生物高中生物选修知识点总结.docx

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1、高 中 生 物 选 修1 生 物 技 术 实 践 知 识 点 总 结专题一传统发酵技术的应用课题一果酒和果醋的制作1、发酵：经过微生物技术的培养来生产大批代谢产物的过程。2、有氧发酵：醋酸发酵谷氨酸发酵无氧发酵：酒精发酵乳酸发酵3 / 233、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖子生殖( 主要 ) 分裂生殖孢4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大批生殖。C H O 6O 6CO 6H O61262225、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。C H O 2C H OH 2CO6126256、20 左右最适合酵母菌生殖酒精发酵时一般将温度控制在18 -25 7、在葡萄酒自然发

2、酵的过程中 , 起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌 . 在发酵过程中 , 跟着酒精浓度的提升 , 红葡萄皮的色素也进入发酵液 , 使葡萄酒体现深红色 .在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌能够生长生殖，而绝大多半其余微生物都因没法适应这一环境而遇到限制。8、醋酸菌是单细胞细菌 ( 原核生物 ), 代谢种类是异养需氧型 , 生殖方式为二分裂9、当氧气、糖源都充分时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺乏糖源时，醋酸菌将乙醇变成乙醛，再将乙醛变成醋酸。 2CH OH 4O CH COOH 6H O523210 、控制发酵条件的作用醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即便不过短时间中止

3、通入氧气，也会惹起醋酸菌死亡。醋酸菌最适生长温度为30 35 ，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的时机。有两条门路生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。11 、实验流程：精选葡萄冲刷榨汁酒精发酵果酒（醋酸发酵果醋）12 、酒精查验：果汁发酵后能否有酒精产生，能够用重铬酸钾来查验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反响体现灰绿色。先在试管中加入发酵液2 L，再滴入物质的量浓度为3mol/L的 HSO 3滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液243 滴，振荡试管，察看颜色13 、充气口是在醋酸发酵时连结充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的

4、。排气口要经过一个长而曲折的胶管与瓶身相连结，其目的是防备空气中微生物的污染。张口向下的目的是有益于二氧化碳的排出。使用该装置制酒时，应当封闭充气口；制醋时，应当充气口连结气泵，输入氧气。疑难解答（1） 你以为应当先冲刷葡萄仍是先除掉枝梗？为何？应当先冲刷，而后再除掉枝梗，以防止除掉枝梗时惹起葡萄损坏，增添被杂菌污染的时机。（2） 你以为应当从哪些方面防备发酵液被污染？如：要先冲刷葡萄，再除掉枝梗；榨汁机、发酵装置要冲洗洁净，并进行酒精消毒； 每次排气时只要拧松瓶盖，不要完好揭开瓶盖等。（3） 制葡萄酒时，为何要将温度控制在 18 25 ？制葡萄醋时，为何要将温度控制在30 35 ？温度是酵母

5、菌生长和发酵的重要条件。20 左右最适合酵母菌的生殖。所以需要将温度控制在其最适温度范围内。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为 30 35 ，所以要将温度控制在 30 35 。课题二腐乳的制作1、多种微生物参加了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，此中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。代谢种类是异养需氧型。生殖方式是孢子生殖。营腐生生活。2、原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。3、实验流程：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制4、酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行先期发酵和后期发酵。先期发酵的主要作用： 1.

6、 创建条件让毛霉生长。 2. 使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期发酵主假如酶与微生物共同参加生化反响的过程。经过各样辅料与酶的缓解作用， 生成腐乳的香气。5、将豆腐切成 3cm 3cm 1cm 的若干块。所用豆腐的含水量为 70 左右，水分过多则腐乳不易成形。 * 水分测定方法以下：精准称取经研钵研磨成糊状的样品510g( 精准到0.02mg) ，置于已知重量的蒸发皿中，均匀铺平后，在4h，拿出后置于干燥器内冷却至室温后称重，而后再烘止。100 105 电热干燥箱内干燥30min ，直至所称重量不变成样品水分含量（ %）计算公式以下：( 烘干前容器和样质量量 - 烘干后容器和样质量量 )/

7、 烘干前样质量量毛霉的生长：条件：将豆腐块平放在笼屉内，将笼屉中的控制在定的温度。15 18 ，并保持一根源： 1. 来自空气中的毛霉孢子， 2. 直接接种优秀毛霉菌种时间：5 天加盐腌制：将长满毛霉的豆腐块分层齐整地摆放在瓶中，同时逐层加盐，跟着层数的加高而增添盐量，靠近瓶口表面的盐要铺厚一些。加盐腌制的时间约为8 天左右。用盐腌制时，注意控制盐的用量：盐的浓度过低，不足以克制微生物的生长，可能致使豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口胃食盐的作用： 1. 克制微生物的生长，防止腐败变质2. 析出水分，是豆腐变硬，在后期制作过程中不易酥烂 3. 调味作用，给腐乳以必需的咸味4. 浸提毛酶菌

8、丝上的蛋白酶。配制卤汤：卤汤直接关系到腐乳的色、香、味。卤汤是由酒及各样香辛料配制而成的。卤汤中酒的含量一般控制在 12% 左右。酒的作用： 1. 防备杂菌污染以防腐2. 与有机酸联合形成酯，给予腐乳风味3. 酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系，酒精含量越高，对蛋白酶的克制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，蛋白酶的活性高，加快蛋白质的水解，杂菌生殖快，豆腐易腐败，难以成块。香辛料的作用： 1. 调味作用 2. 杀菌防腐作用 3. 参加并促使发酵过程防备杂菌污染：用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗漱洁净后要用开水消毒。装瓶时，操作要快速当心。齐整地摆放好豆腐、加入卤汤后，要用胶条将

9、瓶口密封。封瓶时，最好将瓶口经过酒精灯的火焰，防备瓶口被污染。疑难解答（1） 利用所学的生物学知识，解说豆腐长白毛是怎么一回事？豆腐生长的白毛是毛霉的白色菌丝。严格地说是直立菌丝，在豆腐中还有爬行菌丝。（2） 为何要撒很多盐，将长毛的豆腐腌起来？盐能防备杂菌污染，防止豆腐腐败。（3） 我们平时吃的豆腐，哪一种适适用来做腐乳？含水量为 70% 左右的豆腐适于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。（4） 吃腐乳时，你会发现腐乳外面有一层致密的“皮”。这层“皮”是如何形成的呢？它对人体有害吗？它的作用是什么？“皮”是先期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝（爬行菌丝），对人体无害。它能形成腐乳的“体”

10、，使腐乳成形。课题三制作泡菜制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代谢种类是异养厌氧型。在无氧条件下，降糖分解为乳酸。分裂方式是二分裂。反响C式H为O：酶2C H O363产+能量含抗生素牛奶不可以生6126酸奶的原由是抗生素杀死乳酸菌。常有的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。乳酸杆菌常用于生产酸奶。亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水，在食品生产顶用作食品增添剂。饮食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，国家规定肉制品中不超出30mg/kg ，酱腌菜4 / 23中不超出 20mg/kg ，婴儿奶粉中不超出 2mg/kg 。亚硝酸盐被汲取后随尿液排出体外，但在适合 pH、温度和必定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。亚一

11、般在腌制10 天后亚硝酸盐含量开始降硝低，故在 10 天以后食用最好酸* 测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件盐发酵时间（ d）下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反响后，与 N-1- 萘基乙二胺盐酸盐联合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显色液目测比较，估量泡菜中亚硝酸盐含量。专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养培养基：人们依照微生物对营养物质的不一样需求，配制出供其生长生殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。培养基依照 物理性质 可分为 液体培养基半固体培养基 和固体培养基 。在液体培养基中加入凝结剂 琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基顶用作凝结剂）后，制成琼脂

12、固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，能够形成肉眼可见的菌落。依据菌落的特色能够判断是哪一种菌。 液体培养基 应用于工业或生活生产， 固体培养基 应用于微生物的分别和判定， 半固体培养基 则常用于察看微生物的运动及菌种收藏等。依照成分培养基可分为 人工合成培养基 和天然培养基 。合成培养基 是用成分已知的化学物质配制而成，此中成分的种类比率明确，常用于微生物的分别判定。 天然培养基 是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实质工业生产。依照培养基的 用途，可将培养基分为 选择培养基 和判定培养基 。选择培养基 是指在培养基中加入某种化学物质，以克制不需要的微生物生长，促使所需要的微生物的生

13、长。 鉴识培养基 是依据微生物的特色，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴识不一样类其余微生物。培养基的化学成分包含 水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。5 / 23碳源：能为微生物的代谢供给碳元素的物质。如CO 、NaHCO23等无机碳源；糖类、石单质碳不可以作为碳油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只好利用有机碳源。源 。-+氮源：能为微生物的代谢供给氮元素的物质。如N 、NH 、 NO、NH（无机氮源）蛋白2334质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用 N 。培养基还要知足微生物生长对pH、特别营养物质以及氧气的要求。比如，培养2乳酸杆菌时需

14、要在培养基中增添 维生素 ，培养霉菌时须将培养基的pH 调至酸性，培养细菌是需要将 pH 调至中性或微碱性 ，培养厌氧型微生物 是则需要供给 无氧的条件无菌技术获取纯净培养物的重点是防备外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的穿着和手，进行洁净和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种器具和培养基等器具进行灭菌。为防止四周环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰邻近进行。实验操作时应防止已经灭菌办理的资料器具与四周的物件相接触。无菌技术除了用来防备实验室的培养物被其余外来微生物污染外，还有什么目的？ 答：无菌技术还可以有效防止操作者自己被微生物感染。消毒与灭菌的差异消毒指派用

15、较为平和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包含芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法 ，巴氏消毒法 （关于一些不耐高温的液体）还有 化学药剂 （如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、 紫外线消毒 。灭菌则是指派用激烈的理化要素杀死物体内外所有的微生物，包含芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌 、干热灭菌 、高压蒸汽灭菌 。灭菌方法：接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属器具等使用干热灭菌法，所用器材是干热灭菌箱；培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器材是高压蒸汽灭菌锅。表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器材是紫外灯。6 / 23比较项理化要素的作用强度

16、消灭微生物的数目芽孢和孢子可否被消灭消毒较为平和部分生活状态的微生物不可以灭菌激烈所有微生物能制作牛肉膏蛋白胨固体培养基（1） ）方法步骤：计算、称量、熔解、灭菌、倒平板。（2） ）倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，将瓶口快速经过分焰。用左手的拇指和食指将培养皿翻开一条稍大于瓶口的空隙，右手将锥形瓶中的培养基（约 10 20mL）倒入培养皿，左手立刻盖上培养皿的皿盖。等候平板冷却凝结，大概需 5 10min 。而后，将平板倒过来搁置，使培养皿盖在下、皿底在上。倒平板操作的议论1. 培养基灭菌后，需要冷却到基的温度？50

17、左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养提示：能够用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度降落到刚才不烫手时，便可以进行倒平板了。2. 为何需要使锥形瓶的瓶口经过分焰？答：经过灼烧灭菌，防备瓶口的微生物污染培养基。3. 平板冷凝后，为何要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝结后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面的水分更好地挥发，又能够防备皿盖上的水珠落入培养基，造7 / 23成污染。4. 在倒平板的过程中，假如不当心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还可以用来培养微生物吗？为何？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋长，所以最好

18、不要用这个平板培养微生物。纯化大肠杆菌（ 1）微生物接种的方法最常用的是 平板划线法 和稀释涂布平板法 。（ 2）平板划线法是经过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将齐集的菌种逐步稀释 分别到培养基的表面。在数次划线后培养，能够分别到由一个细胞生殖而来的肉眼可见的子细胞集体，这就是菌落。（ 3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，而后将不一样稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作 和涂布平板操作 两步。（4） ）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的 目的是：使齐集在一同的微生物分别成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。（5）

19、 ）平板划线法操作步骤：将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并翻开棉塞。将试管口经过分焰。将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。将试管经过分焰，并塞上棉塞。左手将皿盖翻开一条空隙，右手将沾有菌种的接种环快速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。灼烧接种环，待其冷却后，从第一地区划线的尾端开始往第二地区内划线。重复以上操作，在三、四、五地区内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。将平板倒置放入培养箱中培养。平板划线操作的议论1. 为何在操作的第一步以及每次划线以前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍14 / 23然需要灼烧接种环吗？为何？答：

20、操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死前一次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线 时，接种环上的菌种直接根源于前一次划线的尾端，从而经过划线次数的增添，使每次划线时菌种的数目渐渐减少，以便获取菌落。划线结束后灼烧接种环，能实时杀死接种环上残 留的菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。2. 在灼烧接种环以后，为何要等其冷却后再进行划线？ 答：免得接种环温度太高，杀死菌种。3. 在作第二次以及后来的划线操作时，为何老是从前一次划线的尾端开始划线？答： 划线后，线条尾端细菌的数目比线条开端处要少，每次从前一次划线的尾端开始，能使细菌的

21、数目跟着划线次数的增添而逐渐减少，最后能获取由单个细菌生殖而来的菌落。（6） ）涂布平板操作的步骤：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取少量菌液，滴加到培养基表面。将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却 8 10s 。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布平板操作的议论涂布平板的所有操作都应在火焰邻近进行。联合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想想，第2 步应如何进行无菌操作？提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。比如，酒精灯与培养皿的距离要适合、吸管头不要接触任何其余物体、吸管要在酒精灯火焰四周；等等。菌种的保留（1） ）关于屡次使用的菌种，能够采纳 暂时收藏 的方法。暂时收

22、藏方法将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在适合的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入 4的冰箱中收藏。此后每 3 6 个月，都要从头将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。弊端：这类方法保留的时间不长，菌种简单被污染或产生变异。（2） ）关于需要长久保留的菌种，能够采纳甘油管藏 的方法。在 3mL 的甘油瓶中，装入 1mL 甘油后灭菌。将 1mL 培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在 20 的冷冻箱中保留。疑难解答（1） ）生物的营养营养是指生物摄入、利用营养物质的过程。营养物质是指保持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白

23、质、维生素六类。植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特别营养物质五类。（ 2）确立培养基制作能否合格的方法将未接种的培养基在恒温箱中保温 12 天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，不然需要从头制备。课题二土壤中分解尿素的细菌的分别与计数尿素是一种重要的农业氮肥，尿素其实不可以直接被农作物汲取。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨以后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶尿素最先是从人的尿液中发现的挑选菌株（ 1）实验室中微生物的挑选应用的原理人为供给有益于目的菌株生长的条件（包含营养、温度、pH 等），同时克制

24、或阻挡其他微生物生长。（2） ）选择性培养基在微生物学中，将同意特定种类的微生物生长，同时克制或阻挡其余种类微生物生长的培养基，称作 选择培养基 。（3） ）配制选择培养基的依照依据选择培养的菌种的生理代谢特色加入某种物质以达到选择的目的。比如，培养基中不加入有机物能够选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，能够选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。统计菌落数目（1） ）测定微生物数目的常用方法有 稀释涂布平板法 和显微镜直接计数 。（2） ）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，根源于样品稀释液中的一个活菌。

25、经过统计平板上的菌落数，就能推断出样品中大概含有多少活细菌。为了保证结果正确，一般设置 35 个平板，选择菌落数在 30 300 的平板进行计数，并 取均匀值 。统计的菌落数常常比活菌的实质数目低，所以，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。采纳此方法的注意事项： 1. 一般选用菌落数在 30300之间的平板进行计数 2. 为了防备菌落延伸，影响计数，可在培养基中加入 TTC3. 本法仅限于形成菌落的微生物设置比较设置比较的主要目的是清除实验组中非测试要素对实验结果的影响，提升实验结果的可信度。比较实验是指除了被测试的条件之外，其余条件都同样的实验，其作用是对比试验 组，清除任何其余可能原由

26、的扰乱，证明的确是所测试的条件惹起相应的结果。实验设计实验设计包含实验方案，所需仪器、资料、器具和药品，详细的实行步骤以实时间安排等的综合考虑和安排。（ 1）土壤取样：同其余生物环境对比，土壤中的微生物，数目最大，种类最多。在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长。从富含有机物、湿润、pH 7 的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约 38cm 的土壤层取样。（ 2）样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。在实质操作中，往常采纳必定稀释范围的样品液进行培养，以保证获取菌落数在30300 之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数目，一般采纳104105 10 6测定放线菌的数目，

27、一般采纳 103104105测定真菌的数目，一般采纳 102103 10 4（3） ）微生物的培养与察看不一样种类的微生物，常常需要不一样的培养温度和培养时间。细菌 3037 12 天放线菌 2528 57 天霉菌 2528 34 天每隔 24 小时统计一次菌落数目，选用菌落数目稳准时的记录作为结果，这样能够防备因培养时间不足而致使一楼菌落的数目。一般来说，在必定的培养条件下（同样的培养基、惟独及培养时间），同种微生物表现出稳固的菌落特色。形状、大小、隆出发度、颜色疑难解答（1）如何从平板上的菌落数推断出每克样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计 3 个平板，计算出平板菌落

28、数的均匀值每克样品中的菌落数 =（ C/V）*M此中， C 代表某一稀释度下平板上生长的均匀菌落数， V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ ml）， M 代表稀释倍数课题三分解纤维素的微生物的分别纤维素，一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。纤维素与纤维素酶（ 1）棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物，木材、作物秸秆等也富含纤维素。（ 2）纤维素酶是一种复合酶，一般以为它起码包含三种组分，即C 酶、 C酶和葡萄糖苷1X酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最后被水解成葡萄糖，为微生物的生长供给营养。纤维素分解菌的挑选（1

29、） ）挑选方法：刚果红染色法。能够经过颜色反响直接对微生物进行挑选。（2） ）刚果红染色法挑选纤维素分解菌的原理刚果红是一种染料，它能够与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但其实不睦水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这类反响。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时， 刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素的复合物就没法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们便可以经过能否产生透明圈来挑选纤维素分解菌。分别分解纤维素的微生物的实验流程土壤取样选择培养（此步能否需要，应依据样品中目的菌株数目的多少来确立）梯度稀释将样品涂布到鉴识纤维素分

30、解菌的培养基上精选产生透明圈的菌落（1） ）土壤采集选择富含纤维素的环境。（2） ）刚果红染色法分别纤维素分解菌的步骤倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板（3） ）刚果红染色法种类一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反响，另一种是在倒平板时就加入刚果红。课题延长对分解纤维素的微生物进行了初步的挑选后，不过分别纯化的第一步，为确立获取的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵 和固体发酵 两种。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。疑难解答（1） ）为何要在富含纤维素的环境中找寻纤维素分解菌？因为生物与环境的互相依

31、存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提升，所以从这类土样中获取目的微生物的几率要高于一般环境。（2） ）将滤纸埋在土壤中有什么作用？你以为滤纸应当埋进土壤多深？将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对齐集，其实是人工设置纤维素分解菌生计的适合环境。一般应将纸埋于深约10cm 左右腐殖土壤中。（3） ）两种刚果红染色法的比较方法一是传统的方法，弊端是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混淆；其长处是这样显示出的颜色反响基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的长处是操作简易， 不存在菌落混淆问题，弊端是因为纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，能够使能 够产生淀粉酶的微生物出现假阳性

32、反响。但这类只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为 模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，所以能够与纤维素酶产生的透明圈相划分。方法 二的另一弊端是：有些微生物拥有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果 红形成显然的透明圈，与纤维素分解菌不易划分。（4） ）为何选择培养能够“浓缩”所需的微生物？在选择培养的条件下，能够使那些能够适应这类营养条件的微生物获取快速生殖，而那些不适应这类营养条件的微生物的生殖被克制，所以能够起到“浓缩”的作用。专题三植物的组织培养技术课题一菊花的组织培养植物组织培养的基本过程细胞分化：在生物个体发育过程中，细胞在形态、构造和生理功能上出现稳固性差异的过程。离体

33、的植物组织或细胞，在培养了一段时间此后，会经过细胞分裂，形成愈伤组织，愈伤组织的细胞摆列松散而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或许叫做去分化。脱分化产生的愈伤组织连续进行培养，又能够从头分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，能够发育成完好的植物体。植物细胞工程拥有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都拥有发育成完好个体的能力，即每个生 物细胞都拥有全能性。但在生物体的生长发育过程中其实不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，经过基因的选择性表达，构成不一样组织和器官。

34、植物组织培养技术的应用有：实现优秀品种的快速生殖；培养脱毒作物；制作人工种子； 培养作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。细胞分化是一种长久性的变化，它有什么生理意义？使多细胞生物体中细胞构造和功能趋势特意化，有益于提升各样生理功能的效率。比较根尖分生组织和愈伤组织的异同组织种类细胞根源细胞形态细胞构造细胞摆列细胞去处根尖分化成多种分生组织受精卵正方形无液泡密切细胞组织响植物组织培养的条件愈伤组织高度分化细胞无定形高度液泡化松散再分化成新个体影同样点都经过有丝分裂进行细胞增殖资料： 不一样的植物组织，培养的难易程度差异很大。植物资料的选择直接关系到试验的成败。植物的种类、资料的年纪和保留时间的

35、长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌发的侧枝作资料。一般来说，简单进行无性生殖的植物简单进行组织培养。选用生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，简单引诱脱分化和再分化。营养： 离体的植物组织和细胞，对营养、环境等条件的要求相对特别，需要配制适合的培养基。常用的培养基是 MS 培养基，此中含有的大批元素是 N、 P 、 S 、 K、Ca 、Mg，微量元素是 Fe 、 Mn、 B、 Zn、 Cu 、 Mo、 I 、 Co ，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。激素： 植物激素中 生长素和细胞分裂素 是启动细胞分裂、脱分化和再分化的重点性激素。在生长素存在的状

36、况下，细胞分裂素的作用体现增强趋势。在培养基中需要增添生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后次序、用量的比率等都影响结果。15 / 23使用次序实验结果+生长素细胞分裂素比值与结果先生长素，有益于分裂但不环 境比值高时促根分化，条后细胞分裂素先细胞分裂素，后生长素同时使用分化细胞既分裂也分化分化频次提升件 ：抑芽形成PH、促芽分化，温度 、比值低时抑根形成光等 环比值适中促使愈伤组织生长境条件。不一样的植物对各样条件的要求常常不一样。进行菊花的组织培养，一般将pH 控制在 5.8左右，温度控制在 1822 ，并且每天用日光灯照耀12h. 4、操作流程配制 MS 固体培养基 ：配制各样

37、母液：将各样成分按配方比率配制成的液）。浓缩液 （培养基母使用时依据母液的浓缩倍数，计算用量，并加蒸馏水稀释。配制培养基：应加入的物质有琼脂、蔗糖、大批元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，并用蒸馏水定容到 1000 毫升。在菊花组织培养中，能够不增添植物激素原由是菊花茎段组织培养比较简单。灭菌：采纳的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。 MS 培养基中各样营养物质的作用是什么？与肉汤培养基对MS 培养基有哪些特比，色？大批元素和微量元素供给植物细胞所必需的无机盐；蔗糖供给碳源，保持细胞浸透压；甘氨酸、维生素等物质主假如为了知足离体植物细胞在正常代谢门路遇到必定影响后所产生的特别营养需求。微生物培养基以

38、 有机营养 为主， MS 培养基则需供给大批 无机营养 。外植体的消毒 外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。选用菊花茎段时，要取生长旺盛的嫩枝。菊花茎段用流水冲刷后可加少量洗衣粉，用软刷轻轻洗刷，洗刷后在流水下16 / 23冲刷 20min 左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70% 的酒精中摇动 23 次，连续 67s ，立刻将外植体拿出，在无菌水中冲洗。拿出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入质量分数为 0.1% 的氯化汞溶液中 12min 。拿出后，在无菌水中起码冲洗 3 次，漂洗消毒液。注意：对外植体进行表面消毒时，就要考虑药剂的消毒成效，又要考虑植物的耐受

39、能力。接种：接种过程中插入外植体时形态学上端向上，每个锥形瓶接种 7 8 个外植体。外植体接种与细菌接种相像，操作步骤同样，并且都要求无菌操作。培养：应当放在无菌箱中进行，并按期进行消毒，保持适合的温度（ 1822 ）和光照（ 12h ）移栽： 栽前应先翻开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几天，而后用流水冲洗根部培养基。而后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天种植。种植外植体在培养过程中可能会被污染，原由有外植体消毒不完全；培养基灭菌不完全；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。专题二月季的花药培养被子植物的花粉发育被子植物的雄蕊往常包含 花丝、花药两部分

40、。花药为 囊状构造 ，内部含有很多花粉。花粉是由 花粉母细胞 经过减数分裂而形成的，所以，花粉是 单倍体的生殖细胞。被子植物花粉的发育要经历 小孢子四分体期间 、单核期和双核期 等阶段。在小孢子四分体期间， 4 个单倍体细胞连在一同，进入单核期时，四分体的 4 个单倍体细胞相互分离，形成 4 个拥有单细胞核的花粉粒。这时的细胞含浓重的原生质，核位于细胞的中央（单核居中期 ）。跟着细胞不停长大，细胞核由中央移向细胞一侧（ 单核靠边期 ），并分裂成 1 个生殖细胞核和 1 个花粉管细胞核，从而形成两个细胞，一个是生殖细胞，一个是营养细胞。生殖细胞将在分裂一次，形成两个精子。注意： 成熟的花粉粒有两

41、类，一类是二核花粉粒，其花粉粒中只含花粉管细胞核和生殖18 / 23细胞核，二核花粉粒的精子是在花粉管中形成的；另一类是三核花粉粒，花粉在成熟前，生殖细胞就进行一次有丝分裂，形成两个精子，此花粉粒中含有两个精子核和一个花粉管核（营养核）花粉发育过程中的四分体和动物细胞减数分裂的四分体不一样。花粉发育过程中的四分体是花粉母细胞经减数分裂形成的4 个连在一同的单倍体细胞；而动物细胞减数分裂过程中的四分体是联会配对后的一对同源染色体，因为含有四条染色单体而称为四分体。同一世殖细胞形成的两个精子，其基因构成完好同样。产生花粉植株的两种门路经过花药培养产生花粉植株（即单倍体植株）一般有两种门路 ，一种是

42、花粉经过胚状体阶段发育为植物，另一种是花粉在引诱培养基上先形成愈伤组织，再将其引诱分化成植株 。这两种门路之间并无绝对的界线，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比 。注意： 不论哪一种产生方式，都要 先引诱生芽，再引诱生根 胚状体： 植物体细胞组织培养过程中，引诱产生的形态与受精卵发育成的胚特别近似的构造，其发育也与受精卵发育成的胚近似，有胚芽、胚根、胚轴等完好构造，就像一粒种子，又称为细胞胚。影响花药培养的要素引诱花粉可否成功及引诱成功率的高低，受多种要素影响，此中 资料的选择与培养基的构成 是主要的影响要素亲本的生理状况：花粉初期是的花药比后期的更简单产生花粉植株，选择月季的初花期。适

43、合的花粉发育期间：一般来说，在 单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的期间，花药培养成功率最高花蕾：选择 完好未开放 的花蕾 亲本植株的生长条件 、资料的低温预办理 以及接种密度 等对引诱成功率都有必定影响资料的选用：选择花药时，一般要经过 镜检来确立此中的花粉能否处于适合的发育期。确立花粉发育期间的最常用的方法是 醋酸洋红法 。可是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采纳 焙花青 - 铬矾法 ，这类方法能将 花粉细胞核 染成蓝黑色资料的消毒接种和培养：灭菌后的花蕾，要在无菌条件下除掉萼片和花瓣，并立刻将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要 尽量不损害花药 （不然接种后简单从受伤部位长生愈伤组织），

44、同时还要 完全去除花丝 ，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成，往常每瓶接栽花药 710 个, 培养温度控制在 25 左右 , 不需要光照 . 幼小植株形成后才需要光照 . 一般经过 20 30 天培养后 , 会发现花药开裂 , 长出愈伤组织或形成胚状体。将愈伤组织实时转移到分化培养基上，以便进一步分化出重生植株。假如花药开裂开释出胚状体，则一个花药内就会产生大批幼小植株，一定在花药开裂后赶快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，不然这些植株将很难分开。还需要对培养出来的植株做进一步的判定和挑选。植物组织培养技术与花药培养技术的同样之处是：培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基真同样。二者的不一样之处在于：花药培养的选材特别重要，需预先探索期间适合的花蕾；花药裂开后开释出的愈伤组织或胚状体也要实时改换培养基；花药培养对培养基配方的要求更加严格。这些都使花药培养的难度大为增添。专题五和蛋白质技术 课题一 的粗提取与判定提取