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1、层析分离技术层析分离技术李旭琴李旭琴2009-4-18层析法分类层析法分类(1)(1)按两相的状态来分：按两相的状态来分：按两相的状态来分：按两相的状态来分：(2)(2)按固定相的使用形式（即实验技术）分：按固定相的使用形式（即实验技术）分：按固定相的使用形式（即实验技术）分：按固定相的使用形式（即实验技术）分：柱层析柱层析柱层析柱层析(CC)(CC)、薄层层析薄层层析薄层层析薄层层析(TLC)(TLC)、纸上层析、纸上层析、纸上层析、纸上层析(3)(3)按分离机制（即物理化学性质）分：按分离机制（即物理化学性质）分：按分离机制（即物理化学性质）分：按分离机制（即物理化学性质）分：吸附层析、分
2、配层析、离子交换层析、亲和层析、凝吸附层析、分配层析、离子交换层析、亲和层析、凝吸附层析、分配层析、离子交换层析、亲和层析、凝吸附层析、分配层析、离子交换层析、亲和层析、凝胶过滤等胶过滤等胶过滤等胶过滤等(4)(4)按展开方式分：按展开方式分：按展开方式分：按展开方式分：洗脱法、迎头法、置换法洗脱法、迎头法、置换法洗脱法、迎头法、置换法洗脱法、迎头法、置换法 流动相流动相流动相流动相 固定相固定相固定相固定相1.1 柱层析原理柱层析原理1.2 柱层析技术柱层析技术1.3 柱层析注意事项柱层析注意事项目录目录1.柱层析柱层析(CC)2.薄层层析薄层层析(TLC)1.1 柱层析原理：柱层析原理：吸
3、附柱层析是利用吸附剂对混合试样各组分的吸附柱层析是利用吸附剂对混合试样各组分的吸附柱层析是利用吸附剂对混合试样各组分的吸附柱层析是利用吸附剂对混合试样各组分的吸附力不同而使各组分分离。吸附力不同而使各组分分离。吸附力不同而使各组分分离。吸附力不同而使各组分分离。固定相：固体吸附剂流动相：即洗脱剂 目前，我们最常用的就是以硅胶、氧化铝两目前，我们最常用的就是以硅胶、氧化铝两目前，我们最常用的就是以硅胶、氧化铝两目前，我们最常用的就是以硅胶、氧化铝两种物质为填充剂的色谱柱，常称为：硅胶柱和氧种物质为填充剂的色谱柱，常称为：硅胶柱和氧种物质为填充剂的色谱柱，常称为：硅胶柱和氧种物质为填充剂的色谱柱，
4、常称为：硅胶柱和氧化铝柱。化铝柱。化铝柱。化铝柱。1.柱层析柱层析(CC)当采用溶剂当采用溶剂当采用溶剂当采用溶剂洗脱洗脱洗脱洗脱时，发生一系列吸附时，发生一系列吸附时，发生一系列吸附时，发生一系列吸附解吸解吸解吸解吸再吸附再吸附再吸附再吸附再解吸的过程，由于不再解吸的过程，由于不再解吸的过程，由于不再解吸的过程，由于不同的化合物吸附能力也不同，吸附力较强同的化合物吸附能力也不同，吸附力较强同的化合物吸附能力也不同，吸附力较强同的化合物吸附能力也不同，吸附力较强的组分，移动的距离小，后出柱；吸附力的组分，移动的距离小，后出柱；吸附力的组分，移动的距离小，后出柱；吸附力的组分，移动的距离小，后出
5、柱；吸附力较弱的组分，移动的距离大，先出柱。较弱的组分，移动的距离大，先出柱。较弱的组分，移动的距离大，先出柱。较弱的组分，移动的距离大，先出柱。吸吸吸吸附附附附柱柱柱柱色色色色谱谱谱谱通通通通常常常常在在在在玻玻玻玻璃璃璃璃管管管管中中中中填填填填入入入入表表表表面面面面积积积积大大大大，经经经经过过过过活活活活化化化化的的的的多多多多孔孔孔孔性性性性或或或或粉粉粉粉状状状状固固固固体体体体吸吸吸吸附附附附剂剂剂剂。当当当当待待待待分分分分离离离离的的的的混混混混合合合合物物物物流流流流过过过过吸吸吸吸附附附附柱柱柱柱时时时时，各各各各种成分同时被种成分同时被种成分同时被种成分同时被吸附吸附
6、吸附吸附在柱的上端。在柱的上端。在柱的上端。在柱的上端。柱层析原理：柱层析原理：上样上样上样上样洗脱洗脱洗脱洗脱装柱装柱装柱装柱1.2 柱层析技术柱层析技术柱柱柱柱层层层层析析析析的的的的装装装装柱柱柱柱比比比比较较较较重重重重要要要要，装装装装柱柱柱柱的的的的效效效效果果果果直直直直接接接接影影影影响响响响层层层层析析析析分分分分离离离离效效效效果果果果。因因因因此此此此，是是是是制制制制备备备备性性性性分分分分离离离离的的的的一一一一种种种种基基基基本本本本操操操操作作作作技技技技能。能。能。能。(1)称量：称量：称量：称量：200-300200-300目硅胶，称目硅胶，称目硅胶，称目硅胶
7、，称10-7010-70倍于上样量；如倍于上样量；如倍于上样量；如倍于上样量；如果极难分，也可以用果极难分，也可以用果极难分，也可以用果极难分，也可以用100100倍量的硅胶倍量的硅胶倍量的硅胶倍量的硅胶HH。干硅胶。干硅胶。干硅胶。干硅胶的视密度在的视密度在的视密度在的视密度在0.40.4左右，所以要称左右，所以要称左右，所以要称左右，所以要称40g40g硅胶，用烧杯硅胶，用烧杯硅胶，用烧杯硅胶，用烧杯量量量量100ml100ml也可以。也可以。也可以。也可以。(2)搅成匀浆：加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒搅成匀浆：加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒搅成匀浆：加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒
8、搅成匀浆：加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯体系，乙酸乙酯体系，乙酸乙酯体系，乙酸乙酯体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/甲醇体系，甲醇体系，甲醇体系，甲醇体系，就用氯仿拌。就用氯仿拌。就用氯仿拌。就用氯仿拌。装柱步骤装柱步骤(3)(3)装柱：将柱底用少许脱脂棉轻轻塞紧，再盖一层装柱：将柱底用少许脱脂棉轻轻塞紧，再盖一层装柱：将柱底用少许脱脂棉轻轻塞紧，再盖一层装柱：将柱底用少许脱脂棉
9、轻轻塞紧，再盖一层0.5cm0.5cm厚的石英砂，关闭活塞，向柱中加入约厚的石英砂，关闭活塞，向柱中加入约厚的石英砂，关闭活塞，向柱中加入约厚的石英砂，关闭活塞，向柱中加入约1/31/3体积石油醚（氯仿），打开柱下活塞，将匀浆体积石油醚（氯仿），打开柱下活塞，将匀浆体积石油醚（氯仿），打开柱下活塞，将匀浆体积石油醚（氯仿），打开柱下活塞，将匀浆(硅硅硅硅胶或氧化铝与溶剂的混合物胶或氧化铝与溶剂的混合物胶或氧化铝与溶剂的混合物胶或氧化铝与溶剂的混合物)经漏斗一次倒入柱中，经漏斗一次倒入柱中，经漏斗一次倒入柱中，经漏斗一次倒入柱中，使硅胶使硅胶使硅胶使硅胶(或氧化铝或氧化铝或氧化铝或氧化铝)自然沉
10、降。再在上面加自然沉降。再在上面加自然沉降。再在上面加自然沉降。再在上面加0.5cm0.5cm厚厚厚厚的石英砂。保持一定流速，不能使液面低于石英的石英砂。保持一定流速，不能使液面低于石英的石英砂。保持一定流速，不能使液面低于石英的石英砂。保持一定流速，不能使液面低于石英砂上层。砂上层。砂上层。砂上层。(4)(4)压实：沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联压实：沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联压实：沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联压实：沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约
11、被压缩至球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/109/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。由于柱床萎缩产生开裂。由于柱床萎缩产生开裂。由于柱床萎缩产生开裂。装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱
12、装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱。和干法装柱。和干法装柱。和干法装柱。湿法装柱：是先把硅胶用适当的湿法装柱：是先把硅胶用适当的湿法装柱：是先把硅胶用适当的湿法装柱：是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然溶剂拌匀后，再填入柱子中，然溶剂拌匀后，再填入柱子中，然溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用洗脱剂后再加压用洗脱剂后再加压用洗脱剂后再加压用洗脱剂“走柱子走柱子走柱子走柱子”，本法最大的优点是柱子装的比较本法最大的优点是柱子装的比较本法最大的优点是柱子装的比较本法最大的优点是柱子装的比较结实，没有气泡。结实，没有气泡。结实，没有气泡。结实，没有气泡。装柱方法装柱方法
13、干法装柱干法装柱干法装柱：将干吸附剂（未与干法装柱：将干吸附剂（未与干法装柱：将干吸附剂（未与干法装柱：将干吸附剂（未与洗脱剂混合）装柱，是直接往洗脱剂混合）装柱，是直接往洗脱剂混合）装柱，是直接往洗脱剂混合）装柱，是直接往柱子里填入硅胶，至硅胶界面柱子里填入硅胶，至硅胶界面柱子里填入硅胶，至硅胶界面柱子里填入硅胶，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅不再下降为止，然后再填入硅不再下降为止，然后再填入硅不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵胶至合适高度，最后再用油泵胶至合适高度，最后再用油泵胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装直接抽，这样就会使得柱子装直接抽，这样
14、就会使得柱子装直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。接着是设法将样品的很结实。接着是设法将样品的很结实。接着是设法将样品的很结实。接着是设法将样品加到上面，从柱项加入洗脱剂，加到上面，从柱项加入洗脱剂，加到上面，从柱项加入洗脱剂，加到上面，从柱项加入洗脱剂，“走柱子走柱子走柱子走柱子”。通常上面加压，。通常上面加压，。通常上面加压，。通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加下面再用油泵抽，这样可以加下面再用油泵抽，这样可以加下面再用油泵抽，这样可以加快速度。快速度。快速度。快速度。优点是：较方便，分离效率高，分离效果与制备优点是：较方便，分离效率高，分离效果与制备优点是：较方便，分离效率高，分离
15、效果与制备优点是：较方便，分离效率高，分离效果与制备性薄层层析相似，可以将薄层层析的分离条件直性薄层层析相似，可以将薄层层析的分离条件直性薄层层析相似，可以将薄层层析的分离条件直性薄层层析相似，可以将薄层层析的分离条件直接用于干柱层析，从而分离出更多量的化学成分。接用于干柱层析，从而分离出更多量的化学成分。接用于干柱层析，从而分离出更多量的化学成分。接用于干柱层析，从而分离出更多量的化学成分。缺点在于：由于溶剂和硅胶之间的吸附放热，容缺点在于：由于溶剂和硅胶之间的吸附放热，容缺点在于：由于溶剂和硅胶之间的吸附放热，容缺点在于：由于溶剂和硅胶之间的吸附放热，容易产生气泡，这一点在使用低沸点的洗脱
16、剂如乙易产生气泡，这一点在使用低沸点的洗脱剂如乙易产生气泡，这一点在使用低沸点的洗脱剂如乙易产生气泡，这一点在使用低沸点的洗脱剂如乙醚，二氯甲烷时最为明显。虽然产生的气泡在加醚，二氯甲烷时最为明显。虽然产生的气泡在加醚，二氯甲烷时最为明显。虽然产生的气泡在加醚，二氯甲烷时最为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出在上样
17、、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。通过，当然也就谈不上分离了。通过，当然也就谈不上分离了。通过，当然也就谈不上分离了。解决的办法是：硅胶一定要填结实；一定要用较解决的办法是：硅胶一定要填结实；一定要用较解决的办法是：硅胶一定要填结实；一定要用较解决的办法是：硅胶一定要填结实；一定要用较多的溶剂多的溶剂多的溶剂多的溶剂“走柱子走柱子走柱子走柱子”，等到柱子的下端不再发热，等到柱子的下端不再发热，等到柱
18、子的下端不再发热，等到柱子的下端不再发热，恢复到室温后再撤去压力。恢复到室温后再撤去压力。恢复到室温后再撤去压力。恢复到室温后再撤去压力。干法装柱优缺点干法装柱优缺点 层析柱层析柱层析柱层析柱硅胶的用量硅胶的用量硅胶的用量硅胶的用量一般是每分离一般是每分离一般是每分离一般是每分离1g1g产品使用产品使用产品使用产品使用30-100g30-100g硅胶硅胶硅胶硅胶 柱子的形状比例一般是内径柱子的形状比例一般是内径柱子的形状比例一般是内径柱子的形状比例一般是内径:高度高度高度高度=1:810=1:810 不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要
19、平不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为整，并且硅胶（固定相）的高度一般为整，并且硅胶（固定相）的高度一般为整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm15cm左右，太短左右，太短左右，太短左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。分离效果不好。分离效果不好。分离效果不好。溶剂尽量使用能够分开的极性最低的溶剂溶剂尽量使用能够分开的极性
20、最低的溶剂溶剂尽量使用能够分开的极性最低的溶剂溶剂尽量使用能够分开的极性最低的溶剂 湿湿湿湿法法法法装装装装柱柱柱柱时时时时最最最最好好好好是是是是先先先先在在在在底底底底部部部部装装装装有有有有石石石石英英英英砂砂砂砂的的的的柱柱柱柱子子子子中中中中预预预预加加加加溶溶溶溶剂剂剂剂再再再再按按按按湿湿湿湿法法法法加加加加料料料料这这这这样样样样能能能能保保保保证证证证一一一一开开开开始始始始加加加加入入入入的的的的填填填填料料料料处处处处于于于于全全全全湿湿湿湿状态，杜绝气泡状态，杜绝气泡状态，杜绝气泡状态，杜绝气泡 刚刚刚刚装装装装的的的的柱柱柱柱子子子子在在在在一一一一段段段段时时时时间
21、间间间内内内内可可可可能能能能会会会会有有有有长长长长度度度度变变变变短短短短的的的的现现现现象象象象所所所所以以以以稳定一段时间后再使用稳定一段时间后再使用稳定一段时间后再使用稳定一段时间后再使用 装柱要领：要做到装柱要领：要做到装柱要领：要做到装柱要领：要做到密实均匀无气泡密实均匀无气泡密实均匀无气泡密实均匀无气泡。经验：万一装柱时带入气泡，可从上端压入大量溶剂将经验：万一装柱时带入气泡，可从上端压入大量溶剂将经验：万一装柱时带入气泡，可从上端压入大量溶剂将经验：万一装柱时带入气泡，可从上端压入大量溶剂将气泡从下端挤出。气泡从下端挤出。气泡从下端挤出。气泡从下端挤出。装柱注意装柱注意上样上
22、样上样上样:又称加样或样品上柱。也有干法和湿法之又称加样或样品上柱。也有干法和湿法之又称加样或样品上柱。也有干法和湿法之又称加样或样品上柱。也有干法和湿法之分。分。分。分。干法上样干法上样干法上样干法上样就是把待分离的样品与易挥发溶剂混就是把待分离的样品与易挥发溶剂混就是把待分离的样品与易挥发溶剂混就是把待分离的样品与易挥发溶剂混合后，再与吸附剂吸收、挥干挥发性溶剂后，合后，再与吸附剂吸收、挥干挥发性溶剂后，合后，再与吸附剂吸收、挥干挥发性溶剂后，合后，再与吸附剂吸收、挥干挥发性溶剂后，撒布于柱的上端。干法上样较麻烦，但可以保撒布于柱的上端。干法上样较麻烦，但可以保撒布于柱的上端。干法上样较麻
23、烦，但可以保撒布于柱的上端。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。证样品层很平整。证样品层很平整。证样品层很平整。湿法上样湿法上样湿法上样湿法上样就是用就是用就是用就是用少量溶剂少量溶剂少量溶剂少量溶剂（最好就是柱层析所（最好就是柱层析所（最好就是柱层析所（最好就是柱层析所用的洗脱剂，如果溶解度不好，则可以用一极用的洗脱剂，如果溶解度不好，则可以用一极用的洗脱剂，如果溶解度不好，则可以用一极用的洗脱剂，如果溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解，再性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解，再性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解，再性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解，再小心
24、的加入层析柱项端的平面内。湿法较方便。小心的加入层析柱项端的平面内。湿法较方便。小心的加入层析柱项端的平面内。湿法较方便。小心的加入层析柱项端的平面内。湿法较方便。加样的基本要求是加样的基本要求是加样的基本要求是加样的基本要求是均匀薄饼样层均匀薄饼样层均匀薄饼样层均匀薄饼样层。上样上样洗脱洗脱洗脱：柱层析所用的溶剂，习惯上称为洗脱：柱层析所用的溶剂，习惯上称为洗脱剂。洗脱操作的目的当然是要将加洗脱剂。洗脱操作的目的当然是要将加入的样品中各个组分先后从上往下带出入的样品中各个组分先后从上往下带出来，并能分开收集各成分。来，并能分开收集各成分。洗脱的过程中，上端溶剂不能干，分段洗脱的过程中，上端溶
25、剂不能干，分段收集是关键；下端烧杯定时换，薄层纸收集是关键；下端烧杯定时换，薄层纸层化学检；洗脱剂可随意变，混合过渡层化学检；洗脱剂可随意变，混合过渡为重点。为重点。收集的试管大小要以样品量而定。一般采用几收集的试管大小要以样品量而定。一般采用几收集的试管大小要以样品量而定。一般采用几收集的试管大小要以样品量而定。一般采用几个试管（或锥形瓶）进行收集，通过对收集的几瓶个试管（或锥形瓶）进行收集，通过对收集的几瓶个试管（或锥形瓶）进行收集，通过对收集的几瓶个试管（或锥形瓶）进行收集，通过对收集的几瓶洗脱液进行薄层分析判断是否为需要的产物，合并洗脱液进行薄层分析判断是否为需要的产物，合并洗脱液进行
26、薄层分析判断是否为需要的产物，合并洗脱液进行薄层分析判断是否为需要的产物，合并需要的溶液，浓缩，经过这样的掐头去尾就可以得需要的溶液，浓缩，经过这样的掐头去尾就可以得需要的溶液，浓缩，经过这样的掐头去尾就可以得需要的溶液，浓缩，经过这样的掐头去尾就可以得到符合要求的样品了。到符合要求的样品了。到符合要求的样品了。到符合要求的样品了。溶液接收及检测溶液接收及检测1.3 柱层析注意事项：柱层析注意事项：(1)(1)先根据先根据先根据先根据TLCTLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻物方法筛选好洗脱剂，使两相邻物方法筛选好洗脱剂，使两相邻物方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质质质质R Rf f值之差最大化。值之
27、差最大化。值之差最大化。值之差最大化。(2)(2)棉花不要塞的太紧，否则影响洗脱速度。棉花不要塞的太紧，否则影响洗脱速度。棉花不要塞的太紧，否则影响洗脱速度。棉花不要塞的太紧，否则影响洗脱速度。(3)(3)色谱柱要填装紧密，将柱子必须装平整、均色谱柱要填装紧密，将柱子必须装平整、均色谱柱要填装紧密，将柱子必须装平整、均色谱柱要填装紧密，将柱子必须装平整、均匀匀匀匀(4)(4)样品层要上的薄，考虑有限柱填料的吸附量样品层要上的薄，考虑有限柱填料的吸附量样品层要上的薄，考虑有限柱填料的吸附量样品层要上的薄，考虑有限柱填料的吸附量(5)(5)可考虑用梯度法分开并洗脱可考虑用梯度法分开并洗脱可考虑用梯
28、度法分开并洗脱可考虑用梯度法分开并洗脱(6)(6)固定相要始终浸于溶液中，防止柱身干裂。固定相要始终浸于溶液中，防止柱身干裂。固定相要始终浸于溶液中，防止柱身干裂。固定相要始终浸于溶液中，防止柱身干裂。(7)(7)色谱柱的活塞不涂凡士林。色谱柱的活塞不涂凡士林。色谱柱的活塞不涂凡士林。色谱柱的活塞不涂凡士林。薄薄薄薄层层层层层层层层析析析析是是是是在在在在玻玻玻玻璃璃璃璃板板板板上上上上涂涂涂涂布布布布一一一一层层层层支支支支持持持持剂剂剂剂，待待待待分分分分离离离离样样样样品品品品点点点点在在在在薄薄薄薄层层层层板板板板一一一一端端端端，然然然然后后后后让让让让推推推推动动动动剂剂剂剂从从从
29、从上上上上流流流流动动动动，从而使各组分得到分离的物理方法。从而使各组分得到分离的物理方法。从而使各组分得到分离的物理方法。从而使各组分得到分离的物理方法。常常常常用用用用的的的的支支支支持持持持剂剂剂剂有有有有：硅硅硅硅胶胶胶胶GG、硅硅硅硅胶胶胶胶GFGF254254、氧氧氧氧化化化化铝铝铝铝、纤纤纤纤维维维维素素素素、硅硅硅硅藻藻藻藻土土土土等等等等。使使使使用用用用的的的的支支支支持持持持剂剂剂剂种种种种类类类类不不不不同同同同，其其其其分分分分离离离离原原原原理理理理也也也也不不不不尽尽尽尽相相相相同同同同，有有有有分分分分配配配配层层层层析析析析、吸吸吸吸附附附附层层层层析析析析、
30、离子交换层析、凝胶层析等多种。离子交换层析、凝胶层析等多种。离子交换层析、凝胶层析等多种。离子交换层析、凝胶层析等多种。2.薄层层析薄层层析(TLC)2.1 TLC原理原理先做先做先做先做TLCTLC检视成分的多少主点和次点：检视成分的多少主点和次点：检视成分的多少主点和次点：检视成分的多少主点和次点：点样点样点样点样展开展开展开展开显色显色显色显色2.2 TLC分析技术分析技术以以以以毛毛毛毛细细细细管管管管吸吸吸吸取取取取样样样样品品品品点点点点在在在在起起起起跑跑跑跑线线线线上上上上，少少少少量量量量多多多多次次次次，直直直直 径径径径 不不不不 超超超超 过过过过2mm2mm，点点点点
31、完完完完后后后后，以以以以紫紫紫紫外外外外灯灯灯灯照照照照射射射射以以以以确确确确定定定定浓浓浓浓度适当。度适当。度适当。度适当。点样：点样：点样：点样：显色显色 如果组分有色，可得到有色斑点，则不需显色；当组分无如果组分有色，可得到有色斑点，则不需显色；当组分无如果组分有色，可得到有色斑点，则不需显色；当组分无如果组分有色，可得到有色斑点，则不需显色；当组分无色时，需要显色。一般有两种显色方法：色时，需要显色。一般有两种显色方法：色时，需要显色。一般有两种显色方法：色时，需要显色。一般有两种显色方法：(1)(1)紫外光显色法：应用铅笔描出斑点位置。紫外光显色法：应用铅笔描出斑点位置。紫外光显
32、色法：应用铅笔描出斑点位置。紫外光显色法：应用铅笔描出斑点位置。(2)(2)显色剂显色法：用化学试剂作显色剂，以显示组分斑显色剂显色法：用化学试剂作显色剂，以显示组分斑显色剂显色法：用化学试剂作显色剂，以显示组分斑显色剂显色法：用化学试剂作显色剂，以显示组分斑点的位置。点的位置。点的位置。点的位置。TLC分析技术分析技术影响影响影响影响 R Rf f 的主要因素：的主要因素：的主要因素：的主要因素：(1)(1)吸附剂吸附剂吸附剂吸附剂 (2)(2)溶剂体系溶剂体系溶剂体系溶剂体系 (3)(3)样品本身性质样品本身性质样品本身性质样品本身性质 (4)(4)温度温度温度温度 (5)pH(5)pH比
33、移值比移值比移值比移值：表示某组分移动速率的快慢，用：表示某组分移动速率的快慢，用：表示某组分移动速率的快慢，用：表示某组分移动速率的快慢，用R Rf f 表示。表示。表示。表示。ab分分分分离离离离效效效效果果果果和和和和所所所所用用用用硅硅硅硅胶胶胶胶有有有有关关关关系系系系。不不不不同同同同厂厂厂厂家家家家生生生生产产产产的的的的硅硅硅硅胶胶胶胶可可可可能能能能含含含含水水水水量量量量以以以以及及及及颗颗颗颗粒粒粒粒的的的的粗粗粗粗细细细细程程程程度度度度，酸酸酸酸性性性性强强强强弱弱弱弱不不不不同同同同，从从从从而而而而导导导导致致致致产产产产品品品品在在在在各各各各厂厂厂厂家家家家的
34、的的的硅硅硅硅胶胶胶胶中中中中分分分分离离离离效效效效果果果果有有有有差差差差别别别别。鉴鉴鉴鉴于于于于此此此此，硅硅硅硅胶胶胶胶一一一一定定定定要要要要密密密密封封封封保保保保存存存存，防防防防止止止止吸吸吸吸潮潮潮潮。TLCTLC所所所所用用用用的的的的硅硅硅硅胶胶胶胶板板板板一一一一定定定定要要要要保保保保存存存存在在在在干干干干燥燥燥燥器器器器里里里里面面面面，或或或或使使使使用用用用前前前前在在在在红外烘箱里干燥一段时间。红外烘箱里干燥一段时间。红外烘箱里干燥一段时间。红外烘箱里干燥一段时间。溶溶溶溶剂剂剂剂的的的的含含含含水水水水量量量量和和和和杂杂杂杂质质质质含含含含量量量量对对
35、对对分分分分离离离离效效效效果果果果都都都都有有有有明明明明显显显显的的的的影影影影响。响。响。响。温温温温度度度度对对对对分分分分离离离离效效效效果果果果影影影影响响响响也也也也很很很很明明明明显显显显。在在在在实实实实验验验验过过过过程程程程发发发发现现现现，在在在在夏夏夏夏天天天天分分分分离离离离相相相相同同同同的的的的产产产产品品品品，所所所所需需需需的的的的洗洗洗洗脱脱脱脱剂剂剂剂极极极极性性性性要要要要比比比比在在在在冬天小很多。冬天小很多。冬天小很多。冬天小很多。展开剂体系展开剂体系极性小的用石油醚：乙酸乙酯体系极性小的用石油醚：乙酸乙酯体系极性较大的用氯仿：甲醇体系极性较大的用
36、氯仿：甲醇体系极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸体系极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸体系拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸 TLC分析技术分析技术选择适当的展开剂是首要任务选择适当的展开剂是首要任务 一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷石油迷石油迷石油迷 己烷己烷己烷己烷 苯苯苯苯 乙醚乙醚乙醚乙醚THFTHF乙酸乙酯乙酸乙酯乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮丙酮丙酮 乙醇乙醇乙醇乙醇 甲醇甲醇甲醇甲醇 使使使使用用用用单单单单一
37、一一一溶溶溶溶剂剂剂剂，往往往往往往往往不不不不能能能能达达达达到到到到很很很很好好好好的的的的分分分分离离离离效效效效果果果果，往往往往往往往往使使使使用用用用混混混混合合合合溶溶溶溶剂剂剂剂通通通通常常常常使使使使用用用用一一一一个个个个高高高高极极极极性性性性和和和和低低低低级级级级性性性性溶溶溶溶剂剂剂剂组组组组成成成成的的的的混混混混合合合合溶溶溶溶剂剂剂剂，高高高高极极极极性性性性的的的的溶溶溶溶剂剂剂剂还还还还有有有有增增增增加加加加区区区区分分分分度度度度的的的的作作作作用用用用，常常常常用用用用的的的的溶溶溶溶剂剂剂剂组组组组合合合合有：有：有：有：石石石石油油油油醚醚醚醚:
38、乙乙乙乙酸酸酸酸乙乙乙乙酯酯酯酯，石石石石油油油油醚醚醚醚:丙丙丙丙酮酮酮酮，石石石石油油油油醚醚醚醚:乙乙乙乙醚醚醚醚，石石石石油油油油醚醚醚醚:二二二二氯氯氯氯甲烷，氯仿甲烷，氯仿甲烷，氯仿甲烷，氯仿:丙酮，二氯甲烷丙酮，二氯甲烷丙酮，二氯甲烷丙酮，二氯甲烷:甲醇，氯仿甲醇，氯仿甲醇，氯仿甲醇，氯仿:甲醇甲醇甲醇甲醇展开剂的比例展开剂的比例 展展展展开开开开剂剂剂剂的的的的比比比比例例例例要要要要靠靠靠靠尝尝尝尝试试试试，一一一一般般般般根根根根据据据据文文文文献献献献中中中中报报报报道道道道的的的的该该该该类类类类化化化化合合合合物物物物用用用用什什什什么么么么样样样样的的的的展展展展开
39、开开开剂剂剂剂，就就就就首首首首先先先先尝尝尝尝试试试试使使使使用用用用该该该该类类类类展展展展开开开开剂剂剂剂，然然然然后后后后不不不不断断断断尝尝尝尝试试试试比比比比例例例例，直直直直到到到到找找找找到到到到一一一一个个个个分分分分离离离离效效效效果果果果好好好好的的的的展展展展开开开开剂剂剂剂。很很很很多多多多时时时时候候候候,展展展展开开开开剂剂剂剂的的的的选选选选择择择择要要要要靠靠靠靠自自自自己己己己不不不不断断断断变变变变换换换换展展展展开开开开剂剂剂剂的的的的组组组组成成成成来来来来达达达达到到到到最最最最佳佳佳佳效效效效果。果。果。果。一一一一般般般般把把把把两两两两种种种种
40、溶溶溶溶剂剂剂剂混混混混合合合合时时时时，采采采采用用用用高高高高极极极极性性性性/低低低低极极极极性性性性的的的的体体体体积积积积比比比比为为为为1/31/3的的的的混混混混合合合合溶溶溶溶剂剂剂剂，如如如如果果果果有有有有分分分分开开开开的的的的迹迹迹迹象象象象，再再再再调调调调整整整整比比比比例例例例，达达达达到到到到最最最最佳佳佳佳效效效效果果果果，如如如如果果果果没没没没有有有有分分分分开开开开的的的的迹迹迹迹象，最好是换溶剂。象，最好是换溶剂。象，最好是换溶剂。象，最好是换溶剂。对于在硅胶中这种酸性物质上易分解对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，的
41、物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。当然，选择所添加的碱性物质，还必须考当然，选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，虑容易从产品中除去，氨水氨水无疑是较好的无疑是较好的选择。选择。展开剂展开剂2.3 TLC注意事项注意事项(1)(1)某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。因此在等于在别的展开剂中也只显示一个点。因此在等于在别的展开剂中也只显示一个点。因此
42、在等于在别的展开剂中也只显示一个点。因此在寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不同的展开剂。展开剂的极性太小，点分不开，同的展开剂。展开剂的极性太小，点分不开，同的展开剂。展开剂的极性太小，点分不开，同的展开剂。展开剂的极性太小，点分不开，极性太大，也分不开。一般以目标产物的极性太大，也分不开。一般以目标产物的极性太大，也分不开。一般以目标产物的极性太大，也分不开。一般以目标产物的R Rf f值值值值在在在在0.30.3左右为最佳。左右为最佳。左右为最佳。左右为最佳。(2)
43、(2)样品点样品点样品点样品点不能点得太浓不能点得太浓不能点得太浓不能点得太浓，否则容易重叠，不易判，否则容易重叠，不易判，否则容易重叠，不易判，否则容易重叠，不易判断，因为如果两个点相近的话，一浓就变成一断，因为如果两个点相近的话，一浓就变成一断，因为如果两个点相近的话，一浓就变成一断，因为如果两个点相近的话，一浓就变成一个点。个点。个点。个点。(3)(3)板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性有关，只有两者比较合适在该溶剂中的溶解性有关，只有两者比较合
44、适在该溶剂中的溶解性有关，只有两者比较合适在该溶剂中的溶解性有关，只有两者比较合适了，才能有一个较好的分离效果。了，才能有一个较好的分离效果。了，才能有一个较好的分离效果。了，才能有一个较好的分离效果。TLC跟踪反应跟踪反应 在在在在点点点点板板板板的的的的时时时时候候候候往往往往往往往往是是是是反反反反应应应应体体体体系系系系的的的的混混混混和和和和溶溶溶溶液液液液点点点点一一一一个个个个点点点点A A，每每每每种种种种难难难难挥挥挥挥发发发发的的的的原原原原料料料料各各各各点点点点一一一一个个个个点点点点B,C,DB,C,D等等等等等等等等，然然然然后后后后所所所所有有有有的的的的原原原原
45、料料料料和和和和反反反反应应应应体体体体系系系系的的的的混混混混合合合合溶溶溶溶液液液液再再再再共共共共同同同同点点点点一一一一个个个个混混混混合合合合点点点点X X，这这这这些些些些点点点点在在在在板板板板上上上上的的的的位位位位置置置置如如如如图图图图所所所所示：示：示：示：这这这这样样样样的的的的好好好好处处处处是是是是展展展展开开开开后后后后可可可可以以以以清清清清楚楚楚楚地地地地看看看看见见见见每每每每个个个个点点点点的的的的位位位位置置置置，把把把把A A这这这这个个个个点点点点展展展展开开开开后后后后的的的的各各各各个个个个层层层层份份份份的的的的点点点点与与与与B,B,C C等
46、等等等原原原原料料料料比比比比较较较较，从从从从而而而而判判判判断断断断原原原原料料料料消消消消失失失失没没没没有有有有，点点点点混混混混合合合合点点点点X X的的的的目目目目的的的的在在在在于于于于，方方方方便便便便观观观观察察察察，因因因因为为为为有有有有时时时时候候候候，板板板板展展展展开开开开后后后后，各各各各点点点点的的的的位位位位置置置置有有有有些些些些变变变变形形形形，或或或或者者者者由由由由于于于于边边边边缘缘缘缘效效效效应应应应等等等等等等等等，使使使使得得得得判判判判断断断断不易。不易。不易。不易。A X B C D TLC判断纯度判断纯度 利利利利用用用用TLCTLC判判
47、判判断断断断物物物物质质质质的的的的纯纯纯纯度度度度时时时时，往往往往往往往往要要要要和和和和NMRNMR相相相相结结结结合合合合，因因因因为为为为某某某某种种种种样样样样品品品品在在在在这这这这种种种种展展展展开开开开剂剂剂剂中中中中只只只只显显显显示示示示一一一一个个个个点点点点，并并并并不不不不等等等等于于于于在在在在别别别别的的的的展展展展开开开开剂剂剂剂中中中中也也也也只只只只显显显显示示示示一个点。一个点。一个点。一个点。但但但但由由由由于于于于1 1HNMRHNMR可可可可鉴鉴鉴鉴别别别别的的的的纯纯纯纯度度度度也也也也就就就就在在在在95%95%左左左左右右右右，有有有有时时时
48、时候候候候1 1HNMRHNMR现现现现示示示示较较较较纯纯纯纯的的的的东东东东西西西西，一一一一点点点点板板板板就就就就会发现有几个点。所以，两者要结合使用。会发现有几个点。所以，两者要结合使用。会发现有几个点。所以，两者要结合使用。会发现有几个点。所以，两者要结合使用。W.Clark Still,Michael Kahn,and Abhijit Mitra,Rapid chromatographic technique for preparative separations with moderate resolution J.Org.Chem.,1978,43(14),2923-2925快速柱层析快速柱层析W.Clark Still,Michael Kahn,and Abhijit Mitra,Rapid chromatographic technique for preparative separations with moderate resolution J.Org.Chem.,1978,43(14),2923-2925联系方式联系方式电话：电话：13671327771邮箱：邮箱：