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1、第一章 实验室设备和一般技术 实验室是细胞工程研究的主实验室是细胞工程研究的主要场所，应能满足清洗、培养基要场所，应能满足清洗、培养基制备、储藏、无菌操作、培养、制备、储藏、无菌操作、培养、鉴定等多方面的工作需要。鉴定等多方面的工作需要。第一节 实验室设计v洗涤间洗涤间v培养基配制间培养基配制间v消毒间消毒间v无菌操作间无菌操作间v培养室培养室v鉴定室鉴定室洗涤间v面积面积:30-50m:30-50m2 2v配置：在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，配置：在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2 2个水个水槽，用于清洗小型玻璃器
2、皿。如果工作量大，槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。准备可以购置一台洗瓶机。准备1-21-2个洗液缸，专门个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等，地面应耐湿并排水良好。器等，地面应耐湿并排水良好。超声波清洗机全自动洗瓶机培养基配制间培养基配制间 v面积面积6060平方米左右平方米左右v配备的主要仪器设备有配备的主要仪器设备有 ：冰箱、天平、微波炉、：冰箱、天平、微波炉、pHpH计、计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各
3、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。量瓶、储藏瓶等。v冰箱以体积冰箱以体积180-200L180-200L为宜为宜(最好冷藏容积大于冷冻容积）最好冷藏容积大于冷冻容积），用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩，用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。色胶卷、及保存植物材料。v天平应有不同感量。天平应有不同感量。消毒间消毒间 v配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭
4、菌锅的选择应根据不设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。可选用大型的卧式灭菌锅。如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间要个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防
5、滑。宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。无菌操作室（接种室）无菌操作室（接种室）v通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要应当
6、用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。穿上消过毒的工作服和拖鞋。v室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。器械等。培养室培养室 v为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要
7、分两间，一为光照培养室，一为暗培养铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。室。培养室外应有一预备间或走廊。v培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W40W，固定在，固定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在离在20cm20cm，光照强度为，光照强度为2000-3000lx2000-3000lx。辅助实验室v鉴定室鉴定室v温室温室鉴定室v细胞学鉴定室细胞学鉴定室 其功能是
8、对培养材料进行细胞其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。应配置各种种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、照相系统等。显微镜、照相系统等。v生化分析室生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。离心机、酶联免疫检测仪、天平、离心机、酶联免疫检测仪、天平、PCRPCR仪等。仪等。温室v为试管苗提供满足生长的适宜
9、环境条件。为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。第二节 常用设备和器材v准备室装置：水纯化装置准备室装置：水纯化装置 超声波清洗器超声波清洗器 蒸汽蒸汽压力消毒器压力消毒器 电热干燥箱电热干燥箱 过滤除菌装置过滤除菌装置 v操作室装置：超净工作台操作室装置：超净工作台 移液器移液器v培养室装置：培养箱培养室装置：培养箱 摇床摇床v检测设备：显微镜检测设备：显微镜 显微操作仪显微操作仪 血球计数板血球计数板v细胞冷冻存储设备细胞冷冻存储设备一、水纯化装置v 细胞培养对水的要求：纯水(重蒸水、三蒸水）v蒸馏式水纯化装置v过滤式水纯化装置二、超声波清洗器v原理：利用超声波在液体中的“空化”作用，使污物
10、剥落。三、蒸汽压力消毒器v作用：灭菌v种类：手提式、卧式、立式v手提式灭菌锅操作步骤：v注水装锅加热排冷气到规定气压时维持灭菌时间自然降温开阀取物四、电热干燥箱v作用：烘干、干热灭菌v使用方法：五、过滤除菌装置v玻璃漏斗式滤器vZeiss滤器v针头式滤器v正压式金属滤器六、超净工作台v作用：v分类：v结构组成：鼓风机、滤板、操作空间、照明设备、灭菌设备v使用七、培养箱v光照培养箱v人工气候箱八、摇床作用：九、移液器v单通道移液器v多通道移液器v连续加样器v电动加样器十、显微镜v体视显微镜v透射显微镜v倒置显微镜v荧光显微镜v相差显微镜十一、细胞冷冻存储设备第三节 常用器皿选择及清洗 v一、器皿
11、选择v二、器皿清洗1、培养用器皿v培养皿v培养瓶v培养板2 金属器械v镊子v剪刀v解剖刀v接种针二、常用器材的清洗v1玻璃器材的清洗v2橡胶制品的清洗v3除菌滤器的清洗v4塑料器皿的清洗v5金属器械的清洗v6常用洗涤液的种类和配制方法1玻璃器材的清洗主要包括培养瓶、试管、培养皿、移液管的清洗v新玻璃器材的清洗：浸泡刷洗浸酸冲洗蒸馏水冲洗v使用过的玻璃器材的清洗浸泡刷洗v注意：1.量器不可刷洗 2.有毒物容器处理2橡胶制品的清洗v新橡胶制品清洗：碱煮沸冲洗酸煮沸冲洗自来水煮沸蒸馏水冲洗烘干v使用过的胶塞按照玻璃器材方法清洗3除菌滤器的清洗v新的G6除菌滤器的清洗 清洁液中浸泡24h流水冲洗至pH
12、5.54倍体积蒸馏水缓慢冲洗三蒸水冲洗烤干包装消毒v用过的G6除菌滤器的清洗 立即浸泡水中过夜流水冲洗24h滤面基本疏通时50烤干清洁液中浸泡24h流水冲洗至pH5.54倍体积蒸馏水缓慢冲洗三蒸水冲洗烤干包装消毒v蔡式滤器清洗4塑料器皿的清洗v注意：防止划痕，防止附着物干结v过程：脱脂棉擦拭流水冲洗晾干2%NaOH浸泡过夜自来水冲洗5%盐酸浸泡30min自来水冲洗蒸馏水冲洗5金属器械的清洗v金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤（新的可金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤（新的可以用热洗衣粉水洗净），需要清洗时，一般用以用热洗衣粉水洗净），需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。酒精擦洗，然后火焰干燥。6常用洗涤液的种类和配制方法v铬酸洗液v浓盐酸v5%草酸溶液v5-10%EDTANa2溶液v尿素洗涤液v有机溶剂本章思考题v细胞工程实验室由哪些房间组成，基本布局怎细胞工程实验室由哪些房间组成，基本布局怎样？样？v设计无菌操作室应考虑哪些因素？设计无菌操作室应考虑哪些因素？v细胞工程常用的设备有哪些？细胞工程常用的设备有哪些？v新买玻璃器皿应怎样洗涤？新买玻璃器皿应怎样洗涤？v橡胶制品应怎样清洗？橡胶制品应怎样清洗？