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1、 素养加强课 6 同位素标记法及其应用 同位素标记法在高中生物实验中的应用归纳 (2016全国卷)在有关 DNA 分子的研究中,常用32P 来标记 DNA 分子。用、和 表示 ATP 或 dATP(d 表示脱氧)上三个磷酸基团所处的位置(APPP或 dAPPP)。回答下列问题:(1)某种酶可以催化 ATP 的一个磷酸基团转移到 DNA 末端上,同时产生 ADP。若要用该酶把32P 标记到 DNA 末端上,那么带有32P 的磷酸基团应在 ATP 的_(填“”“”或“”)位上。(2)若用带有32P 的 dATP 作为 DNA 生物合成的原料,将32P 标记到新合成的 DNA 分子上,则带有32P
2、的磷酸基团应在 dATP 的_(填“”“”或“”)位上。(3)将一个某种噬菌体 DNA 分子的两条链用32P 进行标记,并使其感染大肠杆菌,在不含有32P 的培养基中培养一段时间。若得到的所有噬菌体双链 DNA 分子都装配成噬菌体(n个)并 释放,则其中含有32P 的噬菌体所占比例为 2/n,原因是_ _。审题指导(1)弄清 ATP 中带有32P 的磷酸基团的三个位置 APPP。(2)弄清两个实验的目的,一个是让某种酶催化 ATP 的一个磷酸基团转移到 DNA 末端上,另一个是用带有32P 的 dATP 作为 DNA 合成的原料。(3)根据 DNA 分子半保留复制的特点解释含有32P 的噬菌体
3、所占比例为 2/n的原因。解析(1)根据题干信息可知,该酶能将 ATP 水解成 ADP 和磷酸基团(P),同时将 P基团转移到 DNA 末端上。因此需将32P 标记到 ATP 的 位上。(2)DNA 生物合成的原料为脱氧核苷酸。将 dATP 两个高能磷酸键都水解后的产物为 dAP(腺嘌呤脱氧核苷酸),该产物为合成 DNA 的原料。因此需将32P 标记到 dATP 的 位上。(3)一个含有32P 标记的噬菌体双链 DNA分子经半保留复制后,标记的两条单链只能分配到两个噬菌体的双链 DNA 分子中,因此在得到的n个噬菌体中只有 2 个带有标记。答案(1)(2)(3)一个含有32P 标记的噬菌体双链
4、 DNA 分子经半保留复制后,标记的两条单链只能分配到两个噬菌体的双链 DNA 分子中,因此在得到的n个噬菌体中只有 2个带有标记 1同位素标记法在高中生物学实验中的应用(1)探究光合作用中元素(原子)的转移:美国科学家鲁宾和卡门用18O 分别标记 H2O 和CO2,证明光合作用释放的氧气全部来自水。卡尔文等用14C 标记的 CO2供小球藻进行光合作用,追踪检测其放射性,探明了 CO2中的碳在光合作用中转化成有机物中碳的途径。(2)证明 DNA 是遗传物质:赫尔希和蔡斯分别用放射性同位素标记蛋白质和 DNA 的特征元素,即用32P 标记噬菌体的 DNA,用35S 标记噬菌体的蛋白质,证明 DN
5、A 是噬菌体的遗传物质。(3)研究分泌蛋白的合成和运输:用3H 标记亮氨酸,研究分泌蛋白在细胞中的合成、运输与分泌途径,证明分泌蛋白在附着于内质网上的核糖体中合成之后,按照内质网高尔基 体细胞膜的方向运输,从而证明了细胞内的各种生物膜在功能上是紧密联系的。(4)证明 DNA 分子进行半保留复制:用含有15N 标记的 NH4Cl 培养液培养大肠杆菌,让大肠杆菌繁殖几代,再将大肠杆菌转移到含14N 的普通培养液中培养,然后在不同时刻收集大肠杆菌并提取 DNA,再通过密度梯度离心来区别亲代与子代 DNA,从而证明 DNA 的复制是以半保留的方式进行的。(5)研究生长素的极性运输:证明植物生长素的极性
6、运输时,用同位素14C 标记茎形态学上端的生长素(吲哚乙酸),可在茎的形态学下端检测到放射性同位素14C,而标记茎形态学下端的生长素,在茎的形态学上端检测不到放射性同位素14C,说明植物生长素只能从形态学上端运输到形态学下端。2与荧光标记法的区别(1)常用的荧光蛋白有绿色和红色两种 绿色荧光蛋白(GFP)常用的是来源于发光水母的一种功能独特的蛋白质,蓝光或近紫外光照射,发射绿色荧光。红色荧光蛋白来源于珊瑚虫,是一种与绿色荧光蛋白同源的荧光蛋白,在紫外光的照射下可发射红色荧光。(2)人教版教材中用到的荧光标记法 必修 1P67“细胞融合实验”:这一实验很有力地证明了细胞膜的结构特点是具有一定的流
7、动性。必修 2P30“基因在染色体上的实验证据”:通过现代分子生物学技术,运用荧光标记的手段,可以很直观地观察到某一基因在染色体上的位置。1(2016全国卷)在前人进行的下列研究中,采用的核心技术相同(或相似)的一组是()证明光合作用所释放的氧气来自水 用紫外线等处理青霉菌选育高产青霉素菌株 用 T2噬菌体侵染大肠杆菌证明 DNA 是遗传物质 用甲基绿和吡罗红对细胞染色,观察核酸的分布 A B C D B 采用的是同位素标记法,其中是为两组植物分别提供 H182O 和 CO2、H2O 和 C18O2检测产生氧气的标记情况,是分别用32P 和35S 标记的噬菌体侵染大肠杆菌,检测子代噬菌体的标记
8、情况;采用的是诱变技术,采用的是混合染色技术。故采用的核心技术相同(或相似)的是和,B 项符合题意。2(2019潍坊期中)物理学和化学方法可用于生物学的研究。下列有关叙述错误的是()A沃森和克里克利用 X 射线衍射法研究并推算出了 DNA 的双螺旋结构 B科学家通过荧光标记的人、鼠细胞融合实验证明了细胞膜具有流动性 C赫尔希和蔡斯利用放射性同位素标记和离心技术证明 DNA 是遗传物质 D科学家运用同位素示踪和离心技术证实了 DNA 的半保留复制 A 在遗传物质的研究历史上,沃森和克里克以威尔金斯和其同事富兰克林提供的 DNA衍射图谱的有关数据为基础,推算出 DNA 分子呈螺旋结构。3(2019
9、成都市测试)同位素标记法是生物科学研究中常用的方法。下列叙述错误的是()A用 C 标记的 CO2供给小球藻进行光合作用可证明碳的转化途径 B将3H 标记的亮氨酸注射到胰腺腺泡细胞中可证明生物膜间有联系 C用14C 或18O 标记的噬菌体分别侵染细菌可证明 DNA 是遗传物质 D将被15N 标记的细菌转移到含14N 的培养液中可证明 DNA 的复制方式 C 用32P 或35S 标记的噬菌体分别侵染细菌可证明 DNA 是遗传物质。4(2019晋中调研)同位素标记法在遗传学的研究中发挥了重要作用。请根据所学知识回答下列问题:(1)现提供3H 标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸、尿嘧啶核糖核苷酸以及亮氨酸,若要
10、研究抗体的合成与转运,应选择_;若要验证抗体合成所需的直接模板,应选择_。(2)为探究 T2噬菌体的遗传物质,用放射性同位素标记的 T2噬菌体侵染未被标记的大肠杆菌,经短时间保温培养、搅拌离心,检测到上清液中的放射性很低。此组实验标记的元素是_,离心的目的是_ _。(3)科学家将15N 标记的 DNA 分子(15N15NDNA)放到含14N 的培养液中培养,让其复制 3 次。将亲代 DNA 和每次复制产物置于试管进行离心,结果如图。其中代表复制 2 次后的分层结果是_(填字母),理由是_ _。解析(1)抗体的化学本质是蛋白质,其基本组成单位是氨基酸,因此若要研究抗体的合成与转运,应选择3H 标
11、记的亮氨酸;抗体是蛋白质,其合成的直接模板是 mRNA,若要验证抗体合成所需的直接模板,应选择3H 标记的尿嘧啶核糖核苷酸。(2)噬菌体侵染细菌的实验分两组,一组噬菌体用35S 对其蛋白质外壳进行标记,另一组用32P 对噬菌体的核酸进行标记。噬菌体在侵染细菌时,只是把遗传物质 DNA 注入细菌,因此如果标记的是蛋白质,则上清液放射性高,沉淀物放射性很低;如果标记的是 DNA,则上清液放射性很低,沉淀物放射性高。综上所述,此组实验中标记的是 DNA,即 DNA 中的 P 元素。此实验过程中,离心的目的是让上清液中析出重量较轻的 T2噬菌体颗粒,沉淀物中留下被感染的大肠杆菌。(3)由于 DNA 分
12、子的复制是半保留复制,一个用15N 标记的 DNA 在含14N 的培养基上培养,复制 1 次后,每个 DNA分子的一条链含15N,一条链含14N,离心后对应图中的 b,复制 2 次后,产生 4 个 DNA 分子,其中含15N 和14N 的 DNA 分子为 2 个,只含14N 的 DNA 分子为 2 个,离心后对应图中的 c。答案(1)3H 标记的亮氨酸 3H 标记的尿嘧啶核糖核苷酸(2)P 让上清液中析出重 量较轻的 T2噬菌体颗粒,沉淀物中留下被感染的大肠杆菌(3)c DNA 复制方式为半保留复制,15N15NDNA 分子复制两次后,子代中 1/2 为15N14NDNA,1/2 为14N14
13、NDNA,离心结果与 c 相符 DNA 半保留复制与细胞分裂综合中的同位素标记法 (2019深圳模拟)不含放射性标记的蚕豆根尖细胞在含3H 标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸的培养基中完成一个细胞周期,然后在不含放射性标记的培养基中继续分裂至中期,其染色体的放射性标记分布情况是 ()A每条染色体中都只有一条单体被标记 B每条染色体的两条单体都被标记 C只有半数的染色体中一条单体被标记 D每条染色体的两条单体都不被标记 审题指导(1)确定亲代 DNA 分子标记情况。根据题干信息和 DNA 半保留复制的特点,可确定亲代 DNA 分子(未被标记)放入含3H 标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸的培养基中完成一个细胞周期,
14、所得子代 DNA 分子均有一条链被标记。(2)确定原料的标记情况:放入不含放射性标记的培养基培养至中期,所得子代 DNA 分子一半未被标记,一半只有一条链被标记。A 不含放射性标记的根尖细胞在含3H 标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸培养基上完成一个细胞周期后,子细胞中的核 DNA 分子都是一条链被3H 标记,另一条链未被标记;然后子细胞在不含放射性标记的培养基中继续分裂至中期,每个核 DNA 分子复制形成的两个 DNA 分子(其中一个被标记,另一个未被标记)分别位于一条染色体的两条姐妹染色单体上,A 正确。1有丝分裂与 DNA 复制的关系 如果用15N 标记细胞中的核 DNA 分子,然后将细胞放在正常
15、环境(含14N)中培养,让其进行两次有丝分裂,结果染色体中的 DNA 标记情况如图所示:这样来看,最后形成的 4 个子细胞有 3 种情况:第 1 种情况是 4 个细胞都是;第2种 情 况 是2个 细 胞 是,1个细胞是,1个细胞是;第3种 情 况 是2个 细 胞 是,2个细胞是。2减数分裂与 DNA 复制的关系 如果用15N 标记细胞中的核 DNA 分子,然后将细胞放在正常环境(含14N)中培养,让其进行减数分裂,结果染色体中的 DNA 标记情况如图所示:由图可以看出,减数分裂过程中细胞虽然连续分裂 2 次,但 DNA 只复制 1 次,所以 4 个 子细胞均为,细胞中所有 DNA 分子均呈杂合
16、状态。3解题步骤 第一步 画出含一条染色体的细胞图,下方画出该条染色体上的 1 个 DNA 分子,用竖实线表示含同位素标记 第二步 画出复制一次,分裂一次的子细胞染色体图,下方画出染色体上的 DNA 链,未被标记的新链用竖虚线表示 第三步 再画出第二次复制(分裂)后的细胞的染色体组成和 DNA 链的情况 第四步 若继续推测后期情况,可想象着丝点分裂,染色单体分开的局面,并进而推测子细胞染色体的情况 1用32P 标记玉米体细胞(含 20 条染色体)的 DNA 分子双链,再将这些细胞转入不含32P的培养基中培养,让其分裂 1 次N次。若一个细胞中的染色体总条数和被32P 标记的染色体条数分别是 4
17、0 条和 2 条,则这至少是第几次分裂的分裂期()A第 1 次 B第 2 次 C第 3 次 D第 4 次 C 由染色体总条数为 40 条可知是分裂后期,若是第 1 次有丝分裂后期,被32P 标记的染色体条数应为 40 条;若是第 2 次有丝分裂后期,被32P 标记的染色体条数应为 20 条;若是第 3 次有丝分裂后期,被32P 标记的染色体条数应为 020 条。2(2019合肥模拟)小鼠有 20 对染色体,若用3H胸腺嘧啶脱氧核苷酸标记小鼠精原细胞的染色体 DNA 分子,再在不含有标记的培养液中连续分裂 2 代,下列判断错误的是()A第一次分裂中期,含有3H 的 DNA 单链有 80 条 B在
18、形成的第 1 代子细胞中,所有染色体均含有3H C第二次分裂后期,含有3H 的染色体有 40 条 D在形成的第 2 代子细胞中,所有染色体均含有3H D DNA 复制是以亲代 DNA 分子为模板合成子代 DNA 分子的过程。DNA 复制过程是边解旋边复制;DNA 复制特点是半保留复制。第一次分裂的中期,细胞内 DNA 单链有 80 条被3H 标记,A 正确;在形成的第 1 代子细胞中,所有染色体的一条链被3H 标记,B 正确;第二次分裂的后期,细胞内有 40 条染色体被3H 标记,C 正确;在形成的第 2 代子细胞中,有一半染色体的一条链被3H 标记,有一半染色体没有被3H 标记,D 错误。3
19、(2019大兴期末测试)将果蝇精原细胞(2N8)的 DNA 分子用15N 标记后,置于含14N的培养基中培养,经过连续两次分裂后,下列推断正确的是()A若进行有丝分裂,则第二次分裂中期的细胞中有 8 条染色单体含14N B若进行有丝分裂,则两次分裂结束后含15N 的子细胞所占比例为 1/2 C若进行减数分裂,则第二次分裂中期的细胞中有 4 条染色单体含14N D若进行减数分裂,则两次分裂结束后所有子细胞的染色体均含有15N D 如果进行有丝分裂,经过一次细胞分裂后,形成的 2 个子细胞中的 DNA 分子都是15N14N,再复制一次形成的 2 个 DNA 分子分别是15N14N、14N14N,中期时 DNA 存在于 2 条染色单体上,则第二次分裂中期含14N 的染色单体有 16 条,A 错误;若进行两次有丝分裂,第一次分裂得到的子细胞中所有的染色体上 DNA 都是15N14N,第二次分裂中期时单体上的 DNA 分子分别是15N14N、14N14N,得到的子细胞中一半有标记或全部有标记,或34有标记,B 错误;若进行减数分裂,第一次分裂中期的染色体组成都是15N14N,则第二次分裂中期的细胞中有 4条染色体、8 条姐妹染色单体,每条单体都含14N,C 错误;如果进行减数分裂,形成的子细胞都有15N 染色体,D 正确。