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1、实验的目的要求实验的目的要求v学习并掌握荚膜染色法学习并掌握荚膜染色法第1页/共19页荚膜染色的基本原理荚膜染色的基本原理v荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，含水量高，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。物质，含水量高，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。v由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被洗去。所以通常用溶于水，易在用水冲洗时被洗去。所以通常用衬托衬托法染色法染色(负染色法负染色法),使菌体和背景着色，而荚膜不使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。着色，在菌体周
2、围形成一透明圈。v也可采用也可采用AnthonyAnthony氏染色法氏染色法，用结晶紫使细胞和荚，用结晶紫使细胞和荚膜都着色，再用硫酸铜水溶液洗。荚膜被脱色，但膜都着色，再用硫酸铜水溶液洗。荚膜被脱色，但硫酸铜吸附在荚膜上呈现淡蓝色，与深紫色的菌体硫酸铜吸附在荚膜上呈现淡蓝色，与深紫色的菌体区分。区分。第2页/共19页实验材料实验材料v菌种菌种褐球固氮菌、胶质芽孢杆菌褐球固氮菌、胶质芽孢杆菌v试剂试剂绘图墨水绘图墨水1%甲基紫水溶液甲基紫水溶液6%葡萄糖水溶液葡萄糖水溶液20%硫酸铜水溶液硫酸铜水溶液甲醇甲醇香柏油香柏油二甲苯二甲苯v仪器和用具仪器和用具载玻片载玻片盖玻片盖玻片滤纸滤纸显微镜
3、显微镜镜头纸镜头纸第3页/共19页方法方法v湿墨水法湿墨水法v干墨水法干墨水法(P78)(P78)vAnthony氏法氏法(P79)(P79)第4页/共19页湿墨水法湿墨水法v制备细菌墨水混合液制备细菌墨水混合液v加盖玻片加盖玻片v镜检镜检第5页/共19页制备细菌墨水混合液制备细菌墨水混合液1、滴绘图墨水、滴绘图墨水 2、制备混合液、制备混合液绘图墨水绘图墨水滴滴1滴绘图滴绘图墨水在载玻墨水在载玻片中央片中央挑取少量菌苔挑取少量菌苔与墨水混与墨水混合均匀涂布合均匀涂布第6页/共19页加盖玻片加盖玻片在盖玻片上放一张在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压吸滤纸，轻轻按压吸干多余混合液干多余混合液1、加盖
4、玻片、加盖玻片将盖玻片一端将盖玻片一端浸泡在细菌墨浸泡在细菌墨水混合液中缓水混合液中缓缓盖上盖玻片缓盖上盖玻片2、吸去多余液体、吸去多余液体勿留气泡勿留气泡第7页/共19页镜检镜检1、镜检、镜检用低倍镜高用低倍镜高倍镜观察倍镜观察制片置显微制片置显微镜载物台上镜载物台上2、结果：、结果：背景灰色，菌体较背景灰色，菌体较暗，菌体周围荚膜呈现暗，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。明亮透明圈。第8页/共19页干墨水法干墨水法v制备细菌墨水混合液制备细菌墨水混合液v涂片涂片v固定固定v染色染色v镜检镜检第9页/共19页制备细菌墨水混合液制备细菌墨水混合液1、滴生理盐水、滴生理盐水 2、涂片、涂片6%葡萄糖葡
5、萄糖在载玻片一在载玻片一端端 滴一滴滴一滴6%葡萄糖水葡萄糖水挑取少量菌苔挑取少量菌苔再加一环再加一环墨水墨水,混混合均匀合均匀第10页/共19页涂片涂片1、先将推片一、先将推片一端放在混合液上端放在混合液上 2、将推片向另、将推片向另一端平行滑动一端平行滑动 3、使混合液、使混合液均匀铺成薄层均匀铺成薄层 4、干燥、干燥室温自然晾干室温自然晾干第11页/共19页固定、干燥固定、干燥甲醇固定，自然干燥甲醇固定，自然干燥 甲醇甲醇滴甲醇浸没滴甲醇浸没涂片涂片1分钟分钟倾去甲醇，倾去甲醇，室温自然干室温自然干燥燥注意：注意：固定及干燥均不能加热和固定及干燥均不能加热和用热风吹干，因为荚膜含水量高，
6、用热风吹干，因为荚膜含水量高，加热会使其失水变形。加热会使其失水变形。同时，菌体失水收缩，会与周围同时，菌体失水收缩，会与周围染料脱离产生透明区，导致不产染料脱离产生透明区，导致不产荚膜的细菌被误认为有荚膜。荚膜的细菌被误认为有荚膜。第12页/共19页染色染色1、滴甲基紫染液、滴甲基紫染液2、水洗、水洗不要直接冲菌膜不要直接冲菌膜甲基紫染液甲基紫染液甲基紫染液甲基紫染液染色染色1-2分钟分钟3、自然干燥、自然干燥第13页/共19页镜检镜检1、镜检、镜检用低倍镜高用低倍镜高倍镜观察倍镜观察制片置显微制片置显微镜载物台上镜载物台上2、结果：、结果：背景灰色，菌体紫背景灰色，菌体紫色，菌体周围荚膜呈
7、现色，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。明亮透明圈。第14页/共19页Anthony氏法氏法v制制片片v固定固定v染色染色v镜检镜检第15页/共19页制片、固定制片、固定生理盐水生理盐水 1、滴生理盐水、滴生理盐水 挑取少量菌苔挑取少量菌苔与生理盐水混匀与生理盐水混匀均匀涂布均匀涂布2、涂片、涂片滴半滴生理滴半滴生理盐水在载玻盐水在载玻片中央片中央 3、干燥固定、干燥固定室温自然晾干室温自然晾干第16页/共19页染色染色1%结晶紫染液结晶紫染液1、滴孔结晶紫染液、滴孔结晶紫染液滴结晶紫染滴结晶紫染色色2分钟分钟3、脱色、脱色20%CuSO4水溶液水溶液第17页/共19页镜检镜检1、镜检、镜检用低倍镜高用低倍镜高倍镜观察倍镜观察制片置显微制片置显微镜载物台上镜载物台上2、结果：、结果：背景灰色，菌体深背景灰色，菌体深紫色，菌体周围荚膜淡紫色，菌体周围荚膜淡紫色。紫色。第18页/共19页感谢您的观看！第19页/共19页