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1、 实验二实验二 细菌的人工培养细菌的人工培养实验目的实验目的n了解人工培养基的制作。了解人工培养基的制作。n了解了解细菌的接种方法细菌的接种方法 分离培养方法分离培养方法平板划线法平板划线法 （混合菌液）（混合菌液）n了解了解细菌的生长现象与细菌的生长现象与代谢产物代谢产物液体、固体、半固体培养基液体、固体、半固体培养基乳糖发酵实验乳糖发酵实验硫化氢实验硫化氢实验实验内容实验内容n琼琼脂平板的制作脂平板的制作 紫外线杀菌实验 咽拭实验 n分分组实验组实验 皮肤消毒实验 空气中细菌计数实验 药敏实验 n常用消毒器械的介常用消毒器械的介绍绍 一、一、人工培养基的制备和种类人工培养基的制备和种类n1
2、.1.制备原则制备原则n2.2.制备程序制备程序 n3.3.常用培养基的分类常用培养基的分类 1.1.制备原则制备原则l（1 1）适当的营养成分；）适当的营养成分；l（2 2）合适的酸碱度；）合适的酸碱度；l（3 3）配制后经灭菌使之无菌，方可应用。）配制后经灭菌使之无菌，方可应用。2.2.制备程序制备程序l配料配料熔化熔化测定及矫正测定及矫正PHPH滤过滤过分装分装灭菌灭菌备用备用3.3.常用培养基的分类常用培养基的分类（一）按物理性状分：（一）按物理性状分：液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基:1.51.52.5%2.5%琼脂琼脂 半固体培养基半固体培养基:0.30.30.5%0.5%
3、琼脂琼脂（二）按用途不同可分：（二）按用途不同可分：基础培养基；基础培养基；营养培养基；营养培养基；选择培养基；选择培养基；鉴别培养基；鉴别培养基；厌氧培养基。厌氧培养基。二二.细菌接种法细菌接种法1.1.平板培养基接种法（操作）平板培养基接种法（操作）2.2.斜面培养基接种法（示教）斜面培养基接种法（示教）3.3.液体培养基接种法（示教）液体培养基接种法（示教）4.4.半固体培养基接种法（示教）半固体培养基接种法（示教）1.1.平板培养基接种法（操作）平板培养基接种法（操作）n密集划线法密集划线法 n分区划线法分区划线法 n 接种大肠杆菌接种枯草杆菌班级、姓名/学号、大肠 枯草uv30培养箱
4、培养基的用途培养基的用途菌落菌落 液体：液体：增菌、增菌、纯培养纯培养半固体：半固体：动力、保存菌种动力、保存菌种固体平板：固体平板：用于分离培养用于分离培养三三.细菌生长现象及代谢产物观察（示教）细菌生长现象及代谢产物观察（示教）1.1.细菌在培养基中的生长现象细菌在培养基中的生长现象（1 1）液体培养基：混浊、菌膜和沉淀。）液体培养基：混浊、菌膜和沉淀。（2 2）固体培养基：菌落和菌苔。）固体培养基：菌落和菌苔。（3 3）半固体培养基：沿穿刺线生长，穿刺线清晰，周围）半固体培养基：沿穿刺线生长，穿刺线清晰，周围培养基仍为透明，动力阴性；穿刺线向周围扩散培养基仍为透明，动力阴性；穿刺线向周围
5、扩散生长，穿刺线模糊，整个培养基变成混浊，动力生长，穿刺线模糊，整个培养基变成混浊，动力阳性。阳性。2.2.细菌的代谢产物观察细菌的代谢产物观察（1 1）细菌对糖分解产物观察）细菌对糖分解产物观察（2 2）细菌对氨基酸分解产物观察）细菌对氨基酸分解产物观察（1 1）液体培养基）液体培养基均匀混浊生长（葡萄球菌）均匀混浊生长（葡萄球菌）菌膜形成（枯草芽孢杆菌）菌膜形成（枯草芽孢杆菌）沉淀生长（链球菌）沉淀生长（链球菌）（2 2）固体培养基）固体培养基形成菌落和菌苔。形成菌落和菌苔。观察菌落的大小、形态、透明度、颜色、表面和边缘情况及菌落观察菌落的大小、形态、透明度、颜色、表面和边缘情况及菌落周围
6、有无溶血环等。周围有无溶血环等。（3 3）半固体培养基）半固体培养基可用于观察细菌有无动力。可用于观察细菌有无动力。痢疾志贺菌沿穿刺线生长，痢疾志贺菌沿穿刺线生长，穿刺线清晰，周围培养基仍穿刺线清晰，周围培养基仍为透明，动力阴性；为透明，动力阴性；大肠埃希菌沿穿刺线向周围大肠埃希菌沿穿刺线向周围扩散生长，穿刺线模糊，整扩散生长，穿刺线模糊，整个培养基变成混浊，动力阳个培养基变成混浊，动力阳性。性。2.2.细菌的代谢产物观察细菌的代谢产物观察（1 1）细菌对糖分解产物观察）细菌对糖分解产物观察 方法：方法：将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖发酵将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于葡萄糖
7、、乳糖发酵培养基中，置培养基中，置3737度度2424小时培养后观察结果。小时培养后观察结果。结果：结果：大肠埃希菌分解葡萄糖、乳糖，产酸产气；大肠埃希菌分解葡萄糖、乳糖，产酸产气；伤寒沙门菌分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖。伤寒沙门菌分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖。糖糖发发酵酵试试验验2.2.细菌的代谢产物观察细菌的代谢产物观察（2 2）细菌对氨基酸分解产物观察）细菌对氨基酸分解产物观察 靛基质试验：靛基质试验：分别接种大肠埃希菌和伤寒沙门菌于分别接种大肠埃希菌和伤寒沙门菌于蛋白胨水培养基（含色氨酸）内，置蛋白胨水培养基（含色氨酸）内，置3737度度2424小时培小时培养后，然后沿管壁徐徐
8、加入靛基质试剂（对二甲基养后，然后沿管壁徐徐加入靛基质试剂（对二甲基醛）数滴，静置片刻，在两液界面出现红色环者为醛）数滴，静置片刻，在两液界面出现红色环者为靛基质试验阳性（大肠埃希菌），无红色环者为阴靛基质试验阳性（大肠埃希菌），无红色环者为阴性（伤寒沙门菌）。性（伤寒沙门菌）。Indol实验生化反应Indol实验2.2.细菌的代谢产物观察细菌的代谢产物观察（2 2）细菌对氨基酸分解产物观察）细菌对氨基酸分解产物观察硫化氢试验：硫化氢试验：将细菌接种于含有硫酸亚铁或醋酸铅将细菌接种于含有硫酸亚铁或醋酸铅的培养基（如双糖培养基）中，若细菌分解培养基的培养基（如双糖培养基）中，若细菌分解培养基中含硫的氨基酸产生硫化氢，硫化氢可与硫酸亚铁中含硫的氨基酸产生硫化氢，硫化氢可与硫酸亚铁或醋酸铅反应，生成黑色的硫化铁或硫化铅沉淀，或醋酸铅反应，生成黑色的硫化铁或硫化铅沉淀，为硫化氢试验阳性（乙型副伤寒沙门菌），若细菌为硫化氢试验阳性（乙型副伤寒沙门菌），若细菌不能分解含硫的氨基酸则无黑色沉淀形成，为硫化不能分解含硫的氨基酸则无黑色沉淀形成，为硫化氢试验阴氢试验阴 （大肠埃希菌）。（大肠埃希菌）。H2S试验试验肠道杆菌在KI培养基上的培养特性实验报告实验报告l观察记录细菌在培养基上的生长观察记录细菌在培养基上的生长现象和代谢产物。现象和代谢产物。