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1、血小板减少性紫癜患者抗核抗体以及抗心磷脂抗体的检验及其血小板减少性紫癜患者抗核抗体以及抗心磷脂抗体的检验及其临床应用价值探讨临床应用价值探讨刘亚;余志斌【摘【摘 要】要】目的 分析抗心磷脂抗体(ACA)、抗核抗体(ANA)检验与特发性血小板减少性紫癜(ITP)的相关性,并探讨检验实施价值.方法 选取 2016 年 4 月至 2018 年 6月在本院接受治疗的 48 例 ITP 患者作为研究组,同时选取同期入院接受健康体检的48 名健康者作为参照组,给予两组入选者 ANA、ACA 及抗可提性核抗原(ENA)检测,对比分析检验结果.结果 研究组 ACA、ANA 检测阳性率均显著高于参照组(P0.0
2、5);48 例 ITP 患者中,有 10 例 ANA 为阳性患者血液标本中出现1 种 ENA抗体,抗 SSA、nRNP 阳性率最高;ACA 阳性组患者治疗后血小板计数均显著低于ACA 阴性组(P0.05).结论 ACA 阳性可能是导致机体血小板减少的一个重要因素,在一定程度可反应机体免疫状态,对 ITP 诊断具有一定价值.【期刊名称】【期刊名称】中国医药指南【年【年(卷卷),),期】期】2019(017)016【总页数】【总页数】2 页(P7-8)【关键词】【关键词】血小板减少性紫癜;诊断;抗核抗体;抗心磷脂抗体;可提性核抗原【作【作 者】者】刘亚;余志斌【作者单位】【作者单位】重庆天府矿务局
3、职工总医院检验科,重庆 400700;重庆天府矿务局职工总医院检验科,重庆 400700【正文语种】【正文语种】中 文【中图分类】R554.6特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）属于临床治疗中一种具有较高发生率的出血性疾病，多数研究者均认为疾病的发生与免疫因素、病毒感染存在密切相关性1。抗心磷脂抗体（ACA）为属于一种抗磷脂抗体，其结合在磷脂抗原中，是自身免疫性抗体，与诸多自身免疫性疾病的发生均存在密切关系。既往研究显示，ACA 通过与血小板中的膜磷脂抗生素原相互结合，破坏血小板，导致血小板出现消耗性减少2。本研究主要探讨血清
4、 ANA、ACA水平与 ITP 存在的相关性，报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料：选取 48 例 2016 年 4 月至 2018 年 6 月在本院接受诊治的 ITP 患者作为研究对象。其中男 16 例，女 32 例，年龄 1458 岁，平均（38.94.8）岁。选择相同时间段在本院接受健康体检，且体检结果为良好的 48 名健康者作为参照组，所有入选者均签署知情同意书，自愿加入研究。纳入者男 18 名，女 30名；年龄 1559 岁，平均（38.74.6）岁；在纳入者相关基线资料（年龄、性别等）对比上，两组间差异无显著性（P0.05），具有可比性。1.2 病例纳入及排除标准：纳入标准：符
5、合 ITP 相关临床诊断标准3；血小板计数50109/mL；签署相关知情文件，自愿参与研究；临床检验资料齐全。排除标准：伴有系统性红斑狼疮；伴有其他结缔组织病。1.3 方法：抗核抗体、抗心磷脂抗体试剂均为德国 EUROIMMUN 公司提供。应用到仪器主要为 BC5800 全自动细胞分析仪（深圳迈瑞）、全自动酶标分析仪（上海讯达仪器公司）。在受检者空腹状态下采集其 2 mL 静脉血作为标本，静置使血清分离，该分离过程控制在 3 h 内结束，然后将样本放置于-20 环境中待测。检验过程中相关操作均严格按照仪器及试剂说明书规范进行。1.3.1 ACA 检测：通过酶联免疫吸附试验法行 ACA 含量检测
6、。使用稀释液按照1201 比例将待测血清样本稀释，然后再与质控、标准血清同时加至包被微孔中。经过孵育洗涤流程之后再将酶标记抗体加入。完成孵育洗涤流程后再将显色剂加入，通过酶标仪进行比色。以标准曲线为根据将标本中抗心磷脂抗体含量计算出来。1.3.2 ANA 检测：抗原基质为猴肝片、Hep-2 细胞。通过间接免疫荧光法实施ANA 含量检测。以猴肝片以及 Hep-2 细胞细胞核是否有特异性荧光产生作为根据判断检测标本中是否存在 ANA。1.3.3 ENA 检测：选用免疫印迹法进行 ANA 含量检测。先将皮肤敏感抗原、将亲和层析纯化核抗原核糖核蛋白、Scl-70、Jo-1、平滑肌抗原转印至硝酸纤维薄膜
7、上，再将血清、酶标记抗体加入。以硝酸纤维薄膜为根据判断是否显现颜色。以滴度是否1100 作为根据，判断是否存在某种抗 ENA 抗体。具体操作按照试剂盒说明书规范实施。给予患者 7 d 治疗后，再抽取其静脉血送检，行血小板计数复查。治疗方法为给予患者免疫球蛋白、糖皮质激素、止血药等。1.4 观察指标及检验结果判断：观察 ACA、ANA 以及 ENA 检测结果，ACA 含量12 IU/mL 判定为阳性；抗核抗体滴度1100 判断为 ANA 阳性；观察研究组患者治疗前、后血小板计数。1.5 统计学方法：以 SPSS 22.0 软件为工具行数据统计学分析。计数资料（检测阳性率等）采用例数和百分比（%）
8、表示，比较行 2 检验；计量资料（血小板计数）采用均数标准差（s）表示，比较行 t 检验。P0.05 表示差异具有统计学意义。表 1 两组 ACA、ANA 检测结果对比n（%）ACA 检测结果组别 例数 ANA 检测结果阳性 阴性 阳性 阴性参照组 48 0 48(100)0 48(100)研究组 48 14(29.17)34(70.83)20(41.67)28(58.33)2-16.390 0.000 P-25.263 0.000表 2 两组抗 ENA 抗体检测结果对比n（%）组别 例数 SSA 阳性 SSB 阳性 Sm 阳性 Jo-1 阳性 nRNP 阳性 Scl70 阳性参照组 48 0
9、 0 0 0 0 0 研究组 48 7(14.58)1(2.08)1(2.08)0 4(8.33)0 2-7.550 1.010 1.010-4.173-P-0.005 0.3140.314-0.041-表 3 两组 ANA 及 ACA 阳性、阴性 ITP 治疗前后血小板计数比较（s）组别 例数治疗前(10/L)治疗后(10/L)t P 99 ANA 阳性组 14 19.2811.35202.45119.25 5.694 0.000 ANA 阴性组 34 19.9010.63 221.35142.355.788 0.000 t-0.087 0.756-P-0.926 0.355-ACA 阳性组
10、 20 18.2611.36203.42115.62 7.111 0.000 ACA 阴性组 28 18.8210.47 240.46108.948.241 0.000 t-0.059 2.875-P-0.950 0.032-2 结 果2.1 两组 ACA、ANA 检测结果比较：研究组 ACA/ANA 阳性率均显著高于参照组（P0.05），见表 1。2.2 两组抗 ENA 抗体检测结果比较：在研究组患者中，有 10 例 ANA 为阳性的标本中出现1 种 ENA 抗体，抗 SSA、nRNP 阳性最高，见表 2。2.3 两组治疗前后血小板计数比较：治疗后，所有患者血小板计数均有显著提高，但 ACA
11、 阳性组显著低于 ACA 阴性组（P0.05），见表 3。3 讨 论ACA 是一种自身抗体，其靶抗原为内皮细胞膜上带负电荷心磷脂以及血小板。ACA 能够与带负电荷磷脂、狼疮样抗凝物质发生交叉反应。临床研究显示，ACA与习惯性流产、血栓形成、神经系统疾病发生、血小板减少均存在密切相关性 4。本研究分析结果显示，研究组 ACA 阳性率高达 70.83%，而健康者阳性率则为 0。张文兰文献指出，与 ACA 阴性者相比，ACA 阳性者出现血小板减少的概率要高出3 倍。曹新春等5文献指出，带负电荷的磷脂以及其他靶抗原均有可能是 ACA 的靶抗原。本次研究分析结果显示，ACA 阳性组患者治疗后血小板计数显
12、著低于ACA 阴性组。该结果表明，ACA 阳性可能是导致 ITP 患者血小板计数明显减少的一个重要原因，具体机制可能如下：ACA 可对血小板活化产生促进作用，血小板活化后构成内膜的负电荷磷脂能够翻转到表面，转变能够与 ACA 发生反应的状态，血小板、ACA 二者相互作用，导致巨噬细胞系统对血小板产生的破坏、吞噬作用不断增加，进而使血小板出现消耗性减少；血小板在 ACA 促进下活化后，血小板内容物花生四烯酸的释放明显减少，对内皮细胞释放前列环素产生明显抑制作用，进而引发血小板聚集，导致血栓形成，进一步减少血小板计数6-7。由此可知，行 ACA 测定在一定程度上能够反映 ITP 患者血清血小板遭受
13、损伤情况，对ITP 临床诊断具有一定意义。ANA 是一种自身抗体的总体，其靶抗原为细胞核内各种蛋白质分子以及蛋白质分子的复合物8。在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、血小板减少性紫癜等多种自身免疫性疾病中，细胞核的核内染色质、核仁、非组蛋白、由相关蛋白与 RNA构成的各种核糖核蛋白粒子均能够成为机体自身免疫反应攻击靶子，最终形成ANA9。周莲等10报道指出，在机体其他细胞的细胞核、血小板二者无交叉抗原情况下，ANA 阳性可能与血小板减少性紫癜的发生和进展无关联，但二者存在交叉抗原情况下，ANA 则可能是导致血液中血小板计数减少的一个重要因素。本次研究分析结果显示，ITP 患者 ANA 阳性率显著
14、高于健康者，ANA 阳性、阴性组治疗后血小板计数比较无显著差异。该结果表明，ITP 患者血清中虽然含有抗血小板抗体，但因该抗体、机体其他细胞细胞核二者间未存在交叉抗原，因此 ANA 产生有可能只是该疾病患者的一种伴随症状，因此该项指标无法作为 ITP 临床诊断的辅助性指标。但是当 ITP 患者出现 ANA 阳性时必须高度警惕，加强随访，仔细观察患者病情是否会发展成为其他自身免疫性疾病。综上所述，ACA 阳性可能是导致血清血小板含量减少的一个重要影响因素，同时还可反映血小板损伤情况，对ITP 诊断及疗效、预后评估均具有重要意义。参考文献【相关文献】1 张小华,朱小晖.重组人血小板生成素治疗小儿特
15、发性血小板减少性紫癜的研究J.检验医学与临床,2016,14(14)：2100-2102.2 曾勇,梁佩燕,刁梁辉,等.不明原因不孕患者血清中抗核抗体、抗心磷脂抗体和抗 2 糖蛋白 I 抗体的检测价值J.生殖医学杂志,2015,24(12)：998-1002.3 刘元税,欧阳艳红,宋维,等.中老年系统性红斑狼疮 54 例误诊病例分析J.临床误诊误治,2016,30(4)：24-28.4 陈芯仪,陈月红,孙瑞雪,等.694 例抗心磷脂抗体阳性病例病因构成和临床特点分析J.血栓与止血学,2015,21(2)：65-69.5 曹新春,何志强,李永伟.ANA 阴性而抗 SS-A 抗体阳性的临床意义J.
16、中国卫生检验杂志,2015,25(24)：4260-4261.6 张文兰,白力,胡同平.抗 IgG、IgM、IgA 型心磷脂抗体和抗 2 糖蛋白 1 抗体在系统性红斑狼疮患者中的意义J.免疫学杂志,2016,33(1)：59-62.7 郝勇,彭博,吉木斯,等.高球蛋白血症性紫癜并发干燥综合征 1 例J.中国皮肤性病学杂志,2016,30(12)：1355-1356.8 王淑英,王峰,王贞美,等.86 例系统性红斑狼疮患者抗核抗体谱检测结果分析J.中国实验诊断学,2016,20(3)：422-424.9 蒋跃根,曾学思,程险峰,等.抗核抗体、免疫球蛋白及补体在儿童白癜风疾病中的价值探讨J.检验医学与临床,2016,13(6)：743-745.10 周莲,符明昌,羊文芳.抗核抗体和抗核抗体谱联合检测诊断自身免疫性疾病的临床价值J.海南医学,2016,27(18)：2965-2968.