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1、第五章第五章 中药制剂中各类化学成分分析中药制剂中各类化学成分分析药物分析学科掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、醌类成掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、醌类成分的定性、定量原理与方法。分的定性、定量原理与方法。熟悉中药制剂中挥发性成分、木质素类成分的定性、熟悉中药制剂中挥发性成分、木质素类成分的定性、定量原理与方法。定量原理与方法。了解其他成分（有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、了解其他成分（有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、单萜及二萜类、多糖类）的分析方法。单萜及二萜类、多糖类）的分析方法。【目的要求目的要求】药物分析学科第五章第五章 中药制剂中各类化学成分分析中药制剂中各类化学成分分析
2、学习方法学习方法结构结构 性质性质 分析方法分析方法结构：母核、官能团、分子量等结构：母核、官能团、分子量等物理化学性质：溶解性、酸碱性、挥发性、氧化还原性、物理化学性质：溶解性、酸碱性、挥发性、氧化还原性、旋光性、光谱特性等旋光性、光谱特性等分析方法：分析方法：总类成分：化学分析法、分光光度法总类成分：化学分析法、分光光度法单一成分：各种色谱法（单一成分：各种色谱法（GC、HPLC、HPCE、TLCS、SFC等）等）药物分析学科一、概述一、概述1、概念：生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合物（如、概念：生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合物（如氨基酸、蛋白质和氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之
3、外的所有含氮有机化合族维生素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性碱性。2、含生物碱成分的常用中药：、含生物碱成分的常用中药：第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析中药名称中药名称主要生物碱成分主要生物碱成分 中药名称中药名称 主要生物碱成分主要生物碱成分 山豆根山豆根制川乌制川乌 马钱子马钱子延胡索延胡索苦参碱、氧化苦参碱、苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、金雀花碱槐果碱、金雀花碱乌头碱乌头碱、次乌头碱、次乌头碱、新乌头碱新乌头碱马钱子碱、番木鳖碱马钱子碱、番木鳖碱（士的宁）、（士的宁）、伪马钱子伪马钱子碱
4、、伪番木鳖碱碱、伪番木鳖碱延胡索乙素、延胡索甲延胡索乙素、延胡索甲素、素、原阿片碱、黄连碱原阿片碱、黄连碱 苦苦 参参麻麻 黄黄黄黄 连连黄黄 柏柏防防 己己苦参碱、苦参碱、槐定碱、槐果碱、槐定碱、槐果碱、氧化苦参碱氧化苦参碱麻黄碱、伪麻黄碱、麻黄碱、伪麻黄碱、去甲麻去甲麻黄碱、甲基麻黄碱黄碱、甲基麻黄碱小檗碱、小檗碱、巴马丁、药根碱、巴马丁、药根碱、黄连碱黄连碱小檗碱、药根碱、小檗碱、药根碱、木兰花碱木兰花碱粉防己碱、粉防己碱、防己诺林碱、轮防己诺林碱、轮环藤酚碱、木兰碱环藤酚碱、木兰碱 药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析二、理化性质二、理化性质1、溶解性溶解性 大多
5、数生物碱难溶于水，易溶于大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿氯仿、乙醚、乙醇、丙酮、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂；及苯等有机溶剂；与酸结合成盐后水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性与酸结合成盐后水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性有差异；有差异；季铵型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水季铵型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水 液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于有机溶剂；有机溶剂；含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛性碱液。性碱液。药物分析学科第一节第一节 生物碱类
6、成分分析生物碱类成分分析二、理化性质二、理化性质2、沉淀反应、沉淀反应大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于水的复盐或分子复合物。水的复盐或分子复合物。生物碱沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子有机酸生物碱沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子有机酸 马钱子散中生物碱成分的鉴别马钱子散中生物碱成分的鉴别取马钱子散取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时，浸泡数小时，滤过，取滤液滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋使溶解，加碘化铋钾试液钾试液12滴，即生成黄棕
7、色沉淀。滴，即生成黄棕色沉淀。药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析二、理化性质二、理化性质3、显色反应、显色反应生物碱在一定生物碱在一定pH条件下可与一些条件下可与一些酸性染料酸性染料（多为磺酸肽类）（多为磺酸肽类）生成有色络合物，可被生成有色络合物，可被氯仿氯仿等有机溶剂定量提出等有机溶剂定量提出 结构中具有酯键的酯碱如乌头碱等可与结构中具有酯键的酯碱如乌头碱等可与异羟肟酸铁试剂异羟肟酸铁试剂反反应产生应产生紫红色紫红色；这些特点可用于中药制剂中生物碱成分的分析这些特点可用于中药制剂中生物碱成分的分析 药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析二、理化性
8、质二、理化性质4、紫外光谱特性、紫外光谱特性结构中具有结构中具有共轭体系共轭体系的生物碱均有紫外吸收的生物碱均有紫外吸收结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的其吸收峰位置与测定时溶剂的pH有关有关。药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析三、定性鉴别三、定性鉴别1、一般理化鉴别、一般理化鉴别沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，此反应一般在沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，此反应一般在酸性水溶液酸性水溶液中进行中进行制备样品供试液时必须净化处理，防止假阳性结果制备样品供试液时必须净化处理，
9、防止假阳性结果 药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析三、定性鉴别三、定性鉴别2、薄层色谱法、薄层色谱法吸附剂：吸附剂：硅胶硅胶、氧化铝；、氧化铝；展开剂：多以展开剂：多以氯仿氯仿、苯等低极性溶剂，加入其他溶剂调整展、苯等低极性溶剂，加入其他溶剂调整展开剂的极性；开剂的极性；由于由于硅胶显弱酸性，硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成盐，盐，使使Rf值很小或拖尾、形成复斑等值很小或拖尾、形成复斑等。显色剂：显色剂：常用改良碘化铋钾试剂常用改良碘化铋钾试剂，有时喷，有时喷碘化铋钾碘化铋钾试剂之后试剂之后再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更
10、加清晰。再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更加清晰。如有荧光，不用显色如有荧光，不用显色 亦可用碘蒸汽、硫酸铈、碘铂酸等其他的试剂显色。亦可用碘蒸汽、硫酸铈、碘铂酸等其他的试剂显色。讨论：如何改进？讨论：如何改进？药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析三、定性鉴别三、定性鉴别3、纸色谱法、纸色谱法可用于生物碱盐或游离碱的鉴别可用于生物碱盐或游离碱的鉴别 4、HPLC：保留时间定性保留时间定性5、GC：可用于小分子生物碱的鉴别可用于小分子生物碱的鉴别药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析四、含量测定四、含量测定（一）总生物碱的含量测定（一）总生物碱的含量测定1、
11、化学分析法、化学分析法 主要使用主要使用酸碱滴定法酸碱滴定法。强碱滴定生物碱盐时，在强碱滴定生物碱盐时，在70%90%的乙醇介质中终点比在水中的乙醇介质中终点比在水中明显，因此常将生物碱盐溶于明显，因此常将生物碱盐溶于90%乙醇，再用标准碱乙醇液滴乙醇，再用标准碱乙醇液滴定。定。若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法进行若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法进行要求：总生物碱的要求：总生物碱的纯度较高纯度较高，用于药味少成分简单制剂的测定，用于药味少成分简单制剂的测定药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析四、含量测定四、含量测定（一）总生物碱的含量测定（
12、一）总生物碱的含量测定2、分光光度法、分光光度法（1）直接测定法）直接测定法不经过化学反应、利用生物碱物质不经过化学反应、利用生物碱物质自身的光吸收自身的光吸收直接进行比色直接进行比色测定的方法。测定的方法。一般用于一般用于药味较少药味较少、干扰小干扰小的中药制剂中总生物碱的含量测定。的中药制剂中总生物碱的含量测定。药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析四、含量测定四、含量测定（一）总生物碱的含量测定（一）总生物碱的含量测定（2）酸性染料比色法（例题）酸性染料比色法（例题P124）原理：原理：BH+In-BH+In-（水相）（水相）BH+In-（有机相）（有机相）关键：关键
13、：v酸性染料的选择酸性染料的选择：甲基橙、：甲基橙、溴麝香草酚兰溴麝香草酚兰（BTB）和溴甲酚绿等；）和溴甲酚绿等；vpH值的选择：值的选择：与生物碱和酸性染料的性质有关。与生物碱和酸性染料的性质有关。v有机溶剂的选择：有机溶剂的选择：一般用一般用氯仿、二氯甲烷氯仿、二氯甲烷v水分的干扰及消除水分的干扰及消除药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析四、含量测定四、含量测定（一）总生物碱的含量测定（一）总生物碱的含量测定（3）雷氏盐比色法（注意事项）雷氏盐比色法（注意事项p126）原理：原理：BH+Cr(NH3)2(SCN)4-BH Cr(NH3)2(SCN)4测定方法：测定方
14、法：（复盐沉淀）（复盐沉淀）复盐沉淀复盐沉淀溶于溶于丙酮（或甲醇）丙酮（或甲醇）直接比色测定直接比色测定样品样品定量过量的雷氏盐定量过量的雷氏盐过滤过滤滤液滤液比色测定比色测定max=520nm（4）异羟肟酸铁比色法）异羟肟酸铁比色法用于含有酯键结构的生物碱的测定用于含有酯键结构的生物碱的测定药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析四、含量测定四、含量测定（二）单体生物碱成分含量测定（二）单体生物碱成分含量测定1、TLCS生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定；生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定；选用的吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似；选用的吸附剂、展开剂及显色
15、方法与鉴别相似；使用改良使用改良碘化铋钾等碘化铋钾等作为显色剂时，必须完全挥干展开剂后（尤作为显色剂时，必须完全挥干展开剂后（尤其在碱性环境下展开的）才可喷洒，否则背景深、反差小，影响其在碱性环境下展开的）才可喷洒，否则背景深、反差小，影响测定。测定。药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析四、含量测定四、含量测定（二）单体生物碱成分含量测定（二）单体生物碱成分含量测定2、HPLC(例题例题P128)以以反相高效液相反相高效液相色谱应用较多；色谱应用较多；在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅醇基的影响，使生在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅醇基的影响，使生物碱分析易
16、产生保留时间延长、峰形变宽、拖尾；物碱分析易产生保留时间延长、峰形变宽、拖尾；可在流动相中加入可在流动相中加入硅醇基抑制剂硅醇基抑制剂、离子对试剂等离子对试剂等措施以克服游离措施以克服游离硅醇基的影响，满足定量分析的要求；硅醇基的影响，满足定量分析的要求；中药制剂中生物碱成分进行高效液相色谱法测定时，使用较多的中药制剂中生物碱成分进行高效液相色谱法测定时，使用较多的是是紫外检测器。紫外检测器。药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析四、含量测定四、含量测定（二）单体生物碱成分含量测定（二）单体生物碱成分含量测定3、GC只适用于有挥发性的，遇热不分解的生物碱类，如麻黄碱、槟榔只
17、适用于有挥发性的，遇热不分解的生物碱类，如麻黄碱、槟榔碱、苦参碱和颠茄类生物碱等碱、苦参碱和颠茄类生物碱等 制备供试品溶液时一般应采用制备供试品溶液时一般应采用冷提取冷提取，净化过程也要避免加热以，净化过程也要避免加热以防成分的流失，最后需用氯仿等低极性有机溶剂为溶媒制备成供试防成分的流失，最后需用氯仿等低极性有机溶剂为溶媒制备成供试液。液。药物分析学科第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析五、常见生物碱成分分析五、常见生物碱成分分析化合物名称结构式理化性质、结构及光谱特征常用定量分析方法小檗碱（黄连素）Berberine(Umbellatine)（C20H18NO4；336.37）异
18、喹啉类原小檗碱型生物碱、季铵型生物碱、有共轭体系。黄色结晶、碱性较强，易溶于热水或热乙醇，微溶或不溶于苯、氯仿、丙酮，其盐酸盐水中溶解度小。mp：1450UV：225，270，331。重量法、滴定法分光光度法薄层扫描法薄层荧光扫描法高效液相色谱法脉冲极谱法流动色谱分析法酶法第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析五、常见生物碱成分分析五、常见生物碱成分分析化合物名称结构式理化性质、结构及光谱特征常用定量分析方法士的宁（番木鳖碱）Strychnine（C21H20N2O2;334.40）单萜吲哚类生物碱、环叔胺显碱性、酰胺不显碱性。难溶于水，可溶于乙醇，甲醇。易溶于氯仿，微溶于乙醚。mp：
19、268290。UV：282。重量法滴定法分光光度法一阶导数分光光度法薄层扫描法高效液相色谱法第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析五、常见生物碱成分分析五、常见生物碱成分分析化合物名称结构式理化性质、结构及光谱特征常用定量分析方法乌头碱Aconitine（C34H47NO11;645.76）二萜类酯型生物碱。易溶于氯仿、苯、无水乙醇和乙醚，难溶于水、微溶石油醚mp：204UV:281,273,230,202滴定法酸性染料比色法一阶导数紫外分光光度法薄层扫描法高效液相色谱法药物分析学科第二节第二节 黄酮类成分分析黄酮类成分分析一、概述一、概述1、定义：黄酮类化合物是指基本母核为、定义：黄
20、酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮（苯基色原酮（2-phenylchromone）类化合物，现在则是泛指两苯环通过中央三碳链相互）类化合物，现在则是泛指两苯环通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。联结而成的一系列化合物。2、含黄酮类成分的常见中药、含黄酮类成分的常见中药药物分析学科中药名称中药名称主要黄酮类成分主要黄酮类成分 中药名称中药名称 主要黄酮类成分主要黄酮类成分 黄芩黄芩 黄芩苷、黄芩素、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素黄芩素、千层纸素 山柰山柰 山柰酚、山柰素山柰酚、山柰素槐米槐米 芦丁、槲皮素芦丁、槲皮素 广藿香广藿香商陆素、芹菜素商陆素、芹菜素
21、葛根葛根 葛根素葛根素、大豆苷、大豆苷元、大豆苷、大豆苷元、7-木糖苷葛根素木糖苷葛根素白果白果 山奈酚、槲皮素、芦丁山奈酚、槲皮素、芦丁 枳实枳实 橙皮苷橙皮苷、川陈皮素、新橙皮苷、川陈皮素、新橙皮苷、5-邻邻-去甲基川陈皮素去甲基川陈皮素 高良姜高良姜 高良姜素、山奈素、槲皮素高良姜素、山奈素、槲皮素茵陈茵陈茵陈黄酮茵陈黄酮、芫花素、槲皮素、芫花素、槲皮素补骨脂补骨脂补骨脂查耳酮、异补骨脂查耳补骨脂查耳酮、异补骨脂查耳酮酮 山楂山楂 槲皮素、金丝桃苷槲皮素、金丝桃苷 金线草金线草 槲皮素槲皮素、山奈酚、山奈酚 第二节第二节 黄酮类成分分析黄酮类成分分析二、结构特征及理化性质二、结构特征及理
22、化性质1、结构特征结构特征苯甲酰基苯甲酰基 桂皮酰基桂皮酰基240280nm 300400nm药物分析学科第二节第二节 黄酮类成分分析黄酮类成分分析二、理化性质二、理化性质2、溶解度溶解度黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异。双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异。游离苷元游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中；等有机溶剂及稀碱液中；黄酮苷黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不一般易溶于水、
23、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶于苯、氯仿等。溶于苯、氯仿等。药物分析学科第二节第二节 黄酮类成分分析黄酮类成分分析二、理化性质二、理化性质3、酸碱性酸碱性酸性：黄酮类化合物因分子中多有酚羟基，故酸性：黄酮类化合物因分子中多有酚羟基，故显酸性显酸性，可溶于碱，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酸性强弱：性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酸性强弱：7,4-二二羟基羟基 7-或或4-羟基羟基 一般酚一般酚 5-羟基羟基碱性氧原子的性质碱性氧原子的性质 药物分析学科第二节第二节 黄酮类成分分析黄酮类成分分析二、理化性质二、理化性质4、显色反应显色反应盐酸盐酸-镁粉（锌粉）反
24、应镁粉（锌粉）反应金属盐类试剂的配合反应金属盐类试剂的配合反应可用于鉴别，但要避免假阳性结果可用于鉴别，但要避免假阳性结果 5、紫外光谱特征、紫外光谱特征 药物分析学科第二节第二节 黄酮类成分分析黄酮类成分分析三、定性鉴别三、定性鉴别1、理化鉴别、理化鉴别盐酸盐酸-镁粉（锌粉）反应镁粉（锌粉）反应金属盐类试剂的配合反应金属盐类试剂的配合反应2、色谱鉴别、色谱鉴别吸附剂：硅胶、聚酰胺吸附剂：硅胶、聚酰胺硅胶色谱分离弱极性化合物较好；硅胶色谱分离弱极性化合物较好；聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳；聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳；纤维素薄层则适用于分离多糖苷混合物。纤维素薄层则
25、适用于分离多糖苷混合物。显色反应：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。显色反应：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。药物分析学科第二节第二节 黄酮类成分分析黄酮类成分分析四、含量测定四、含量测定1、总成分的含量测定、总成分的含量测定直接测定：常用芦丁作对照测定直接测定：常用芦丁作对照测定显色测定：常用铝盐做显色剂显色测定：常用铝盐做显色剂2、单体黄酮成分的含量测定单体黄酮成分的含量测定TLCSHPLC（05版药典全部使用此法）版药典全部使用此法）五、常见黄酮类成分（略）五、常见黄酮类成分（略）药物分析学科第三节第三节 三萜皂苷类成分分析三萜皂苷类成分分析一、概述一、概述1、
26、概念、概念2、含三萜皂苷类成分的常用中药含三萜皂苷类成分的常用中药第三节第三节 三萜皂苷类成分分析三萜皂苷类成分分析二、结构及理化性质二、结构及理化性质甘草酸甘草酸人参皂甙人参皂甙(A型型)1、溶解度：、溶解度：可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中，可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中，几不溶于或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂；几不溶于或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂；在含水丁醇或戊醇中溶解度较好在含水丁醇或戊醇中溶解度较好药物分析学科第三节第三节 三萜皂苷类成分分析三萜皂苷类成分分析二、结构及理化性质二、结构及理化性质甘草酸甘草酸人参皂甙人参皂甙(A型型)1、溶解
27、度、溶解度皂甙元皂甙元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等皂甙皂甙可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等，在丁醇、戊醇可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等，在丁醇、戊醇中溶解性较好。中溶解性较好。2、紫外光谱特征、紫外光谱特征药物分析学科第三节第三节 三萜皂苷类成分分析三萜皂苷类成分分析二、结构及理化性质二、结构及理化性质3、显色反应、显色反应醋酐醋酐-浓硫酸反应浓硫酸反应冰醋酸冰醋酸-乙酰氯反应乙酰氯反应氯仿氯仿-硫酸反应硫酸反应金属盐类反应：金属盐类反应：+铅、钡、铜盐铅、钡、铜盐沉淀沉淀药物分析学科第三节第三节 三萜皂苷类成分分析三萜皂苷类成分分析三、定性鉴别三、定性鉴别1
28、、理化鉴别、理化鉴别 泡沫反应：多用于检验含有皂苷的原料药；泡沫反应：多用于检验含有皂苷的原料药；化学显色反应：仅在组成药物较少的中药制剂中使用。化学显色反应：仅在组成药物较少的中药制剂中使用。2、TLC吸附剂：硅胶，氧化铝、硅藻土等。吸附剂：硅胶，氧化铝、硅藻土等。展开剂：氯仿展开剂：氯仿-甲醇甲醇-水（水（13：7：2）（）（10以下放置，下层）以下放置，下层）氯仿氯仿-醋酸乙酯醋酸乙酯-甲醇甲醇-水（水（15：40：22：10）（同上）（同上）显色剂：不同浓度的显色剂：不同浓度的硫酸乙醇硫酸乙醇液最常用。液最常用。药物分析学科第三节第三节 三萜皂苷类成分分析三萜皂苷类成分分析四、定量分析
29、四、定量分析（一）总成分分析（一）总成分分析1、重量法、重量法 该法主要用于含皂苷的原料药质量控制。该法主要用于含皂苷的原料药质量控制。在中药制剂中，当处方中药味含皂苷类成分较多时，常用正在中药制剂中，当处方中药味含皂苷类成分较多时，常用正丁醇作溶剂，测定丁醇作溶剂，测定正丁醇浸出物正丁醇浸出物。2、比色法：、比色法：常用显色剂有：香草醛常用显色剂有：香草醛-硫酸、硫酸、香草醛香草醛-高氯酸高氯酸、醋酐、醋酐-硫酸、硫酸、高氯酸、浓硫酸以及亚甲蓝等。高氯酸、浓硫酸以及亚甲蓝等。注意测定单体皂苷（或皂苷元）与总皂苷的关系注意测定单体皂苷（或皂苷元）与总皂苷的关系药物分析学科第三节第三节 三萜皂苷
30、类成分分析三萜皂苷类成分分析四、定量分析四、定量分析（二）单体成分分析（二）单体成分分析1、TLC薄层洗脱薄层洗脱-比色法比色法薄层扫描法薄层扫描法2、HPLCHPLC-UV：人参皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外区的末端；：人参皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外区的末端；有紫外吸收的甘草酸、远志皂苷，灵敏度高。有紫外吸收的甘草酸、远志皂苷，灵敏度高。HPLC-ELSD：检测三萜皂苷类成分的应用日渐广泛：检测三萜皂苷类成分的应用日渐广泛五、常见三萜皂苷类成分五、常见三萜皂苷类成分药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析一、概述一、概述1、概念：中药中醌类化合物主要有苯醌、概念：中药中醌类化合
31、物主要有苯醌、萘醌、菲醌和、萘醌、菲醌和蒽醌蒽醌四种类四种类型型可游离存在，也可与糖结合成苷，称为蒽苷。可游离存在，也可与糖结合成苷，称为蒽苷。2、含醌类成分的常用中药、含醌类成分的常用中药药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析二、结构及理化性质二、结构及理化性质丹参醌丹参醌IIA大黄素大黄素1、物理性质：、物理性质：存在的形态，升华性，光不稳定性存在的形态，升华性，光不稳定性2、溶解性：、溶解性：游离醌类多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂，微游离醌类多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂，微溶于或不溶于水。溶于或不溶于水。结合成苷后极性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在热水中结合成苷后
32、极性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在热水中也可溶解，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等非极性溶剂中。也可溶解，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等非极性溶剂中。药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析二、结构及理化性质二、结构及理化性质3、酸性：、酸性：酚羟基的酸性酚羟基的酸性碱提酸沉法碱提酸沉法4、显色反应、显色反应羟基蒽醌羟基蒽醌+碱碱橙，红，紫红，蓝橙，红，紫红，蓝+Pb2+/Mg2+配合物配合物9、10位未取代的位未取代的羟基蒽酮化合物羟基蒽酮化合物+对亚硝基二甲基苯胺对亚硝基二甲基苯胺 紫，绿，蓝，灰紫，绿，蓝，灰药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析三、定性鉴别三、定性鉴别1、显色
33、反应、显色反应2、升华法、升华法3、TLC吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶展开剂：展开剂：乙酸乙酯乙酸乙酯-甲醇甲醇-水（水（10016.513.5）适于分离蒽醌苷）适于分离蒽醌苷元和蒽醌苷，不含水或甲醇的混合溶媒适合于分离蒽醌类的苷元。元和蒽醌苷，不含水或甲醇的混合溶媒适合于分离蒽醌类的苷元。显色方法：显色方法：喷喷碱性试剂碱性试剂，喷，喷醋酸镁甲醇醋酸镁甲醇液、氨液、氨气熏气熏及在及在紫外灯紫外灯下观下观察荧光，可见光下直接观察色斑。察荧光，可见光下直接观察色斑。药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析四、含量测定四、含量测定1、游离蒽醌的测定：弱极性溶剂提取后，加碱比色游离蒽醌的测定：
34、弱极性溶剂提取后，加碱比色2、结合蒽醌的测定：、结合蒽醌的测定：极性溶剂提取，水解测苷元极性溶剂提取，水解测苷元 先酸水解后，非先酸水解后，非极性溶剂提取苷元后测定极性溶剂提取苷元后测定3、单体成分的含量测定、单体成分的含量测定TLCSHPLC-UV药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析四、含量测定四、含量测定例例1、牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定混合碱液比色法混合碱液比色法对照品溶液测定对照品溶液测定：以：以1，8-二羟基蒽醌二羟基蒽醌为对照品，精密称取为对照品，精密称取10mg于于100mL量量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（瓶中，加甲醇溶解
35、并稀释至刻度（100g/mL）。取）。取1mL对照品液于对照品液于10mL量量瓶中，在水浴上蒸干，加瓶中，在水浴上蒸干，加5%氢氧化钠氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱氢氧化铵混合碱溶解并稀释至刻溶解并稀释至刻度，度，放置放置1小时小时，以，以5%氢氧化钠氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白，在氢氧化铵混合碱液为空白，在510nm波波长处测定。长处测定。样品测定：样品测定：游离蒽醌的测定：取牛黄解毒片游离蒽醌的测定：取牛黄解毒片10片，刮去糖衣，精密称定片，刮去糖衣，精密称定重量，研细。称取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入重量，研细。称取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿氯仿100mL，称，称
36、重，水浴上重，水浴上回流回流4小时，取下，加塞，放冷，称重，用氯仿补充至原重量，小时，取下，加塞，放冷，称重，用氯仿补充至原重量，滤过，吸取滤液滤过，吸取滤液50mL于分液漏斗中，用于分液漏斗中，用蒸馏水蒸馏水20mL洗涤洗涤数次，至水层无数次，至水层无色，弃去水液。氯仿层用色，弃去水液。氯仿层用5%氢氧化钠氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取氢氧化铵混合碱液振摇萃取数数次，直至混合碱液无色，合并碱液，用次，直至混合碱液无色，合并碱液，用20mL氯仿洗涤氯仿洗涤数次，至氯仿层无数次，至氯仿层无色，弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上色，弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上加热数分钟至氯仿挥尽加热数分钟至
37、氯仿挥尽，冷却，移，冷却，移入入100mL量瓶中，并稀释至刻度，放置量瓶中，并稀释至刻度，放置1小时，以小时，以5%氢氧化钠氢氧化钠-2%氢氧化铵氢氧化铵混合碱液为空白，在混合碱液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于1，8-二二羟基蒽醌含量）。羟基蒽醌含量）。药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析四、含量测定四、含量测定例例1、牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定混合碱液比色法混合碱液比色法总蒽醌的测定总蒽醌的测定：精密称取游离蒽醌项下的牛黄解毒片粉一片置于：精密称取游离蒽醌项下的牛黄解毒片粉一片置
38、于150mL烧瓶中，加烧瓶中，加2.5mol/L硫酸硫酸30mL直火回流直火回流4小时小时，放冷，加入，放冷，加入氯仿氯仿20mL，水浴，水浴回流回流0.5小时小时，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液，用复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液，用蒸馏水洗涤蒸馏水洗涤数次，至水数次，至水层无色，弃去水液。氯仿液用层无色，弃去水液。氯仿液用5%氢氧化钠氢氧化钠-2%氢氧化铵氢氧化铵混合碱液振混合碱液振摇萃取数次，至碱液无色，合并，用摇萃取数次，至碱液无色，合并，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿液。将碱液置
39、水浴上加热至氯仿挥尽，冷却，移入无色，弃去氯仿液。将碱液置水浴上加热至氯仿挥尽，冷却，移入50mL量瓶中，用混合碱液稀释至刻度，放置量瓶中，用混合碱液稀释至刻度，放置1小时，以小时，以5%氢氧化氢氧化钠钠-2%氢氧化铵液为空白，在氢氧化铵液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于（相当于1，8-二羟基蒽醌含量）。二羟基蒽醌含量）。结合蒽醌的计算：结合蒽醌的计算：每片含结合蒽醌量每片含结合蒽醌量=每片含总蒽醌量每片含总蒽醌量每片含游离蒽醌量每片含游离蒽醌量。药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析四、含量测定四、含量测定例例2、复方丹参片中丹参酮
40、复方丹参片中丹参酮A含量测定含量测定高效液相色谱法高效液相色谱法色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水水（73：27）为流动相；检测波长为）为流动相；检测波长为270nm。对照品溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取丹参酮：精密称取丹参酮A对照品对照品10mg，置，置50mL棕色量瓶棕色量瓶中中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置，置25mL棕色量瓶中，加棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每甲醇至刻度，摇匀，即得（每1mL中含丹参酮中含丹参酮A40g）供
41、试品溶液的制备供试品溶液的制备：取本品：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇，精密称定，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理，称定重量，超声处理15分钟，放冷，分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1010L L，注入液相色谱，注入液相色谱仪，测定，即得。仪，测定，即得。药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析五、常见醌
42、类成分五、常见醌类成分化合物名称结构式理化特征常用定量方法大黄酸(Rhein)（C15H8O6，284.21）为黄色针状结晶（升化法），mp321322，330分解。几乎不溶于水，溶于碱和吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。UVmaxMeOHnm()：229(36800),258(20100),435(11100)。高效液相色谱法薄层扫描法药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析五、常见醌类成分五、常见醌类成分化合物名称结构式理化特征常用定量方法大黄素(Emodin)（C15H10O5，270.23）为橙色针状结晶，mp265267。几乎不溶于水，溶于乙醇及氢氧化钠、碳酸钠、氨
43、水等碱液中。25时溶于（g/100mL）:乙醚0.140、氯仿0.071、四氯化碳0.010、二硫化碳0.009。UVmaxEtOHnm(Log)：220（4.55），252（4.26），265（4.34），289（4.34），437（4.10）。高效液相色谱法薄层扫描法药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析五、常见醌类成分五、常见醌类成分药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析五、常见醌类成分五、常见醌类成分药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析五、常见醌类成分五、常见醌类成分药物分析学科第四节第四节 醌类成分分析醌类成分分析五、常见醌类成分五、常见醌类成分
44、药物分析学科第五节第五节 挥发性成分分析挥发性成分分析一、概述一、概述挥发性成分是指中药中一类具有芳香气并易挥发的成分，其化学组挥发性成分是指中药中一类具有芳香气并易挥发的成分，其化学组成复杂，主要包括挥发油类成分和其他分子量较小、易挥发的化合成复杂，主要包括挥发油类成分和其他分子量较小、易挥发的化合物。物。萜类化合物萜类化合物芳香族化合物芳香族化合物脂肪族化合物脂肪族化合物含挥发油成分的常用中药含挥发油成分的常用中药药物分析学科中药名称挥发油中主要成分中药名称挥发油中主要成分厚朴辛夷肉桂陈皮川芎薄荷广霍香-桉油醇、-蒎烯、柠檬烯、醋酸龙脑酯柠檬烯、丁香酚、桉油精、-蒎烯桂皮醛、桂皮酸、乙酸苯
45、丙酯柠檬烯、柠檬醛藁本内酯、3-丁叉苯酞、香桧烯薄荷酮、薄荷脑、乙酸薄荷酯广霍香醇、苯甲醛、丁香酚、桂皮醛羌活细辛豆蔻丁香-蒎烯、-蒎烯、柠檬烯、萜品烯醇-4、甲基丁香酚、黄樟醚、细辛醚优香芹酮、-蒎烯、-蒎烯桉油精、龙脑、樟脑、草烯松油烯、蒎烯丁香酚、水杨酸甲酯、-蒎烯、-蒎烯、乙酰丁香酚第五节第五节 挥发性成分分析挥发性成分分析二、结构及理化性质二、结构及理化性质薄荷醇薄荷醇桂皮醛桂皮醛柠檬烯柠檬烯1、溶解性：易溶于有机溶剂、溶解性：易溶于有机溶剂2、显色反应：、显色反应：酚类酚类+三氯化铁三氯化铁蓝，蓝紫，绿蓝，蓝紫，绿羰基羰基+苯肼、羟胺苯肼、羟胺结晶体结晶体醛类醛类+硝酸银胺硝酸银胺
46、银镜银镜内酯类内酯类+亚硝酰铁氰化钠亚硝酰铁氰化钠+NaOH红色并逐渐消失红色并逐渐消失药物分析学科第五节第五节 挥发性成分分析挥发性成分分析三、三、定性鉴别定性鉴别TLC吸附剂：硅胶、氧化铝吸附剂：硅胶、氧化铝展开剂：石油醚、正己烷（加少量乙酸乙酯或苯）展开剂：石油醚、正己烷（加少量乙酸乙酯或苯）显色剂：茴香醛显色剂：茴香醛-浓硫酸试剂（通用型），浓硫酸试剂（通用型），若干扰较多，选用专属性强的显色剂若干扰较多，选用专属性强的显色剂GC：对照品对照法定性：对照品对照法定性GC-MSGC-FTIR药物分析学科第五节第五节 挥发性成分分析挥发性成分分析四、四、定量分析定量分析总成分分析：蒸馏法总
47、成分分析：蒸馏法单体成分分析：单体成分分析：GC（首选）（首选）HPLCTLCSGC-MSGC-FTIR药物分析学科第六节第六节 木脂素成分分析木脂素成分分析一、一、概述概述木脂素是一类在生物体内由二分子苯丙素衍生物聚合而成的化合物。木脂素是一类在生物体内由二分子苯丙素衍生物聚合而成的化合物。含木脂素类成分的常用中药：含木脂素类成分的常用中药：中药名称中药名称主要成分主要成分中药名称中药名称主要成分主要成分五味子牛蒡子连翘远志 五味子甲素 五味子乙素 五味子醇甲 五味子醇乙 牛蒡子苷 牛蒡子苷元 拉帕酚连翘脂素 连翘脂苷中国远志脂酚厚朴细辛杜仲黑芝麻厚朴酚 和厚朴酚细辛脂素 芝麻脂素（+）-1
48、-羟基松脂素葡萄糖苷芝麻脂素药物分析学科第六节第六节 木脂素成分分析木脂素成分分析二、二、结构及理化性质结构及理化性质CH3CH3OCH3OCH3H3COH3COH3COH3CO牛蒡子苷牛蒡子苷(元元)五味子甲素五味子甲素1、溶解性、溶解性游离游离易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、乙醇等易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、乙醇等成苷时成苷时可溶于甲醇、乙醇等可溶于甲醇、乙醇等药物分析学科第六节第六节 木脂素成分分析木脂素成分分析二、二、结构及理化性质结构及理化性质2、紫外光谱特征、紫外光谱特征max=250-350nm3、显色反应、显色反应通用型显色剂：磷钼酸乙醇、硫酸乙醇通用型显色剂：磷钼酸乙醇、硫酸乙醇
49、Labat反应：反应：+硫酸硫酸+没食子酸没食子酸蓝绿蓝绿 Ecgrine反应：反应：+硫酸硫酸+变色酸变色酸蓝紫蓝紫药物分析学科第六节第六节 木脂素成分分析木脂素成分分析三、三、定性分析定性分析TLC吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶展开剂：亲脂性溶剂（苯、氯仿，加甲醇等）展开剂：亲脂性溶剂（苯、氯仿，加甲醇等）显色：香草醛试液，浓硫酸试液，磷钼酸乙醇溶液、碘熏显色：香草醛试液，浓硫酸试液，磷钼酸乙醇溶液、碘熏四、含量测定四、含量测定总成分：变色酸比色法总成分：变色酸比色法单体成分：单体成分：TLCSHPLC药物分析学科第六节第六节 木脂素成分分析木脂素成分分析五、常见木脂素类成分五、常见木脂素类成分
50、药物分析学科第七节第七节 其他成分分析其他成分分析一、香豆素类成分一、香豆素类成分香豆素是具有苯骈吡喃酮母核的内酯类衍生物广泛存在于芸香科和香豆素是具有苯骈吡喃酮母核的内酯类衍生物广泛存在于芸香科和伞形科的植物中。伞形科的植物中。1、主要结构及理化性质、主要结构及理化性质补骨脂素补骨脂素茵陈内酯茵陈内酯异羟肟酸铁反应：异羟肟酸铁反应：酚羟基酚羟基-三氯化铁显色反应：三氯化铁显色反应：紫外光谱特性：紫外光谱特性：max=300nm，母核有供母核有供电子基子基团取代可取代可产生生荧光光药物分析学科第七节第七节 其他成分分析其他成分分析一、香豆素类成分一、香豆素类成分2、定性鉴别、定性鉴别荧光法荧光