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1、第十一章第十一章消毒灭菌与病原微生物实验室消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全生物安全第一节第一节消毒灭菌的概消毒灭菌的概念念消毒消毒(disinfection)：杀死物体上或环境中的病原微生物的方法。杀死物体上或环境中的病原微生物的方法。灭菌灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方法。杀灭物体上所有微生物的方法。防腐防腐(antisepsis)：防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法。防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法。清清洁洁(cleaning)：是是指指通通过过除除去去尘尘埃埃和和一一切切污污秽秽以以减减少少微微生生物物数数量量的的过程。过程。无无菌菌(asepsis)
2、和和无无菌菌操操作作：无无菌菌是是无无活活菌菌的的意意思思，多多是是灭灭菌菌的的结结果果。防止细菌进入人体或其它物品的操作技术，称为无菌操作。防止细菌进入人体或其它物品的操作技术，称为无菌操作。第二节第二节 消毒灭菌的方法消毒灭菌的方法热力灭菌法热力灭菌法辐射杀菌法辐射杀菌法滤过除菌法滤过除菌法干燥与低温抑菌法干燥与低温抑菌法干热灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法湿热灭菌法物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法 高效消毒剂高效消毒剂中效消毒剂中效消毒剂低效消毒剂低效消毒剂（一）热力灭菌法（一）热力灭菌法1.干热灭菌法干热灭菌法2.湿热灭菌法湿热灭菌法在同一温度下，湿热效力比干热大。
3、在同一温度下，湿热效力比干热大。原因：（原因：（1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；（2）湿热的穿透力比干热大；）湿热的穿透力比干热大；（3）湿热的蒸汽有潜热存在。）湿热的蒸汽有潜热存在。1.干热灭菌法干热灭菌法 焚烧焚烧 烧灼烧灼 干烤干烤 (160 2h或或 171 1h或或121 16h)红外线红外线干烤箱干烤箱烧灼灭菌法烧灼灭菌法2.湿热灭菌法湿热灭菌法 煮沸法煮沸法 巴氏消毒法巴氏消毒法(牛乳、酒类）牛乳、酒类）低温维持巴氏消毒法低温维持巴氏消毒法 61.162.830min 高温瞬时巴氏消毒法高温瞬时巴氏消毒法 71.715s 超高温巴氏消毒法超高温巴氏消
4、毒法 13212s 流动蒸汽消毒法流动蒸汽消毒法 间歇蒸汽灭菌法间歇蒸汽灭菌法（反复多次流动蒸汽）（反复多次流动蒸汽）100维维持持30min37温温箱箱过过夜夜100维维持持30min37温温箱箱过过夜夜 100维持维持30min 37温箱过夜温箱过夜100维持维持30min。高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法 在在103.4kPa蒸气压下，温度达到蒸气压下，温度达到121.3，维持，维持1520min高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器用于普通培养基、生理盐水、耐热药品、手术敷料等。用于普通培养基、生理盐水、耐热药品、手术敷料等。（二）辐射灭菌法（二）辐射灭菌法l非电离辐射非电离辐射:紫外线紫外线l电离
5、辐射电离辐射:、射线以及高能质子、射线以及高能质子、中子等中子等l紫外线紫外线(ultraviolet ray,UV)作用于作用于DNA，使相邻的胸腺嘧啶共价结合形成二聚体，干，使相邻的胸腺嘧啶共价结合形成二聚体，干扰扰DNA复制。复制。空气消毒、表面消毒。空气消毒、表面消毒。UV的杀菌机制的杀菌机制l电离辐射电离辐射 射线射线:电离辐射强，穿透力差（电离辐射强，穿透力差（缺乏穿透力，不实用）缺乏穿透力，不实用）射线射线:电离辐射强，穿透力强电离辐射强，穿透力强 射线射线:电离辐射弱，穿透力强电离辐射弱，穿透力强x射线：杀菌力不如紫外线，穿透力强射线：杀菌力不如紫外线，穿透力强杀菌机制：射线使
6、水电离为杀菌机制：射线使水电离为H+和和OH-，这，这些游离基是强烈的还原剂和氧些游离基是强烈的还原剂和氧化剂，可直接作用于细菌本身化剂，可直接作用于细菌本身。用途：忌热物品的灭菌消毒、食品保藏和育种等方面。用途：忌热物品的灭菌消毒、食品保藏和育种等方面。l 微波微波(microwave)-热效应灭菌。热效应灭菌。（三）滤过除菌法（三）滤过除菌法 l滤菌器滤菌器(filter)-液体液体除菌除菌薄膜滤菌器薄膜滤菌器玻璃滤菌器玻璃滤菌器石棉滤菌器石棉滤菌器素陶瓷滤菌器素陶瓷滤菌器薄膜滤菌器薄膜滤菌器微孔滤膜上的细菌微孔滤膜上的细菌l生物洁净技术生物洁净技术-空气除菌空气除菌初级分子空气过滤器初级
7、分子空气过滤器塑料泡沫海绵塑料泡沫海绵中级分子空气过滤器中级分子空气过滤器无纺布无纺布高级分子空气过滤器高级分子空气过滤器超细玻璃滤纸超细玻璃滤纸层流室层流室无菌手术室无菌手术室（四）（四）干燥与低温抑菌法干燥与低温抑菌法l 干燥：干燥：细菌在干燥的环境中失去大量水分，新陈代谢便会发生障碍，细菌在干燥的环境中失去大量水分，新陈代谢便会发生障碍，甚至引起菌体蛋白质变性和由于盐类浓度的增高而逐渐导致死亡。甚至引起菌体蛋白质变性和由于盐类浓度的增高而逐渐导致死亡。l 低温：低温：低温下，细菌代谢活动降低到最低水平，生长繁殖停止，但低温下，细菌代谢活动降低到最低水平，生长繁殖停止，但仍可长时间保持活力
8、。仍可长时间保持活力。常用作保存细菌菌种，常用作保存细菌菌种，冷冻真空干燥法冷冻真空干燥法可避免解冻时对细菌的损可避免解冻时对细菌的损伤，是目前保存菌种的最好方法。伤，是目前保存菌种的最好方法。菌种保存管菌种保存管（五）化学（五）化学消毒灭菌法消毒灭菌法杀菌机制杀菌机制v促进菌体蛋白质变性或凝固。促进菌体蛋白质变性或凝固。v干扰细菌的酶系统和代谢。干扰细菌的酶系统和代谢。v损伤细菌的细胞膜，使细胞膜通透性增加，胞外液内渗，损伤细菌的细胞膜，使细胞膜通透性增加，胞外液内渗，细菌裂解。细菌裂解。化学消毒剂的种类化学消毒剂的种类（一）（一）高效消毒剂高效消毒剂 1 1.含氯消毒剂含氯消毒剂 （次氯酸
9、钠、漂白粉）（次氯酸钠、漂白粉）2 2.过氧化物消毒剂过氧化物消毒剂 （过氧化氢、过氧乙酸）（过氧化氢、过氧乙酸）3 3.醛类消毒剂醛类消毒剂 （戊二醛、甲醛）（戊二醛、甲醛）4 4.环氧乙烷环氧乙烷（二）（二）中效消毒剂中效消毒剂 1 1.含碘消毒剂含碘消毒剂 （碘酊、碘伏）（碘酊、碘伏）2 2.醇类消毒剂醇类消毒剂 （乙醇、异丙醇）（乙醇、异丙醇）（三）（三）低效消毒剂低效消毒剂 1 1.季铵盐类季铵盐类消毒剂消毒剂 （苯扎溴铵）（苯扎溴铵）2 2.氯已定氯已定 3 3.高锰酸钾高锰酸钾 影响消毒灭菌效果的因素影响消毒灭菌效果的因素|微生物的种类微生物的种类|微生物的物理状态微生物的物理状
10、态|微生物的数量微生物的数量|消毒剂性质、浓度与作用时间消毒剂性质、浓度与作用时间|温度温度|酸碱度酸碱度|有机物有机物第三节第三节 病原微生物实验室生物安全病原微生物实验室生物安全 生物安全（生物安全（biosafety）是生物技术安全（）是生物技术安全（safety of biotechnology）的简称。）的简称。生物安全是指对由现代生物技术的开发和应用可能产生生物安全是指对由现代生物技术的开发和应用可能产生的负面影响所采取的有效预防和控制措施。目的是保护生物的负面影响所采取的有效预防和控制措施。目的是保护生物多样性、生态环境和人体健康。多样性、生态环境和人体健康。一、病原微生物的分类
11、一、病原微生物的分类第一类第一类是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。未发现或者已经宣布消灭的微生物。第二类第二类是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。第三类第三类是指能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不是指能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病
12、，并构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。且具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类第四类是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。病病毒等。第一类、第二类统称为第一类、第二类统称为高致病性病原微生物高致病性病原微生物。二、病原微生物实验室的分级二、病原微生物实验室的分级级别级别处理对象处理对象一级一级对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子致病的致病因子。二级二级对人体、动植物或
13、环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，具具有有效有有效的预防和治疗措施的预防和治疗措施。三级三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施度危害的致病因子。通常有预防治疗措施。四级四级 对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播对人
14、体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗措施或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗措施。病原微生物实验室生物安全的核心是病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散防扩散和和防感染防感染。P4 实验室实验室（BSL-4）思考题思考题l常用的消毒剂有哪些种类常用的消毒剂有哪些种类?l简述化学消毒剂的杀菌机制。简述化学消毒剂的杀菌机制。l湿热灭菌有哪些方法湿热灭菌有哪些方法?各有何用途各有何用途?l简述紫外线杀菌的作用机制和注意事项。简述紫外线杀菌的作用机制和注意事项。l在温度和时间相同的情况下，为什么湿热灭菌法的效果比在温度和时间相同的情况下，为什么湿热灭菌法的效果比干热法好干热法好?