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1、室内空气中细菌的测定室内空气中细菌的测定平皿暴露沉降法平皿暴露沉降法 目的：目的：学习和掌握平皿暴露沉降法测定公学习和掌握平皿暴露沉降法测定公共场所空气中细菌的总数。共场所空气中细菌的总数。评价居室的卫生状况评价居室的卫生状况理论依据和实际应用：理论依据和实际应用：室内空气中的微生物主要来源是人们在室内的生活和室内空气中的微生物主要来源是人们在室内的生活和活动，使微生物随飞沫与悬浮颗粒物飞扬于空气中。所以活动，使微生物随飞沫与悬浮颗粒物飞扬于空气中。所以室内空气中的微生物数量的多少室内空气中的微生物数量的多少取决于取决于室内卫生状况、居室内卫生状况、居住密度、居民健康情况、人们的活动情况、室内
2、通风效果住密度、居民健康情况、人们的活动情况、室内通风效果等。居住密度大、活动频繁、通风不良时，细菌总数就多。等。居住密度大、活动频繁、通风不良时，细菌总数就多。所以它可以代表居室一般卫生状况的意义；所以它可以代表居室一般卫生状况的意义；理论依据和实际应用：理论依据和实际应用：附着于室内悬浮颗粒物和唾液与痰液飞沫的微生物中附着于室内悬浮颗粒物和唾液与痰液飞沫的微生物中含有一定数量的致病微生物（溶血性链球菌、结核杆菌、含有一定数量的致病微生物（溶血性链球菌、结核杆菌、白喉杆菌、肺炎球菌、金黄色葡萄球菌、流感病菌等），白喉杆菌、肺炎球菌、金黄色葡萄球菌、流感病菌等），可对人致病（在空气湿度大、通风
3、不良、阳光不足的情况可对人致病（在空气湿度大、通风不良、阳光不足的情况下，可保持较长的生存时间和致病性），因此，有必要对下，可保持较长的生存时间和致病性），因此，有必要对室内空气中的微生物数量作出限制。以病原体作为直接的室内空气中的微生物数量作出限制。以病原体作为直接的评价指标，在技术上还有一定难度，所以目前仍多用细菌评价指标，在技术上还有一定难度，所以目前仍多用细菌总数作为居室空气细菌学的评价指标。总数作为居室空气细菌学的评价指标。三、原理：三、原理：空气中附着于尘埃或飞沫小滴上的细菌，经空气中附着于尘埃或飞沫小滴上的细菌，经过一段时间，可过一段时间，可自然沉降自然沉降于培养基的表面上，经于
4、培养基的表面上，经培养后，计数其生长的菌落数，再按公式推算出培养后，计数其生长的菌落数，再按公式推算出每立方米空气中的细菌数。每立方米空气中的细菌数。四、实验准备：四、实验准备：（一）仪器与设备：（一）仪器与设备：高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器电热恒温干燥箱电热恒温干燥箱恒温培养箱恒温培养箱电冰箱电冰箱玻璃平皿及制备培养基用的一般设备玻璃平皿及制备培养基用的一般设备（二）试剂与材料：（二）试剂与材料：营养琼脂培养基：营养琼脂培养基：（1）成份：）成份：蛋白胨蛋白胨 10克克 牛肉浸膏牛肉浸膏 3克克 氯化钠氯化钠 5克克 磷酸二氢钠磷酸二氢钠 1克克 琼脂琼脂 1520克克 蒸馏水蒸馏水 100
5、0毫升毫升（二）试剂与材料：（二）试剂与材料：营养琼脂培养基：营养琼脂培养基：（2）制法：将上述成分混合后，加热溶解。调节）制法：将上述成分混合后，加热溶解。调节PH值值7.88.0。过滤除去沉渣，分装于三角烧瓶中，经。过滤除去沉渣，分装于三角烧瓶中，经121（103kPa）高压蒸气灭菌）高压蒸气灭菌20分钟，分钟，然后倾注适然后倾注适量（量（1520毫升）于已灭菌处理的平皿内，毫升）于已灭菌处理的平皿内，制成营养制成营养琼脂平板备用。若当天不用，应置冰箱内保存。琼脂平板备用。若当天不用，应置冰箱内保存。五、操作步骤：五、操作步骤：（一）制作营养琼脂平板（一）制作营养琼脂平板（无菌操作）（无菌
6、操作）操作者面前点燃酒精灯操作者面前点燃酒精灯 打开已灭菌处理的平皿打开已灭菌处理的平皿 倾注适量营养琼脂培养基（倾注适量营养琼脂培养基（15152020毫升）毫升）冷凝（大约冷凝（大约1515分钟）分钟）（二）选择采样（二）选择采样点点的要求：的要求：1采样点的数量采样点的数量 根据监测室内面积大小和现场情况而确定，以根据监测室内面积大小和现场情况而确定，以期能正确反映室内空气污染物的水平。原则上小于期能正确反映室内空气污染物的水平。原则上小于50的房间应设（的房间应设（13）个点；）个点；50100设设（35）个点；）个点；100以上至少设以上至少设5个点。在对角线个点。在对角线上或梅花式
7、上或梅花式均匀分布均匀分布。2采样点应避开采样点应避开通风口通风口，离墙壁距离应大于，离墙壁距离应大于0.5m。3采样点的高度：原则上与人的呼吸带高度相一致。采样点的高度：原则上与人的呼吸带高度相一致。相对高度相对高度0.5m1.5m之间。之间。（三）采样方法（三）采样方法1.选择好采样点后，将营养琼脂平板置于这些选测选择好采样点后，将营养琼脂平板置于这些选测的部位，并将皿盖揭开，使平皿内营养琼脂培养的部位，并将皿盖揭开，使平皿内营养琼脂培养基表面暴露于空气中基表面暴露于空气中5分钟。盖上皿盖，将平板分钟。盖上皿盖，将平板倒转，置于倒转，置于37恒温培养箱中培养恒温培养箱中培养24小时后计小时
8、后计数菌落数。数菌落数。2.计数营养琼脂培养基表面上所生长的菌落数，并计数营养琼脂培养基表面上所生长的菌落数，并求出全部采样点的平均菌落数。求出全部采样点的平均菌落数。六、结果与计算：六、结果与计算：1 1、奥梅梁斯基公式：、奥梅梁斯基公式：100cm100cm2 2的培养皿让空气沉降的培养皿让空气沉降5 5分钟，培养出的细菌数相当于分钟，培养出的细菌数相当于1010升空气中的细菌升空气中的细菌数。数。X=X=（N N100100100100）/R/R2 2 式中：式中：X X每立方米空气中的细菌数每立方米空气中的细菌数 N N平板直接计数的平均菌落数平板直接计数的平均菌落数 R R平皿的底面
9、积半径（平皿的底面积半径（cmcm）：）：9cm9cm2 2、直接计数：、直接计数：CFU CFU（菌落形成单位（菌落形成单位/皿），注明（沉降皿），注明（沉降法，皿径法，皿径9cm9cm）3、将五个采样点的菌落数平均计算出室内、将五个采样点的菌落数平均计算出室内平均的菌落数。平均的菌落数。1 2 3 4 5 平均平均 细菌数细菌数（CFU/皿）皿）感应式菌落计数仪感应式菌落计数仪九、评价：九、评价：室内空气中细菌总数规定撞击法室内空气中细菌总数规定撞击法4000cfu/m3;沉降法沉降法45cfu/皿。（室内空气中细菌总数卫生标准皿。（室内空气中细菌总数卫生标准GB/T 17093-1997
10、）旅店业卫生标准旅店业卫生标准 GB 9663-1996 医院空气消毒效果和污染状况的评价：医院空气消毒效果和污染状况的评价：空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养，空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养，如消毒后空气中细菌数明显下降，说明消毒效果好，下如消毒后空气中细菌数明显下降，说明消毒效果好，下面规定适用面规定适用GB159821995规定：规定：类区域细菌总数类区域细菌总数10cfu/m3，且未检出致病菌为消毒合格；，且未检出致病菌为消毒合格；类区域细菌总数类区域细菌总数200cfu/m3,且未检出致病菌为消毒合格；且未检出致病菌为消毒合格；类区域细菌总数类区域细菌总数500c
11、fu/m3,且未检出致病菌为消毒合格。且未检出致病菌为消毒合格。类环境类环境包括层流洁净手术室和层流洁净病房只能包括层流洁净手术室和层流洁净病房只能采用层流通风才能空气中的微生物减到此标准以下。采用层流通风才能空气中的微生物减到此标准以下。类环境类环境包括普通手术室、产房、婴儿室、早产儿包括普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室洁净区、烧伤病房、室、普通保护性隔离室、供应室洁净区、烧伤病房、重症监护病房、采用循环风紫外线空气消毒器或静重症监护病房、采用循环风紫外线空气消毒器或静电吸附式空气消毒器，这类均为有人房间，必须采电吸附式空气消毒器，这类均为有人房间，必须采用对人无
12、毒无害且可连续消毒才能使空气中的微生用对人无毒无害且可连续消毒才能使空气中的微生物减到此标准以下。物减到此标准以下。类环境类环境包括儿科病房、妇产科检查室、注射室、包括儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房室和房间，采用紫外线消毒，化学消各类普通病房室和房间，采用紫外线消毒，化学消毒剂熏蒸或喷雾消毒。毒剂熏蒸或喷雾消毒。十、注意事项：十、注意事项：1.若测定空气中的溶血性链球菌及绿色链球菌，则若测定空气中的溶血性链球菌及绿色链球菌，则用血琼脂平板，其他操作及计算方法与细菌总数用血琼脂平板，其他操作
13、及计算方法与细菌总数测定方法相同。测定方法相同。2.平皿的底面积直径不宜小于平皿的底面积直径不宜小于9cm。3.选择采样点时，应尽量避开空调、门窗等气流变选择采样点时，应尽量避开空调、门窗等气流变化较大处。整个采样过程中，应动作轻缓，避免化较大处。整个采样过程中，应动作轻缓，避免扬起灰尘，并要注意无菌操作。扬起灰尘，并要注意无菌操作。4.采样中打开皿盖时，可将皿盖向下，切忌血盖向采样中打开皿盖时，可将皿盖向下，切忌血盖向上而暴露于空气中，影响采样结果。暴露上而暴露于空气中，影响采样结果。暴露5分钟分钟后，应按打开皿盖的顺序，盖上皿盖，带回实验后，应按打开皿盖的顺序，盖上皿盖，带回实验室置培养箱，室置培养箱，37、24小时培养后计数菌落。小时培养后计数菌落。补充：补充：1.撞击式空气采样法：用空气动力泵抽气进入狭缝，撞击式空气采样法：用空气动力泵抽气进入狭缝，使气流速度加快，撞击于正在转动的平皿上。并粘使气流速度加快，撞击于正在转动的平皿上。并粘附其上，培养。附其上，培养。CFU/m32.吸收法：气流经过一定的吸收液，培养。吸收法：气流经过一定的吸收液，培养。3.暴露法：暴露法：CFU/皿。缺点：颗粒物质运动符合皿。缺点：颗粒物质运动符合stokes定律，由于人流、季节、白天细菌数定律，由于人流、季节、白天细菌数晚上，晚上，且技术定量不同等可造成误差。且技术定量不同等可造成误差。