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1、植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程植物组织培养技术植物组织培养技术植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术植物细胞工程的实际应用植物细胞工程的实际应用动物细胞培养动物细胞培养动物体细胞核移植技术动物体细胞核移植技术动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体单克隆抗体离体的植物器官、组织或细胞（外植体）离体的植物器官、组织或细胞（外植体）愈伤组织愈伤组织根、芽根、芽植物体植物体脱分化脱分化再分化再分化无菌无菌营养：营养：一定的外界条件一定的外界条件植物激素：植物激素：细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素有机物有机物 无机盐无机盐 水分水分遮光遮光一定的光照一定的光照芽发育成叶，叶芽发育成叶，叶肉
2、细胞中叶绿素肉细胞中叶绿素的合成需要光照的合成需要光照排列疏松而无规排列疏松而无规则，高度液泡化的则，高度液泡化的呈无定形状态的薄呈无定形状态的薄壁细胞壁细胞如：胡萝卜的形成层、菊花如：胡萝卜的形成层、菊花幼茎段、月季的花药幼茎段、月季的花药植物组织培养技术植物组织培养技术返回返回 （1 1）愈伤组织：）愈伤组织：排列疏松、高度排列疏松、高度液泡化而无定形状的液泡化而无定形状的薄壁细胞。无叶绿体，薄壁细胞。无叶绿体，蔗糖供能，代谢类型蔗糖供能，代谢类型为异养需氧型，进行为异养需氧型，进行有丝分裂。有丝分裂。返回返回 （2 2）植物细胞的）植物细胞的脱分化脱分化：（3 3）植物细胞的）植物细胞的
3、再分化再分化：就是让就是让就是让就是让已已已已分化的细胞分化的细胞分化的细胞分化的细胞，经过诱导后，失去其，经过诱导后，失去其，经过诱导后，失去其，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成特有的结构和功能而转变成特有的结构和功能而转变成特有的结构和功能而转变成未分化细胞未分化细胞未分化细胞未分化细胞的过程，的过程，的过程，的过程，又称去分化。又称去分化。又称去分化。又称去分化。实质实质实质实质是提高细胞的全能性过程，是提高细胞的全能性过程，是提高细胞的全能性过程，是提高细胞的全能性过程，结结结结果果果果是形成愈伤组织是形成愈伤组织是形成愈伤组织是形成愈伤组织 脱分化产生的脱分化产生的愈伤组织
4、愈伤组织在培养过程中重新在培养过程中重新分化形成分化形成胚状体或丛芽胚状体或丛芽的过程。的过程。（避光）（避光）（避光）（避光）（需光，自养需氧型）（需光，自养需氧型）（需光，自养需氧型）（需光，自养需氧型）（4 4）决定植物脱分化、再分化的关键因素是什么？）决定植物脱分化、再分化的关键因素是什么？植物激素的种类和比例。植物激素的种类和比例。生长素用量生长素用量细胞分裂素用量细胞分裂素用量适中：诱导适中：诱导愈伤组织愈伤组织高：利于根的分化、抑制芽的形成高：利于根的分化、抑制芽的形成（胚状体胚状体）低：利于芽的分化、抑制根的形成低：利于芽的分化、抑制根的形成（丛芽丛芽）返回返回融合的原生质体融
5、合的原生质体原生质体原生质体B B原生质体原生质体A A去壁去壁去壁去壁植物植物A A细胞细胞植物植物B B细胞细胞诱导诱导融合融合再生出细胞壁再生出细胞壁杂种细胞杂种细胞脱分化脱分化 （细胞分裂）（细胞分裂）愈伤组织愈伤组织再分化再分化杂种植株杂种植株植物植物组织组织培养培养植物植物细胞细胞融合融合植物植物体细胞体细胞杂交杂交返回返回1.1.微型繁殖微型繁殖植物繁殖的新途径2.2.作物脱毒作物脱毒3.3.神奇的人工种子神奇的人工种子作物新品种的培育1.单倍体育种单倍体育种2.突变体的利用突变体的利用3.3.转基因植物的培育转基因植物的培育4.4.植物体细胞杂交植物体细胞杂交细胞产物的工厂化生
6、产返回返回过程：过程：阅读课本P44-45取动物组织块取动物组织块剪碎组织剪碎组织用用胰蛋白酶胰蛋白酶处处理分散成单个理分散成单个细胞细胞转入培养液，转入培养液，制成细胞悬液制成细胞悬液进行进行原代培养原代培养贴满瓶壁的细贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶胞用胰蛋白酶处理分散成单处理分散成单个细胞，个细胞，制成制成细胞悬液细胞悬液转入培养液转入培养液中进行中进行传代传代培养培养放入放入二氧化二氧化碳碳培养箱中培养箱中培养培养冷冻保存冷冻保存动物胚胎或幼龄动物器官组织动物胚胎或幼龄动物器官组织剪碎胰蛋白酶细胞悬液10代细胞原代培养50代细胞贴壁生长接触抑制传代培养无限传代细胞株细胞系培养液适宜环境对于目前
7、使用或冷冻保存的细胞有什么要求？遗传物质未改变遗传物质已改变目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内,以保持细胞正常的二倍体核型.二倍体核型:二倍体生物体细胞染色体组在有丝分裂中期的表现,是染色体数目、大小、形态特征的总和。返回返回M中期卵母细胞母绵羊母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞体细胞核移植过程动物细胞培养返回返回灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜
8、具有一定的流动性）生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒（丧失感染性、保留抗原结构）（丧失感染性、保留抗原结构）返回返回B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合（只考虑两两融合）（只考虑两两融合）培养液中细胞有几培养液中细胞有几种类型？融合细胞种类型？融合细胞几种几种类型类型？骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-B-B淋巴细胞淋巴细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞多种多种杂交细胞杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性克隆上述杂
9、交细胞克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞检验阳性细胞单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养单单克隆抗体的制克隆抗体的制备过备过程程第第第第1 1 1 1次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。第第第第2 2 2 2次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细生所需抗体的杂交瘤细生所需抗体的杂交瘤细生所需抗体的杂交瘤细胞。胞。胞。胞。该细胞继承该细胞继承双亲细胞双亲细胞的遗传特性，既能的遗传特性，既能产生专产生专一抗体一抗体又能又能无限增殖无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？返回返回