《M-sol洗涤并保存白膜汇集血小板的体外观察.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《M-sol洗涤并保存白膜汇集血小板的体外观察.pdf（7页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、M-solM-sol 洗涤并保存白膜汇集血小板的体外观察洗涤并保存白膜汇集血小板的体外观察李小飞;张守潘;韩雪莹;张学亮;李琰;刘正敏【摘【摘 要】要】目的 观察 M-sol 对手工血小板洗涤前后及保存的影响.方法 用白膜法分离 400ml 全血中的血小板 3540 ml,将 ABO 同型的 6 袋白膜层汇集,用 M-sol洗涤血小板并保存于 M-sol 保养液中,观察 0、24、48、72 h 血小板的功能变化及激活程度的差异.结果 经洗涤前后血小板数量、PMV、PDW 等的差异无统计学意义(P0.05)；洗涤后红细胞混入量(0.0120.004)109；白细胞的(0.0810.012)10
2、8 混入量也明显减少(P0.05)；洗涤后血小板的聚集性较洗涤前减弱(P0.05)；血小板 CD62P 的激活率增高 30.483.62(P0.05).在M-sol 保养液液中保存 48h 后,血小板 CD62P 的激活率是 47.736.72,血小板的聚集性为 42.362.21,与保存前相比有差异,但仍在正常范围内.结论 M-sol 洗涤血小板后并在保养液中保存 48 h,血小板的质量指标仍在正常范围内.【期刊名称】【期刊名称】临床输血与检验【年【年(卷卷),),期】期】2012(014)001【总页数】【总页数】4 页(P48-51)【关键词】【关键词】血小板;洗涤;汇集白膜法;M-so
3、l;保存【作【作 者】者】李小飞;张守潘;韩雪莹;张学亮;李琰;刘正敏【作者单位】【作者单位】250001 山东省血液中心济南血站;250001 山东省血液中心济南血站;250001 山东省血液中心济南血站;250001 山东省血液中心济南血站;250001山东省血液中心济南血站;250001 山东省血液中心济南血站【正文语种】【正文语种】中 文【中图分类】【中图分类】R331.1+43血浆保存的血小板由于易产生过敏反应,不易长期保存且易产生细菌等,使得去除血浆用血小板添加液保存血小板引起重视。笔者尝试了 M-sol 保存液洗涤血小板去除 98%的血浆,并以 M-sol 保存的体外试验研究,发
4、现这样有利于血小板的无菌保存。现报道如下。1 试剂和仪器 血细胞计数仪 K4500(日本 Sysmex);流式细胞仪(美国 Becton-Dickinson 公司);Ph 计 sx3804(上海大普仪器公司);CD62-PE 和 IgG1-PE 单抗(sigma 公司),凝血酶(sigma 公司);ADP-钠(sigma 公司)乳酸试剂盒(批号:20080722,南京建成生物工程研究所);磷酸盐缓冲液(PBS,南京化学试剂一厂)。2 血小板保养液 M-sol 的配制 氯化钠 77 mmol/L,氯化钾 3 mmol/L,氯化钙 1mol/L,乙酸钠 21 mmol/L,葡萄糖 15 mmol/
5、L,柠檬酸钠 9.4 mmol/L,柠檬酸 4.8mmol/L,碳酸氢钠 44 mmol/L,硫酸镁 1.6 mmol/L 滤器过滤消毒1。3 汇集白膜法血小板(PCs)的制备工艺 用四联袋采集 400 ml 新鲜全血,保存在(22 2),在 46 h 内离心,分离出白膜层,将 6 袋检验合格且同血型的 PCs 轻轻混合,均匀分离出富含血小板血浆,富含血小板血浆以 600 r/min 离心 5 min,进一步去除红细胞,即得汇集 PCs,(222)条件下振荡 1 h 解聚血小板。4 PCs 洗涤工艺 将汇集 PCs 分别用 100 150 ml M-sol(222)稀释,轻轻混合均匀后离心 3
6、 400 r/min,10 min,去处全部的上清液,血袋底部的血小板压积置 3min 自然解聚,使血小板悬浮在 M-sol 保养液 200 ml,即得一个治疗量洗涤汇集PCs,分别取样检测。分别检测血小板的数量、红细胞和白细胞的混入量、血小板的分布宽度(PDW),血小板的平均体积(MPV)、pH 值。5 检测项目血浆蛋白残留量的检测参照文献2;乳酸测定按照试剂盒的说明操作;血小板表面 CD62P 表达率检测参照文献3;血小板聚集性检测参照文献4。选择最佳的洗液后,将血小板保存在 M-sol 中,(222)分别振荡 24、48、72 h 取样。6统计学处理 应用 SPSS12.0 软件,实验数
7、据用s 表示,采用“单因素方差分析”进行多重比较。1 M-sol 洗涤血小板前后的结果比较 血小板的质量和功能指标比较见表 1,血小板数量,血小板的平均宽度(PDW),血小板的平均体积(MPV)的差异无统计学意义(P0.05);洗涤前后红细胞的混入量、白细胞的混入量明显减少,血浆的残余量也明显减少,与洗涤前相比差异有统计学意义(P0.05);洗涤后血小板的聚集性较洗涤前有所降低(P0.05),CD62P 的激活率增高(P0.05);洗涤后血小板分别保存 0、24、48、72 h 后血小板的质量和功能指标比较见表 2,血小板数量,血小板的分布宽度(PDW)、血小板的平均体积(MPV)的差异无统计
8、学意义(P 0.05)。2 乳酸含量(mmol/l)检测显示,乳酸的含量随着时间的延长,呈增高趋势,但在 72 h时,乳酸的含量相对较高。pH 测定结果显示,随着保存时间的延长,pH 值呈降低趋势,72 h 时与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。CD62 的激活情况随时间的延长,激活率不断增多,但还在可以接受的范围内,见图 1;血小板聚集性的检测发现,保存 48 h 和 72 h 后聚集性与 0 h 组相比,差异有统计学意义。目前国内绝大多数血站供应临床的仅有浓缩血小板产品,由于浓缩血小板的悬浮液采用供者血浆,临床应用中存在一系列问题:对血浆蛋白过敏,lg A 缺乏等患者输注后可能会出
9、现严重的过敏反应;血浆中的抗体、补体、凝血酶、纤溶酶等物质影响输注疗效;许多生物反应物质影响可导致输血不良反应;同种异体蛋白抗原可致同种免疫,出现输注无效。同时,浓缩血小板产品中残留的白细胞与血小板竞争血浆中的营养,可加速血小板贮存损伤,直接产生有害影响,引起同种免疫和 EB 病毒感染5,6。同时,1 个治疗量的血小板需要多份血小板的混合,这样更加大了引起同种免疫和病毒感染的机会。因此,本实验用洗液洗涤血小板,使红细胞残存量和白细胞的残存量降到最低,血浆蛋白的清除率达到 98%以上,因此可避免以上反应的发生。最近有报道一种新的血小板添加液 M-sol1,其中含有的葡萄糖和乙酸钠是血小板代谢所需
10、要的营养成分。在室温条件下血小板代谢的能量首先来自葡糖糖,其次来源于乙酸钠7。目前发现乙酸钠是有氧氧化途径的重要物质,乙酸钠可转变成乙酰-CoA,进入三羧酸循环后氧化代谢提供能量。碳酸氢钠和磷酸钠主要用于提高添加液的缓冲能力,枸橼酸盐主要用于抑制血小板的活化和聚集,而钾离子和镁离子可以抑制血小板的代谢,维持血小板膜的稳定性8,9。本实验用 M-sol 洗涤后,血小板中混入的红细胞和白细胞量明显降低,且血浆蛋白的清除率在 98%以上,因此,可以有效减少因血浆或病毒引起的输血反应。用 M-sol 保存血小板,可提供血小板营养代谢需要的物质,且经过滤除菌,比在血浆中保存有更好的生存环境。CD62 是
11、血小板在保存期间活化的重要标志之一,是存在于血小板 颗粒膜的蛋白分子,能在血小板激活时与血小板质膜融合并表达于膜表面,通过检测 CD62p 的阳性表达率可了解血小板贮存期间的活动状况。已有研究表明,已活化的血小板输注后很快就会在循环血液中被清除,且血小板的回收率低、寿命缩短10。本实验连续观察了洗涤后血小板保存 48 h 后血小板的质量指标仍在正常范围内,但是 72 h的血小板 CD62p 激活明显增多,但是能保存 48 h,比用生理盐水洗涤保存 6 h 已延长了很多,与 Ringwald 等报道的结果一致11。最近有报道 M-sol 作为洗液洗涤血小板效果较好,24 h 血小板的质量变化不大
12、,但是 72 小时后血小板的功能受损严重,与本报道结果一致12。因此用 M-sol 洗涤并保存的血小板,为临床应用手工血小板减少了风险,特别是对有过敏或自身抗体的患者提供了输血抢救生命的可能。1 Hirayama J,Azuma H,Fujihara M,et al.Storage of platelets in a noveladditive solution(M-sol),which is prepared by mixing solutions approvedfor clinical use that are notespeciallyforplateletstorageJ.Trans
13、fusion,2007,47(6):960-965.2 汤小娴.机采血小板输注治疗血小板严重减少的疗效观察 J.宁波大学学报(理工板),2002,15(2):95.3 傅菊芳,王小芳,戴月娥,等.血液病患者血小板输注无效的分析与护理J.中华护理杂志,2000,35(10):596-598.4 邱艳,主编.全血成分血质量要求与血液标准化 M.北京:中国标准出版社,2003:120.5 Kurz M,Knobl P.platelet-reactive HLA antibodies associated with how acomparison between the monoclonal anti
14、body specific immobilization ofplatelet antigens assay and the lymphocytotoxicitytestJ.Transfusion,2001,41(6):771-774.6 陈红霞,赵凤绵.汇集白膜层血小板的制备及洗涤工艺探索 J.河北医药,2006,28(10):992-993.7 Azuma H,Hirayama J,Akino M,et al.Reduction in adverse reactions toplatelets by the removal of plasma supernatant and resuspe
15、nsionin a newadditive solution(M-sol)J.Transfusion.2009,49(2):214-218.8 Hirayama J,Azuma H,Fujihara M,et al.Storage of platelets in a noveladditive solution(M-sol),which is prepared by mixing solutions approvedfor clinical use that are not especially for plateletstorage.Transfusion,2007,47(6):960-96
16、5.9 van der Meer PF.Platelet additive solutions:A futureperspectiveJ.Transfus Clin Biol.2007,14(6):522-525.10 陈红霞,赵凤绵,王毅,等.洗涤汇集白膜层血小板的临床应用 J.临床输血与检验,2008,110(1):71-73.11 Ringwald J,Althoff F,Zimermann R,et al.Washing platelets with newadditive solutions:aspects on the in vitro quality after 48 hours
17、 ofshorageJ.Transfusion,2006,46(2):236-243.12 HirayamaJ,AzumaH,Fujihara M.Comparison between in vitro qualities ofplatelets washed with commercially available additive solutions and thosewashed with M-solJ.Vox Sang,2010,99(2):131-135.【相关文献】1 Hirayama J,Azuma H,Fujihara M,et al.Storage of platelets i
18、n a novel additive solution(M-sol),which is prepared by mixing solutions approved for clinical use that are notespeciallyforplateletstorageJ.Transfusion,2007,47(6):960-965.2 汤小娴.机采血小板输注治疗血小板严重减少的疗效观察 J.宁波大学学报(理工板),2002,15(2):95.3 傅菊芳,王小芳,戴月娥,等.血液病患者血小板输注无效的分析与护理J.中华护理杂志,2000,35(10):596-598.4 邱艳,主编.全
19、血成分血质量要求与血液标准化 M.北京:中国标准出版社,2003:120.5 Kurz M,Knobl P.platelet-reactive HLA antibodies associated with how a comparisonbetween the monoclonal antibody specific immobilization of platelet antigens assay andthe lymphocytotoxicity testJ.Transfusion,2001,41(6):771-774.6 陈红霞,赵凤绵.汇集白膜层血小板的制备及洗涤工艺探索 J.河北医药
20、,2006,28(10):992-993.7 Azuma H,Hirayama J,Akino M,et al.Reduction in adverse reactions to platelets by theremoval of plasma supernatant and resuspensionin a new additive solution(M-sol)J.Transfusion.2009,49(2):214-218.8 Hirayama J,Azuma H,Fujihara M,et al.Storage of platelets in a novel additive sol
21、ution(M-sol),which is prepared by mixing solutions approved for clinical use that are not especiallyfor platelet storage.Transfusion,2007,47(6):960-965.9 van der Meer PF.Platelet additive solutions:A future perspectiveJ.Transfus ClinBiol.2007,14(6):522-525.10 陈红霞,赵凤绵,王毅,等.洗涤汇集白膜层血小板的临床应用 J.临床输血与检验,2
22、008,110(1):71-73.11 Ringwald J,Althoff F,Zimermann R,et al.Washing platelets with new additivesolutions:aspects on the in vitro quality after 48 hours ofshorageJ.Transfusion,2006,46(2):236-243.12 HirayamaJ,AzumaH,Fujihara M.Comparison between in vitro qualities of plateletswashed with commercially available additive solutions and those washed with M-solJ.Vox Sang,2010,99(2):131-135.【中图分类号】R331.1+43【