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1、改良改良(g(g iling)iling)Lowry氏法测定蛋白质含量氏法测定蛋白质含量The Lowry Method for Protein Q 基因基因(jyn)(jyn)时代，为生命科学提供源动力！时代，为生命科学提供源动力！第一页，共八页。目的与要求：目的与要求：q掌握改良掌握改良Lowry氏法测定蛋白质含量的原氏法测定蛋白质含量的原理及方法；理及方法；q了解标准曲线在物质定量测定了解标准曲线在物质定量测定(cdng)(cdng)中的应用中的应用及绘图要点。及绘图要点。 基因时代，为生命科学提供基因时代，为生命科学提供(tgng)(tgng)源动力！源动力！第二页，共八页。实验原理实
2、验原理：q 在碱性条件下蛋白质的肽键与在碱性条件下蛋白质的肽键与Cu2+螯合，螯合，形成蛋白质形成蛋白质-铜复合物。（双缩脲反应铜复合物。（双缩脲反应 Biuret Reaction）q 蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成钼蓝磷钨酸还原，生成钼蓝-钨钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度(nngd)(nngd)成正比成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量。（还原反应）含
3、量。（还原反应） 基因时代，为生命科学提供基因时代，为生命科学提供(tgng)(tgng)源动力！源动力！第三页，共八页。试剂试剂试剂试剂(mL)(mL)试管号试管号试管号试管号 0 01 12 23 34 45 5测定管测定管测定管测定管蛋白质标准溶液蛋白质标准溶液蛋白质标准溶液蛋白质标准溶液(0.20mg/ml)(0.20mg/ml)0 00.100.100.200.200.400.400.600.600.800.801 1生理盐水生理盐水生理盐水生理盐水1.001.000.900.900.800.800.600.600.400.400.200.200 0试剂试剂试剂试剂A A0.900.
4、900.900.900.900.900.900.900.900.900.900.900.900.90操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 基因时代，为生命科学提供基因时代，为生命科学提供(tgng)(tgng)源动力！源动力！第四页，共八页。q 混匀后置于混匀后置于37度水浴度水浴10分钟。分钟。q 冷冷却却后后各各管管加加入入试试剂剂B 0.1mL，室室温温(sh(sh wn)wn)放放置置10分钟。分钟。q 各各管管接接着着加加入入试试剂剂C 3mL，立立即即混混匀匀，置置37度水浴度水浴10分钟。分钟。q 冷冷却却后后，以以0号号管管为为空空白白，在在分分光光光光度度计计上以波长上以波长65
5、0nm比色读取光密度值。比色读取光密度值。 基因时代，为生命科学提供基因时代，为生命科学提供(tgng)(tgng)源动力！源动力！第五页，共八页。结果与计算结果与计算：根据测定管光密度值查标准曲线，由标根据测定管光密度值查标准曲线，由标准曲线计算血清蛋白质含量，再按血清稀释准曲线计算血清蛋白质含量，再按血清稀释(xsh)(xsh)倍数换算为倍数换算为g/L。 基因时代，为生命科学提供基因时代，为生命科学提供(tgng)(tgng)源动力！源动力！第六页，共八页。注意事项注意事项：q 各管加酚试剂时必须快速，并立即摇匀，各管加酚试剂时必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊。不应出现混浊。q 移液管
6、使用前要看清楚刻度和是否写着快、移液管使用前要看清楚刻度和是否写着快、吹，如有则需要用洗耳球吹出剩余液体吹，如有则需要用洗耳球吹出剩余液体(yt(yt)。q 减量法可有效减少误差。减量法可有效减少误差。q 分光光度计使用前需预热，绝对调零和空白分光光度计使用前需预热，绝对调零和空白管调节透光度为管调节透光度为100%。 基因基因(jyn)(jyn)时代，为生命科学提供源动力！时代，为生命科学提供源动力！第七页，共八页。内容(nirng)总结改良Lowry氏法测定蛋白质含量。 基因时代，为生命科学提供源动力。在碱性条件下蛋白质的肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质-铜复合物。（双缩脲反应(fnyng)Biuret Reaction）。蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成钼蓝-钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量第八页，共八页。