的胺的热稳热稳定性定性强强，可用，可用检测仪检测仪直直接接测测定。定。新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术 关于关于电电泳的泳的说说法不正确的是法不正确的是()A电电泳泳是是指指带带电电粒粒子子
14、在在电电场场的的作作用用下下发发生生迁迁移的移的过过程程B带带电电分分子子会会向向着着与与其其所所带带电电荷荷相相反反的的电电极极移移动动C蛋蛋白白质质在在聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶中中的的迁迁移移率率取取决决于它所于它所带净电带净电荷的多少荷的多少D用用SDS聚丙聚丙烯酰烯酰胺凝胶胺凝胶电电泳，蛋白泳，蛋白质质的的电电泳迁移率完全取决于分子的大小泳迁移率完全取决于分子的大小例例1新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术【解解析析】蛋蛋白白质质在在聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶中中的的迁迁移移率
15、率取取决决于于它它所所带带净净电电荷荷的的多多少少以以及及分分子子的的大大小小等等因因素素，SDS能能与与各各种种蛋蛋白白质质形形成成蛋蛋白白质质SDS复复合合物物，SDS所所带带负负电电荷荷的的量量大大大大超超过过了了蛋蛋白白质质分分子子原原有有的的电电荷荷量量，因因而而掩掩盖盖了了不不同同种种蛋蛋白白质质间间的的电电荷荷差差异异，使使电电泳泳迁迁移移率率完全取决于分子的大小。完全取决于分子的大小。【答案答案】C新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术变变式式训练训练在在蛋蛋白白质质的的分分离
16、离提提纯纯技技术术中中，最最为为简简捷捷灵灵敏敏的是的是()A离心技离心技术术B层层析技析技术术C电电泳技泳技术术 D盐盐析析解析：解析：选选C。常用的蛋白。常用的蛋白质质分离提分离提纯纯技技术术，包括离心技包括离心技术术、层层析技析技术术和和电电泳技泳技术术等，其等，其中中电电泳技泳技术术最最为为快捷灵敏、快捷灵敏、简简便易行。便易行。盐盐析析可用来提取蛋白可用来提取蛋白质质，而不能分离蛋白，而不能分离蛋白质质。新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术要点二要点二实验实验中中应应注意的一些注意
17、的一些问题问题1.由由于于制制备备凝凝胶胶的的丙丙烯烯酰酰胺胺和和双双丙丙烯烯酰酰胺胺具具有有很很强强的的神神经经毒毒性性，并并且且容容易易被被皮皮肤肤吸吸收收，因因此操作必此操作必须须在通在通风风橱内或通橱内或通风处进风处进行。行。2.将将电电泳凝胶片放在考泳凝胶片放在考马马斯亮斯亮蓝蓝R250染色液中染色液中染包染包30 min后后,多次更多次更换换脱色液至背景清晰。脱色液至背景清晰。脱色后，可将凝胶浸于保存液中，脱色后，可将凝胶浸于保存液中，长长期封装期封装在塑料袋内使其不会降低染色在塑料袋内使其不会降低染色强强度。度。为为保存保存永久性永久性记录记录，可，可对对凝胶凝胶进进行拍照，或将
18、凝胶行拍照，或将凝胶干燥成胶片。干燥成胶片。新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术 有有A、B、C三种蛋白三种蛋白质质，在，在pH为为7的条的条件下件下进进行行电电泳，泳，结结果如果如图图所示：所示：例例2新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术请请据据图图回答：回答：(1)在在 pH为为 7时时，带带 电电 荷荷 数数 最最 多多 的的 是是_，最最少少的的是是_。原因是原因是_。新知初探新知
19、初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术(2)带带相相同同电电荷荷数数的的C蛋蛋白白质质和和另另一一种种D蛋蛋白白质质在在电电泳泳时时，常常稍能分开，常常稍能分开，请请分析原因。分析原因。_新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术【思路点思路点拨拨】本本题题考考查查蛋白蛋白质电质电泳技泳技术术的的原理及原理及应应用，解答本用，解答本题题的关的关键键有以下两点：有以下两点：关键点关键点电电泳泳时时蛋蛋白白质质所
20、所带带电电荷荷数数影影响响蛋蛋白白质质的的移移动速率。动速率。蛋蛋白白质质的的相相对对分分子子质质量量也也影影响响蛋蛋白白质质的的移移动速率。动速率。新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术【解析解析】蛋白蛋白质质所所带电带电荷数越多，移荷数越多，移动动越越快，快，A蛋白蛋白质质距离原点最距离原点最远远，C最近，所以最近，所以A带电带电荷数最多，荷数最多，C带电带电荷数最少。荷数最少。电电荷数相同荷数相同时时，相，相对对分子分子质质量越小，量越小，则则移移动动越快。越快。C和和D两种蛋白两种蛋白
21、质带电质带电荷数相同，移荷数相同，移动动速度接近，速度接近，说说明两者相明两者相对对分子分子质质量大小相近，所以量大小相近，所以电电泳泳时时稍能分开。稍能分开。新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术【答答案案】(1)AC在在一一定定pH条条件件下下，蛋蛋白白质质所所带带的的电电荷荷数数越越多多，移移动动得得越越快快，A蛋蛋白白质质距离原点最距离原点最远远，C蛋白蛋白质质距离原点最近距离原点最近(2)在在进进行行电电泳泳时时，若蛋白，若蛋白质带质带相同的相同的电电荷数荷数,相相对对分子分子质质量
22、越小量越小,则则移移动动越快。越快。应该应该是由于是由于C蛋白蛋白质质和和D蛋白蛋白质质相相对对分子分子质质量大小相近，量大小相近，移移动动速度差速度差别别不大，所以稍能分开不大，所以稍能分开新知初探新知初探思维启动思维启动要点突破要点突破讲练互动讲练互动知能演练知能演练轻巧夺冠轻巧夺冠第六章第六章 蛋白质和蛋白质和DNA技术技术互互动动探究探究(1)如如果果A、B、C三三种种蛋蛋白白质质的的相相对对分分子子质质量量相同，相同，则则所所带电带电荷数哪个最多？哪个最少？荷数哪个最多？哪个最少？(2)如如果果A、B、C三三种种蛋蛋白白质质所所带带电电荷荷数数相相同同,则则其相其相对对分子分子质质量哪个最大？哪个最小？量哪个最大？哪个最小？【提示提示】(1)A、C。(2)C、A。