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1、病毒的检测病毒的检测生物学检测生物学检测免疫学检测免疫学检测核酸的检测核酸的检测第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法一一.标本的采集与送检标本的采集与送检 1.1.标本中常加入抗生素。标本中常加入抗生素。2.2.低温保存，尽快送检。低温保存，尽快送检。3.3.血清学标本：两份血清学标本：两份二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定标本分离分离培养培养动物接种动物接种鸡胚培养鸡胚培养细胞培养细胞培养病毒形态观察病毒形态观察光镜光镜电镜电镜包涵体包涵体病毒体病毒体CPETCID50 ,PFU（一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养 1 1.动物接种动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培
2、养应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高缺点：有饲养条件要求，费用高，动物动物 体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒动物接种2.2.鸡胚培养鸡胚培养 采用孵化采用孵化采用孵化采用孵化9 9 9 9-14141414天的鸡胚天的鸡胚天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜（allantocherionallantocherion）痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔尿囊腔（allantoic cavityallantoic cavity）接种部
3、位接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔羊膜腔（amniotic cavityamniotic cavity）流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离 卵黄囊卵黄囊（yolk sacyolk sac）嗜神经病毒嗜神经病毒 优点：优点：易管理易管理，不带微生物不带微生物，成本较低成本较低缺点：缺点：操作程序复杂操作程序复杂3.3.细胞培养细胞培养 单层细胞培养（单层细胞培养（单层细胞培养（单层细胞培养（monolayer cell culturmonolayer cell culturmonolayer cell culturmonolayer cell culture e e
4、e）悬浮细胞培养（悬浮细胞培养（悬浮细胞培养（悬浮细胞培养（suspended cell culturesuspended cell culturesuspended cell culturesuspended cell culture）原代细胞原代细胞原代细胞原代细胞（primary cellprimary cellprimary cellprimary cell）细胞种类细胞种类细胞种类细胞种类 二倍体细胞（二倍体细胞（二倍体细胞（二倍体细胞（diploid celldiploid celldiploid celldiploid cell）传代细胞系传代细胞系传代细胞系传代细胞系（cont
5、inuous cell linecontinuous cell linecontinuous cell linecontinuous cell line）病毒的细胞培养病毒的细胞培养细胞培养瓶细胞培养瓶细胞培养瓶细胞培养瓶单层细胞单层细胞单层细胞单层细胞 病毒增殖的指征病毒增殖的指征 1.细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPECPE)细细胞胞变变圆圆、聚聚集集、坏坏死死、溶溶解解或或脱脱落落等等（多数病毒）（多数病毒）；形形成成多多核核巨巨细细胞胞或或称称融融合合细细胞胞（麻麻疹疹病病毒毒、巨细胞病毒巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒等）等）；在在培培养养细
6、细胞胞中中形形成成包包涵涵体体（狂狂犬犬病病病病毒毒、麻疹病毒等麻疹病毒等）。）。麻疹病毒感麻疹病毒感麻疹病毒感麻疹病毒感染细胞染细胞染细胞染细胞呼吸道合胞病呼吸道合胞病呼吸道合胞病呼吸道合胞病毒感染细胞毒感染细胞毒感染细胞毒感染细胞形成形成形成形成多核巨细胞或称融合细胞多核巨细胞或称融合细胞多核巨细胞或称融合细胞多核巨细胞或称融合细胞形成包涵体形成包涵体形成包涵体形成包涵体(inclusion bodyinclusion bodyinclusion bodyinclusion body)腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞2 2.红细胞吸附红细胞吸附（hemadsorptionhemadso
7、rption）病毒病毒囊囊膜表面血凝素膜表面血凝素(HAHA)红细胞红细胞表面表面HAHA受体受体3 3.干扰现象干扰现象（interferenceinterference）4 4.细胞代谢改变细胞代谢改变 细胞代谢变慢细胞代谢变慢 pHpH变化减慢变化减慢（二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定 病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定 病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定 病毒分子生物学鉴定病毒分子生物学鉴定（三）（三）病毒数量与感染性测定病毒数量与感染性测定1 1.血凝试验：病毒总量（活病毒血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）死病毒）2.2.空空斑形成试验斑形成试验 （plaque formation tesplaq
8、ue formation test t）3 3.5050组织细胞感染量组织细胞感染量 （5050 tissue culturetissue culture infectious dose,infectious dose,TCIDTCID5050）感染性病毒量感染性病毒量空斑试验空斑试验三、病毒感染的血清学诊断三、病毒感染的血清学诊断应用应用：采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚目目目目前前前前尚尚尚尚无无无无分分分分离离离离此此此此病病病病毒毒毒毒的的的的方方方方法法法法或或或或难难难难以以以以分分分分离的病毒离的病毒离的病毒离的病毒
9、为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等1 1.中和试验中和试验（neutralizing testneutralizing test）病毒病毒中和抗体中和抗体 病毒失去感染性病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用临床诊断少用 2.2.血凝抑制试验血凝抑制试验（hemagglutinatihemagglutinatihemagglutin
10、atihemagglutination on on on i i i inhibition testnhibition testnhibition testnhibition test）正粘正粘病毒型与亚型病毒型与亚型鉴定鉴定 病毒病毒病毒病毒鸡鸡鸡鸡红细胞红细胞红细胞红细胞凝集（血凝试验）凝集（血凝试验）凝集（血凝试验）凝集（血凝试验）病毒病毒病毒病毒特异性抗体特异性抗体特异性抗体特异性抗体鸡鸡鸡鸡红细胞红细胞红细胞红细胞不凝集不凝集不凝集不凝集 （血凝抑制试验）（血凝抑制试验）（血凝抑制试验）（血凝抑制试验）3 3.补体结合试验补体结合试验 （complement fixation tes
11、tcomplement fixation test）用已知病毒可溶性补体抗原检测病用已知病毒可溶性补体抗原检测病 人血清中相应的补体抗体人血清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消特点：特异性低，抗体出现早，消失快失快 应用：近期感染指标。应用：近期感染指标。四、病毒感染的快速诊断四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果数小时内出结果病毒颗粒病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测早期抗体检测（I IgMgM）（一）（一）形态学检查形态学检查电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查普通光学显微镜检查 包涵体包涵体（二）（二）病毒成分检测病毒成分检测
12、1 1 1 1.病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术2 2 2 2.病毒核酸检测病毒核酸检测病毒核酸检测病毒核酸检测 核酸扩增技术核酸扩增技术核酸扩增技术核酸扩增技术 核酸杂交技术核酸杂交技术核酸杂交技术核酸杂交技术 基因芯片技术基因芯片技术基因芯片技术基因芯片技术 基因测序基因测序基因测序基因测序（三三）早期抗体检测早期抗体检测 可诊断急性感染可诊断急性感染可诊断急性感染可诊断急性感染 特异性特异性特异性特异性IgMIgMIgMIgM抗体抗体抗体抗体：孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒
13、 EBVEBVEBVEBV早期抗原早期抗原早期抗原早期抗原抗体抗体抗体抗体 第二节第二节 病毒感染的特异性病毒感染的特异性预防预防人工主动免疫人工主动免疫(artificial active immunization):将疫苗(vaccine)或类毒素(toxoid)接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施。主要用于预防疫疫苗苗 第一代疫苗第一代疫苗第二代疫苗第二代疫苗第三代疫苗第三代疫苗死疫苗活疫苗亚单位疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗合成肽疫苗DNA疫苗转基因植物疫苗*载体疫苗载体疫苗 利用非致病微生物做利用非致病微生物做载体载体，将病毒的，将病毒的保护保护性抗原基因片
14、段性抗原基因片段重组到载体微生物基因组中，重组到载体微生物基因组中，用表达保护性抗原的微生物作为疫苗。用表达保护性抗原的微生物作为疫苗。载体疫苗是载体疫苗是活疫苗活疫苗，具有和减毒活疫苗相似，具有和减毒活疫苗相似的特点。的特点。*亚单位疫苗亚单位疫苗 用用化化学学方方法法裂裂解解和和提提取取而而制制成成的的病病毒毒保护性抗原组份。保护性抗原组份。其特点与灭活疫苗类似。其特点与灭活疫苗类似。基因工程亚单位疫苗基因工程亚单位疫苗*用基因工程表达的用基因工程表达的病毒蛋白抗原病毒蛋白抗原制成的疫苗。制成的疫苗。*表达外源基因的系统表达外源基因的系统-细菌、酵母、哺乳细菌、酵母、哺乳动物细胞、昆虫细胞
15、等。动物细胞、昆虫细胞等。*基因工程亚单位疫苗的安全性好，但免疫原基因工程亚单位疫苗的安全性好，但免疫原性较差，需使用佐剂以提高其免疫原性。性较差，需使用佐剂以提高其免疫原性。*核酸疫苗核酸疫苗 将编码病毒某种抗原蛋白的外源基因，将编码病毒某种抗原蛋白的外源基因，即抗原的即抗原的cDNA或或mRNA与载体（如质与载体（如质 粒粒DNA）重组直接注入体内，使体细重组直接注入体内，使体细 胞编码病毒抗原，并通过细胞胞编码病毒抗原，并通过细胞MHC分分 子结合递呈后，在辅助因子的协助下诱子结合递呈后，在辅助因子的协助下诱 导细胞免疫和抗体应答。导细胞免疫和抗体应答。DNA疫苗；疫苗；RNA疫苗。疫苗。人工被动免疫人工被动免疫(artificial passive immunization)输入含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫力的过程。*免疫球蛋白免疫球蛋白 *细胞免疫制剂细胞免疫制剂第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗（一）抗病毒的化学制剂（一）抗病毒的化学制剂 核苷类药物核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物其他抗病毒药物核苷类药物 阿昔洛韦：抗疱疹病毒 阿糖腺苷 拉米夫定：慢性乙型肝炎 利巴韦林：即病毒唑，治疗流感病毒和呼吸道合胞病毒