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1、第四章 消毒与灭菌技术 P19 灭菌：灭菌：利用物理和化学方法杀灭或除去物利用物理和化学方法杀灭或除去物料及设备中所有微生物的过程，包括繁殖体料及设备中所有微生物的过程，包括繁殖体和芽孢。和芽孢。消毒：消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、用物理或化学方法杀死物料、容器、环境中的一切病原微生物，一般只能杀死营环境中的一切病原微生物，一般只能杀死营养细胞而不能杀死芽孢。养细胞而不能杀死芽孢。消毒不一定能达到杀菌的要求，而灭菌能消毒不一定能达到杀菌的要求，而灭菌能达到消毒的要求。达到消毒的要求。思考：消毒与灭菌的概念及区别思考：消毒与灭菌的概念及区别第一节 化学灭菌方法P19原理：某些化学药剂能与
2、微生物细胞物质原理：某些化学药剂能与微生物细胞物质发生反应而具有杀菌作用。如甲醛、氯发生反应而具有杀菌作用。如甲醛、氯（或次氯酸钠）、高锰酸钾、环氧乙烷、（或次氯酸钠）、高锰酸钾、环氧乙烷、季铵盐（如新洁尔灭）等。季铵盐（如新洁尔灭）等。适用范围：化学药剂适于接种室、培养室适用范围：化学药剂适于接种室、培养室等环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭等环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭菌等。菌等。化学药品的灭菌使用方法，根据灭菌对象化学药品的灭菌使用方法，根据灭菌对象的不同有浸泡、添加、擦拭、喷洒、气态的不同有浸泡、添加、擦拭、喷洒、气态熏蒸等。熏蒸等。1醇：醇：70-75酒精溶液酒精溶液 75酒精
3、溶液的杀酒精溶液的杀菌作用在于使细胞脱水，引起蛋白质凝固变菌作用在于使细胞脱水，引起蛋白质凝固变性。对营养细胞、病毒、霉菌孢子均有杀死性。对营养细胞、病毒、霉菌孢子均有杀死作用，但对细菌的芽孢杀死作用较差。常用作用，但对细菌的芽孢杀死作用较差。常用于皮肤和器具表面杀菌。于皮肤和器具表面杀菌。苯氧乙醇苯氧乙醇2%水溶液水溶液2酸：酸：乳酸（丙醇酸、乙羟基丙酸乳酸（丙醇酸、乙羟基丙酸)，乙酸，乙酸，过氧乙酸过氧乙酸 过氧乙酸是强氧化剂，它是广谱、过氧乙酸是强氧化剂，它是广谱、高效、速效的化学杀菌剂，对营养细胞、细高效、速效的化学杀菌剂，对营养细胞、细菌芽孢、真菌孢子和病毒都有杀灭作用。菌芽孢、真菌
4、孢子和病毒都有杀灭作用。3碱：碱：石灰水石灰水（熟石灰的水溶液）（熟石灰的水溶液）4酚类酚类：苯酚（石炭酸、苯酚（石炭酸、C6H6O）毒性较大，毒性较大，易污染环境，且水溶性差，使应用受到限制，易污染环境，且水溶性差，使应用受到限制，而酚类衍生物的使用，扩大了作为消毒剂的而酚类衍生物的使用，扩大了作为消毒剂的使用范围。使用范围。来苏儿（甲酚皂溶液）来苏儿（甲酚皂溶液）5醛：醛：甲醛甲醛 甲醛甲醛(HCHO)是强还原剂，它能是强还原剂，它能与蛋白质的氨基结合，使蛋白质变性，对与蛋白质的氨基结合，使蛋白质变性，对氨基和蛋白质的变性有较强活性，这是用氨基和蛋白质的变性有较强活性，这是用甲醛作为灭菌剂
5、的根据。使用时可以以甲醛作为灭菌剂的根据。使用时可以以2份份37甲醛溶液与甲醛溶液与1份份KMnO4混合，或者将混合，或者将37甲醛溶液直接加热，产生气态甲醛用甲醛溶液直接加热，产生气态甲醛用于灭菌。甲醛灭菌的缺点是穿透力差。于灭菌。甲醛灭菌的缺点是穿透力差。福尔马林（甲醛福尔马林（甲醛30-40%水溶液）水溶液）戊二醛戊二醛 在酸性条件下，不具有杀死芽孢的在酸性条件下，不具有杀死芽孢的能力，只有在碱性条件下，才具有杀死芽能力，只有在碱性条件下，才具有杀死芽孢的能力，常用孢的能力，常用2的溶液，常用于器具、的溶液，常用于器具、仪器和工具等灭菌。仪器和工具等灭菌。6氧化剂：氧化剂：高锰酸钾高锰酸
6、钾 高锰酸钾溶液的灭菌作用是使蛋白质、氨基酸氧高锰酸钾溶液的灭菌作用是使蛋白质、氨基酸氧化，使微生物死亡，一般用化，使微生物死亡，一般用0.10.25的溶液。的溶液。氯气氯气 Cl2+H2O HClO+HCl 次氯酸次氯酸 盐酸盐酸 过氧化氢，环氧乙烷，漂白粉（含氯消毒剂），过氧化氢，环氧乙烷，漂白粉（含氯消毒剂），漂白粉：（次氯酸钠、氯化钙、氢氧化钠的混合物）漂白粉：（次氯酸钠、氯化钙、氢氧化钠的混合物）漂白粉漂白粉的化学名称是次氯酸盐的化学名称是次氯酸盐(次氯酸钠，次氯酸钠，NaOCl)，它是强氧化剂，它是强氧化剂，也是廉价易得的灭菌剂。它的杀菌作用是次氯酸钠分解为次也是廉价易得的灭菌剂。
7、它的杀菌作用是次氯酸钠分解为次亚氯酸，后者不稳定，在水溶液中分解为新生态氧和氯，使亚氯酸，后者不稳定，在水溶液中分解为新生态氧和氯，使细菌受强烈氧化作用而导致死亡，对杀死细菌和噬菌体均有细菌受强烈氧化作用而导致死亡，对杀死细菌和噬菌体均有效。效。臭氧：臭氧：原理（常温常压下）原理（常温常压下）O3=O2+O(单个氧原子）。单个氧原子）。特点：特点：不存在任何有毒残留物，称为无污染消毒剂。不存在任何有毒残留物，称为无污染消毒剂。适用：环境消适用：环境消毒毒去垢剂：去垢剂：新洁尔灭新洁尔灭（苯扎溴铵、溴化苄烷（苯扎溴铵、溴化苄烷铵）铵）新洁尔灭是表面活性剂类洁净消毒剂。它新洁尔灭是表面活性剂类洁净
8、消毒剂。它在水溶液中以阳离子形式与菌体表面结合，在水溶液中以阳离子形式与菌体表面结合，引起菌体外膜损伤和蛋白变性。引起菌体外膜损伤和蛋白变性。10 min能能杀死营养细胞，但对细菌芽孢几乎没有杀杀死营养细胞，但对细菌芽孢几乎没有杀灭作用。一般用于器具和生产环境的消毒，灭作用。一般用于器具和生产环境的消毒，不能与合成洗涤剂合用，不能接触铝制品。不能与合成洗涤剂合用，不能接触铝制品。第二节 物理灭菌的方法P13（一）干热灭菌法进行干热灭菌时，进行干热灭菌时，微生物细胞发生氧化微生物细胞发生氧化，微生物微生物体内蛋白质变性和电解质浓缩引起中毒体内蛋白质变性和电解质浓缩引起中毒等作用，等作用，其中氧化
9、作用导致微生物死亡是主要依据。其中氧化作用导致微生物死亡是主要依据。由于微生物对干热的耐受力比对湿热强得多，故由于微生物对干热的耐受力比对湿热强得多，故干热灭菌所需的温度要高，时间要长，一般干热灭菌所需的温度要高，时间要长，一般160170，11.5 h。实际应用时，对一些要求保持干燥的实验器具和实际应用时，对一些要求保持干燥的实验器具和材料可以采用干热灭菌法材料可以采用干热灭菌法（一）干热灭菌法是一种极端的手段，温度高、时间长。原理：氧化作用是干热灭菌的主要根据。160-170持续2h或170-180持续1h；18045min,180持续2h或25045min；140持续3h；160保温1
10、h。自然降温至60才能开启箱门取出材料。主要针对必须保持干燥的实验器具或材料（培养皿、接种针、固定化细胞用的载体材料等）。（二）火焰灭菌法 利用火焰利用火焰直接杀死直接杀死微生物的灭菌法称为微生物的灭菌法称为火焰灭菌法。该法方法对设备要求低，火焰灭菌法。该法方法对设备要求低，操作简单，灭菌彻底，但使用范围有操作简单，灭菌彻底，但使用范围有限，限，仅适用于接种针、玻璃棒、三角仅适用于接种针、玻璃棒、三角瓶口等的灭菌瓶口等的灭菌。（三）（三）湿热灭菌技术湿热灭菌技术P11湿湿热热蒸蒸汽汽比比干干热热空空气气穿穿透透力力大大，易易使使菌菌体体蛋蛋白白变变性性而而使使微微生生物物死死亡亡。利利用用饱饱
11、和和蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌法。蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌法。1流流通通蒸蒸汽汽法法。只只能能杀杀死死营营养养体体而而不不能能杀杀死芽孢死芽孢2间间歇歇蒸蒸汽汽灭灭菌菌法法。适适用用于于不不耐耐高高温温的的物物品，可达到完全灭菌的目的。品，可达到完全灭菌的目的。3高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌法法。彻彻底底迅迅速速的的灭灭菌菌方方法法，最常用。最常用。（三）（三）湿热灭菌技术湿热灭菌技术P111流流通通蒸蒸汽汽法法。将将材材料料置置于于蒸蒸锅锅或或蒸蒸锅锅的的笼笼屉屉上上，盖盖好好盖盖，待待有有蒸蒸汽汽均均匀匀冒冒出出后后，持持续续15min。只只能能杀杀死死营营养养体体而而不不能能杀杀死
12、芽孢。死芽孢。简简易易消消毒毒法法，适适用用与与消消毒毒餐餐具具、衣衣裤裤等等的消毒的消毒（三）（三）湿热灭菌技术湿热灭菌技术P112间歇蒸汽灭菌法间歇蒸汽灭菌法。100流流通通蒸蒸汽汽加加热热30min，培培养养箱箱内内常常温温过过夜夜或或24h后后芽芽孢孢萌萌发发成成营营养养体体，再再用用蒸蒸汽汽灭灭菌菌。反反复复三三次次即即可可。可可达达到到完完全全灭菌的目的。灭菌的目的。适适用用于于不不耐耐高高温温的的物物品品，如如血血清清培培养养基基的灭菌。的灭菌。（三）（三）湿热灭菌技术湿热灭菌技术P113高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌法法。一一般般我我们们所所说说的的湿湿热热灭灭菌菌法法指指的的就就是
13、是高高温温蒸蒸汽汽灭灭菌菌法法。常常用用高高 压压 蒸蒸 汽汽 灭灭 菌菌 器器。条条 件件 为为 121，101KPa，1530 min，因为蒸汽穿透能力强，灭菌效果好，所以湿热灭菌为最基本的灭菌方法。原原理理：借借助助于于蒸蒸汽汽释释放放的的热热能能使使微微生生物物细细胞胞中中的的蛋蛋白白质质、酶酶和和核核酸酸分分子子内内部部的的化化学学键键，特特别别是是氢氢键键受受到到破破坏坏，引引起起不不可逆的变性，使微生物死亡。可逆的变性，使微生物死亡。（三）（三）湿热灭菌技术湿热灭菌技术3高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法由由于于蒸蒸汽汽有有很很强强的的穿穿透透能能力力，湿湿热热灭灭菌菌对对耐耐热热芽芽
14、孢孢杆杆菌菌来来说说，温温度度升升高高10 时时，灭灭菌菌速速度度常常数数可可增增加加810倍倍，对对营营养养细细胞更高。胞更高。蒸蒸汽汽来来源源方方便便，价价格格低低廉廉，灭灭菌菌效效果果可可靠靠，是是目目前前最最为为常常用用的的灭灭菌菌方方法法。因此实验室、工厂化生产中广泛采用湿热灭菌。湿热灭菌有经济快速经济快速等特点第三节 其他灭菌技术低温法巴氏消毒法煮沸消毒法辐射法渗透压法机械除菌法（过滤除菌）1、煮沸灭菌法、煮沸灭菌法方法：方法：煮沸15-30min,可杀灭营养体；煮沸1-2h,可杀灭芽孢。加盐（2%碳酸氢钠）可加速芽孢死亡适用于：适用于：金属器械，食具。2、巴氏消毒法、巴氏消毒法原
15、理：利用病原体不耐热，用适当的温原理：利用病原体不耐热，用适当的温 度与保温时间处理后即可将其全度与保温时间处理后即可将其全 部杀死。部杀死。目的：杀灭营养体目的：杀灭营养体方法方法:(1)63C，保持，保持30min (2)74C,保持保持30s适用适用:牛奶，发酵产品牛奶，发酵产品3.辐射灭菌法辐射灭菌法定义：紫外线、高能电磁波或放射性物质产生的高能粒子能起到灭菌的作用。种类：紫外线杀菌 微波消毒 60Co灭菌4.4.紫外线杀菌紫外线杀菌波长为200-300nm的紫外线有杀菌能力。256-266nm杀菌力最强。原理：使DNA链断裂；抑制DNA正常复制。紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但细
16、菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗力强。紫外线的穿透力低，仅适用于表面灭菌和无菌室、培养间等空间的灭菌，且距照射物不超过1.2 m；对固体物料灭菌不彻底，也不能用于液体物料的灭菌。5.微波消毒：原理：利用微波（波长短频率高的电磁波）进行加热从而杀菌。适用：牛奶，包装好的保鲜食品；玻璃器械，敷料。优点：加热快、均匀，设备简单易操作缺点：不能对金属器械进行微波消毒；微波穿透力弱；高剂量的微波对人体有害，要防止泄露6.60Co灭菌60Co照射灭菌，被灭菌的物体温度变化小，仅仅升高5C。适用于医疗器械、医用塑料制品、外科敷料、污染物、生物组织、生物制品、抗生素、乳糖、动物饲料等。要求高。要专人操作，专门的
17、防护措施，专门的使用基地等。7.机械除菌法（1）机械擦拭（略）（2）过滤除菌定义：利用过滤方法阻拦微生物达到除菌的目的。此法仅适用于澄清液体和气体的除菌。此法仅适用于澄清液体和气体的除菌。工工业上常用过滤法大量制备无菌空气，供好业上常用过滤法大量制备无菌空气，供好氧微生物培养过程使用。氧微生物培养过程使用。（2）过滤除菌常用滤菌器：蔡氏滤菌器；滤烛滤菌器；玻璃滤菌器；滤膜滤菌器。（P16图2-3）常用滤材：玻璃棉，陶瓷，石棉。细菌过滤器常用直径为0.2-0.45 m的醋酸纤维素滤膜。空气过滤除菌器8.渗透压法突然、大幅度地改变渗透压可引起微生物死亡。原理：细胞脱水，发生质壁分离，微生物的生长受到抑制甚至死亡。方法：高盐高糖等。适用：日常食品保存。作业：1、消毒与灭菌的概念及区别2、常用的物理灭菌法的具体方法、适用范围以及原理。3、常用的化学消毒消毒剂名称、使用浓度、适用范围。