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1、2010年版药典附录无菌年版药典附录无菌检查检查和微生物和微生物限度限度检查检查方方法增修定内容法增修定内容一：新增微生物限度检查法指导原则一：新增微生物限度检查法指导原则四、药品微生物实验室规范指导原则四、药品微生物实验室规范指导原则四、药品微生物实验室规范指导原则四、药品微生物实验室规范指导原则二：二：2010年版无菌检查法增修订内容年版无菌检查法增修订内容三：微生物限度检查增修定内容三：微生物限度检查增修定内容四：四：四：四：新增微生物限度检查法指导原则新增微生物限度检查法指导原则一、抑菌剂效力检查法指导原则一、抑菌剂效力检查法指导原则一、抑菌剂效力检查法指导原则一、抑菌剂效力检查法指导
2、原则二、药品微生物检验替代方法验证指导原则二、药品微生物检验替代方法验证指导原则二、药品微生物检验替代方法验证指导原则二、药品微生物检验替代方法验证指导原则三、微生物限度检查法应用指导原则三、微生物限度检查法应用指导原则三、微生物限度检查法应用指导原则三、微生物限度检查法应用指导原则一：药品微生物实验室规范指导原则目的目的 该指导原则用于指导药品微生物检验实验该指导原则用于指导药品微生物检验实验室的质量控制。室的质量控制。药品微生物的检验的对象具特殊性药品微生物的检验的对象具特殊性；活的生物、活的生物、分布不均匀、重现性差分布不均匀、重现性差 必须使用经验证的检测方法并严格按照药品必须使用经验
3、证的检测方法并严格按照药品微生物实验室规范要求进行试验微生物实验室规范要求进行试验n n影响试验结果的因素1人员2设施与环境n n3检验的标准与方法4设备n n5测量的溯源性抽样7样品的处理n n8检验结果准确性的控制9检验报告药品微生物实验室规范包括以下几个方面药品微生物实验室规范包括以下几个方面人员、培养基、菌种、实验室的布局和运行、人员、培养基、菌种、实验室的布局和运行、设备、文件、实验记录、结果的判断等设备、文件、实验记录、结果的判断等人的要求人的要求n n1：人是质量控制与管理的主体n n2：2010年版无菌检查法无菌检查法增加了对进行无菌检查人员的要求：必须具备微生物生物专业知识，
4、并经过无菌技术技术的培训。n n3;考试上岗问题;检验人员经过考试（理论与操作考试），经过技术负责人批准取得上岗证方可从事药品微生物学检验 培训内容培训内容n n1 1上岗前指导性培训：生物安全操作知识和消毒知上岗前指导性培训：生物安全操作知识和消毒知识，卫生要求，洁净区的使用，保洁与检测等。识，卫生要求，洁净区的使用，保洁与检测等。n n2 2上岗培训：各种有关微生物的操作技术（无菌，上岗培训：各种有关微生物的操作技术（无菌，微生物限度，效价），与各种检验标准知识，设微生物限度，效价），与各种检验标准知识，设施，设备的使用施，设备的使用n n3 3继续教育提高培训：新知识，新仪器新技术的使继
5、续教育提高培训：新知识，新仪器新技术的使用，国际国内先进的微生物学检验专业知识。用，国际国内先进的微生物学检验专业知识。n n4 4质量观念的培训：实验室的质量目标，相关计量质量观念的培训：实验室的质量目标，相关计量知识的学习知识的学习 培培养基养基培养基是微生物试验的基础，直培养基是微生物试验的基础，直培养基是微生物试验的基础，直培养基是微生物试验的基础，直接影接影接影接影 响微生物试验结果。适宜的培养基制备响微生物试验结果。适宜的培养基制备响微生物试验结果。适宜的培养基制备响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供方法、贮藏条件和质量控制试验是提供方法、贮藏条件和
6、质量控制试验是提供方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保优质培养基的保优质培养基的保优质培养基的保证。证。证。证。该指导原则该指导原则该指导原则该指导原则对培养基的制备、储存、灭对培养基的制备、储存、灭对培养基的制备、储存、灭对培养基的制备、储存、灭菌及质量控制进行了指导。菌及质量控制进行了指导。菌及质量控制进行了指导。菌及质量控制进行了指导。培养基必须具备五个条件培养基必须具备五个条件n n:1:1含有细菌生长所需的物质：如：水分、养分含有细菌生长所需的物质：如：水分、养分（氮源、碳源、矿物质）（氮源、碳源、矿物质）n n2 2适宜的酸碱性：多数为适宜的酸碱性：多数为pH7.2-7
7、.6pH7.2-7.6，有的为，有的为pH5.6-pH5.6-6.86.8（最常用的溶剂为纯化水特殊情况下用去离子（最常用的溶剂为纯化水特殊情况下用去离子水或者蒸馏水）水或者蒸馏水）n n3 3不含抑制细菌生长的物质不含抑制细菌生长的物质n n4 4 均质透明：便于观察细菌生长性状和引起培养均质透明：便于观察细菌生长性状和引起培养基的变化基的变化n n5 5严格灭菌，保证无菌。（按生产者提供或者使用严格灭菌，保证无菌。（按生产者提供或者使用者验证的参数灭菌）者验证的参数灭菌）菌 种 实验室实验室实验室实验室菌种的处理和保藏的程序应菌种的处理和保藏的程序应菌种的处理和保藏的程序应菌种的处理和保藏
8、的程序应标准标准标准标准化，化，化，化，使使使使尽可能减少菌种污染和生长特性的尽可能减少菌种污染和生长特性的尽可能减少菌种污染和生长特性的尽可能减少菌种污染和生长特性的改变。改变。改变。改变。按按按按统一操作程序制备的菌株是统一操作程序制备的菌株是统一操作程序制备的菌株是统一操作程序制备的菌株是微生物微生物微生物微生物试验结果试验结果试验结果试验结果一致性的重要保证。一致性的重要保证。一致性的重要保证。一致性的重要保证。该指导原则对菌种的来源、对菌种的来源、菌种保菌种保藏藏、菌种的传代和使用菌种的传代和使用、菌种的管菌种的管理理进行了详细的说明和指导。进行了详细的说明和指导。菌种代号的意义菌种
9、代号的意义 n n国内药品微生物检验所用的菌种代号是国内药品微生物检验所用的菌种代号是CMCCCMCC（F F）或或 CMCCCMCC（B B）CMCC CMCC 中国医学菌种保藏中心中国医学菌种保藏中心B B 代表细菌代表细菌,F ,F 代表真菌代表真菌 。大肠杆菌大肠杆菌 CMCC(B)44102CMCC(B)44102乙型副伤寒沙门杆菌乙型副伤寒沙门杆菌 CMCC(B)50094CMCC(B)50094生孢梭菌生孢梭菌 CMCC(B)64941CMCC(B)64941白色念珠菌白色念珠菌 CMCC(F)98001CMCC(F)98001 、菌种保藏的原则菌种保藏的原理菌种保藏的原理微生物
10、的菌种生理、生化特性，在人工创造的条微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造的条微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造的条微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、死亡，以减低菌
11、种的变异率。低温、干燥、缺氧、死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。、菌种的传代和使用 工作菌种的传代次数应严格控制，工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过不得超过5代防止过度的传代造成菌代防止过度的传代造成菌种变异种变异,工作菌株不可代替标准菌株工作菌株不可代替标准菌株.任何亚培养任何亚培养的形式均被认为是转的形式均被认为是转种或传代一次。实验室应对工作菌种或传代一次。实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。株的
12、特性和纯度进行确认。标准菌株标准菌株n n一般是从菌种保藏中心或专业实验室购买得到的，用符号一般是从菌种保藏中心或专业实验室购买得到的，用符号S S表示。一般可保存表示。一般可保存5 5年。年。按菌种保藏中心的要求进行恢复培养。中国普通微生物按菌种保藏中心的要求进行恢复培养。中国普通微生物菌种保藏管理中心菌种保藏管理中心(CGMCC)(CGMCC)建议的方法如下：建议的方法如下：安瓿管开封：用浸过安瓿管开封：用浸过7070酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰将安瓿管顶端加热，滴无菌水至加热的安瓿管顶端使火焰将安瓿管顶端加热，滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂，用锉刀或镊子
13、敲下已开裂的安瓿管的顶端。玻璃开裂，用锉刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。菌株恢复培养：用无菌吸管，吸取菌株恢复培养：用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml0.3-0.4ml适宜的液体适宜的液体培养基（如营养肉汤），滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻培养基（如营养肉汤），滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状，取约干菌体溶解呈悬浮状，取约0.2ml0.2ml菌体悬浮液，移植于指定菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面的琼脂斜面/平板培养基上，剩余的菌液，注入指定的液平板培养基上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（体培养基内（3-4ml3-4ml），然后在建议的温度下（一般培养温），然后在建议的温度下
14、（一般培养温度度32.532.52.52.5，181824h24h）培养。）培养。标准储备菌株标准储备菌株标准储备菌株可用于制备每月或每周一次可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株转种的工作菌株.冷冻菌株一旦解冻转种制冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后备工作菌株后,不得重新冷冻或再次使用。不得重新冷冻或再次使用。n n采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法，用于菌种的传代，。甘油冷冻管保藏法一般可保存2年；甘油冷冻管保存法甘油冷冻管保存法n n甘油冷冻管保存法适用于保存传代用菌种，一般甘油冷冻管保存法适用于保存传代用菌种，一般可保存可保存2 2年。年。将待保存用菌种接种至平板或琼脂斜面，经将
15、待保存用菌种接种至平板或琼脂斜面，经3737242448h48h培养后，用无菌接种环轻轻刮培养后，用无菌接种环轻轻刮 取菌苔，移至预先装有无菌蒸馏水的试管中，调取菌苔，移至预先装有无菌蒸馏水的试管中，调整菌液浓度，使其等同于整菌液浓度，使其等同于1 1单位麦氏比浊管。单位麦氏比浊管。向已制备好的菌悬液中加入等体积，浓度为向已制备好的菌悬液中加入等体积，浓度为20%20%的无菌甘油，得到的无菌甘油，得到10%10%甘油菌悬液。甘油菌悬液。轻轻振摇，使轻轻振摇，使10%10%甘油菌悬液充分混合，分装甘油菌悬液充分混合，分装于无菌小试管中，在于无菌小试管中，在-30-30条件下贮存。条件下贮存。工作
16、菌种工作菌种n n：工作菌株工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株n n保存于半固体内或琼脂斜面培养基中，作为工作用菌种，用符号W表示。一般可保存12个月。严格控制传代次数，工作菌种不超过五代，n n冻干菌种营养肉汤半固体琼脂或甘油水100支冰箱保存（原代）（一代）（二代）菌种的管理 严严格的程序化管理格的程序化管理 实验室必须建立菌种保存和使用文实验室必须建立菌种保存和使用文件的程序管理制度件的程序管理制度菌种的销毁菌种的销毁n n1方法：菌种销毁采用高压蒸汽灭菌：121，20分钟。2需及时销毁处理菌种：发生污染或
17、变异的菌种；超过保存期限的菌种；使用后的菌种。实验室的布局和运行 实验室布局设计的基本原则实验室布局设计的基本原则 具有检测所需的适宜、充分的设施条具有检测所需的适宜、充分的设施条件件。合理的布局与设计，具有独立的实验合理的布局与设计，具有独立的实验室、室、辅助区域各区域应有明确标识。辅助区域各区域应有明确标识。建立控制程序和标准操作规程建立控制程序和标准操作规程。建立合理的控制程序和标准操作规范 对对对对进出洁净区域的人和物建立控制程序进出洁净区域的人和物建立控制程序进出洁净区域的人和物建立控制程序进出洁净区域的人和物建立控制程序和标准操作和标准操作和标准操作和标准操作规程。规程。规程。规程
18、。消毒剂的配制应按标准操作规程配制，消毒剂的配制应按标准操作规程配制，消毒剂的配制应按标准操作规程配制，消毒剂的配制应按标准操作规程配制，对所用的消毒剂种类应定期更换，使用的对所用的消毒剂种类应定期更换，使用的对所用的消毒剂种类应定期更换，使用的对所用的消毒剂种类应定期更换，使用的消毒剂应无菌。消毒剂应无菌。消毒剂应无菌。消毒剂应无菌。建立检样品传递、储存、处置和识别管理建立检样品传递、储存、处置和识别管理建立检样品传递、储存、处置和识别管理建立检样品传递、储存、处置和识别管理程序程序程序程序。建立带菌培养物溢出的意外事件制定处理建立带菌培养物溢出的意外事件制定处理建立带菌培养物溢出的意外事件
19、制定处理建立带菌培养物溢出的意外事件制定处理规程规程规程规程。建立合理的取样控制程序和标准操作规范建立合理的取样控制程序和标准操作规范建立合理的取样控制程序和标准操作规范建立合理的取样控制程序和标准操作规范。设设设设 备备备备 实验室应配备与检验能力和工作量相适应实验室应配备与检验能力和工作量相适应实验室应配备与检验能力和工作量相适应实验室应配备与检验能力和工作量相适应的仪器设备，其类型、测量范围和准确度的仪器设备，其类型、测量范围和准确度的仪器设备，其类型、测量范围和准确度的仪器设备，其类型、测量范围和准确度等级应满足检验所采用标准的要求，设备等级应满足检验所采用标准的要求，设备等级应满足检
20、验所采用标准的要求，设备等级应满足检验所采用标准的要求，设备的安装和布局应便于操作，易于维护、清的安装和布局应便于操作，易于维护、清的安装和布局应便于操作，易于维护、清的安装和布局应便于操作，易于维护、清洁和校准。使用的消毒剂应无菌。洁和校准。使用的消毒剂应无菌。洁和校准。使用的消毒剂应无菌。洁和校准。使用的消毒剂应无菌。建立相应的操作和维护和保养的标准操作建立相应的操作和维护和保养的标准操作建立相应的操作和维护和保养的标准操作建立相应的操作和维护和保养的标准操作规程规程规程规程。文件文件文文文文件件件件应应应应当当当当充充充充分分分分表表表表明明明明试试试试验验验验是是是是在在在在实实实实验
21、验验验室室室室里里里里按按按按可可可可控控控控的的的的检检检检查查查查法法法法进进进进行行行行的的的的，一一一一般般般般包包包包括括括括以以以以下下下下方方方方面面面面：质质质质量量量量管管管管理理理理文文文文件件件件、程程程程序序序序文文文文件件件件、技技技技术术术术操作操作操作操作文件文件文件文件。实验记录的保存 实验结果可靠性的依赖于试验严格实验结果可靠性的依赖于试验严格按照标准操作规程进行，包括正确按照标准操作规程进行，包括正确的试验操作、实验记录、的试验操作、实验记录、(所有关键所有关键的实验细节的实验细节)，以便确认数据的完整，以便确认数据的完整性。性。结果的判断由于微生物试验的特
22、殊性，在实验由于微生物试验的特殊性，在实验结果分析时，应从各个可能的方面去结果分析时，应从各个可能的方面去考虑，不但要假设被污染，而且要考考虑，不但要假设被污染，而且要考虑微生物在原料、辅料或试验环境中虑微生物在原料、辅料或试验环境中存活的可能性。此外，还应考虑微生存活的可能性。此外，还应考虑微生物生长特性。物生长特性。如如果依据分析调查结果发现试验果依据分析调查结果发现试验有错误而判实验结果无效，那么这种有错误而判实验结果无效，那么这种情况必须记录。实验室也必须认可复情况必须记录。实验室也必须认可复试程序，如果需要，可按相关规定重试程序，如果需要，可按相关规定重新抽样，但抽样方法不能影响不符
23、合新抽样，但抽样方法不能影响不符合规定结果的分析调查。规定结果的分析调查。二：二：2010年版无菌检查法增修订年版无菌检查法增修订内容内容 一、进一步确定了无菌检查法的定义一、进一步确定了无菌检查法的定义一、进一步确定了无菌检查法的定义一、进一步确定了无菌检查法的定义：无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的的的的一种方法。一种方法
24、。一种方法。一种方法。二、二、二、二、进一步明确了无菌检查保障进一步明确了无菌检查保障进一步明确了无菌检查保障进一步明确了无菌检查保障 1 1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染再污染再污染再污染 ，但采用的措施不得影响微生物的生但采用的措施不得影响微生物的生但采用的措施不得影响微生物的生但采用的措施不得影响微生物的生长。长。长。长。2 2、无菌检查、无菌检查、无菌检查、无菌检查要进行环境检测要进行环境检测要进行环境检测要进行环境检测增加了增加了增加了增加了日常检验日常检验日常检
25、验日常检验还需进行环境检测还需进行环境检测还需进行环境检测还需进行环境检测。2 2、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。并经过无菌技术的培训。并经过无菌技术的培训。并经过无菌技术的培训。三三、培养基培养基增修订内容增修订内容删去删去删去删去硫硫硫硫乙醇酸乙醇酸乙醇酸乙醇酸盐流体培养基和改良马丁盐流体培养基和改良马丁盐流体培养基和改良马丁盐流体培养基和改良马丁培养基的使用范围培养基的使用范围培养基的使用范围培养基的使用范围(用于培养好氧菌、用于培养好氧菌、用于培
26、养好氧菌、用于培养好氧菌、厌氧菌及用于培养真菌厌氧菌及用于培养真菌厌氧菌及用于培养真菌厌氧菌及用于培养真菌)删去删去删去删去选择性培养基使用的表面活性剂种选择性培养基使用的表面活性剂种选择性培养基使用的表面活性剂种选择性培养基使用的表面活性剂种类类类类对氨基苯甲酸、聚山梨酯对氨基苯甲酸、聚山梨酯对氨基苯甲酸、聚山梨酯对氨基苯甲酸、聚山梨酯-80-80等等等等。理由理由理由理由 经验证试验经验证试验经验证试验经验证试验选择适宜的选择适宜的选择适宜的选择适宜的中和剂、中和剂、中和剂、中和剂、灭活剂和表面活性剂灭活剂和表面活性剂灭活剂和表面活性剂灭活剂和表面活性剂 培养基适用性检查增修订内容3、培养
27、基灵敏度试验 删除 菌悬液制备中黑曲霉菌悬液的制备“（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）”修改为“用适宜的方法吸出孢子悬液”。增加在稀释液0.9%无菌氯化钠溶液中加入0.05v/v）聚山梨酯80。四、试验稀释液、冲洗液增修订为四、试验稀释液、冲洗液增修订为四、试验稀释液、冲洗液增修订为四、试验稀释液、冲洗液增修订为 增加增加增加增加根据供试品的特性，可选用其根据供试品的特性，可选用其根据供试品的特性，可选用其根据供试品的特性，可选用其他他他他经验证过经验证过经验证过经验证过的适宜的溶液作为稀释液、的适宜的溶液作为稀释液、的适宜的溶液作为稀释液、的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液
28、。冲洗液。冲洗液。冲洗液。试验中使用的中和剂、灭活剂和试验中使用的中和剂、灭活剂和试验中使用的中和剂、灭活剂和试验中使用的中和剂、灭活剂和表面活性剂除证明其有效性外还应证表面活性剂除证明其有效性外还应证表面活性剂除证明其有效性外还应证表面活性剂除证明其有效性外还应证明对污染的微生物明对污染的微生物明对污染的微生物明对污染的微生物无影响无影响无影响无影响修改修改修改修改为无毒为无毒为无毒为无毒性性性性。五、方法验证试验增修订内容试验试验菌株菌株 删除删除铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌增加增加大肠埃希菌及大肠埃希菌菌液大肠埃希菌及大肠埃希菌菌液的制的制备备(同金黄色葡萄球菌同金黄色葡萄球菌)。薄膜过滤法
29、薄膜过滤法 供试品用量供试品用量 将规定将规定量量供试品供试品 按薄膜过滤法过滤按薄膜过滤法过滤 修改为修改为取每种培养基规定接种的供试品总取每种培养基规定接种的供试品总量。量。六、供试品的无菌检查增修订内容检验量检验量检验量检验量 直接接种法直接接种法直接接种法直接接种法除另有规定外，每份培养除另有规定外，每份培养除另有规定外，每份培养除另有规定外，每份培养基接种的供试品量按表基接种的供试品量按表基接种的供试品量按表基接种的供试品量按表2 2、表、表、表、表3 3规定规定规定规定删除删除删除删除采用直接接种法时的规定。采用直接接种法时的规定。采用直接接种法时的规定。采用直接接种法时的规定。阴
30、性对照阴性对照阴性对照阴性对照 无菌试验中若使用表面活性剂等应证无菌试验中若使用表面活性剂等应证无菌试验中若使用表面活性剂等应证无菌试验中若使用表面活性剂等应证明其有效性且对微生物生长无影响明其有效性且对微生物生长无影响明其有效性且对微生物生长无影响明其有效性且对微生物生长无影响修修修修改为改为改为改为无毒性。无毒性。无毒性。无毒性。薄膜过滤法薄膜过滤法薄膜过滤法薄膜过滤法 增增增增加加加加了了了了抗抗抗抗生生生生素素素素供供供供试试试试品品品品滤滤滤滤膜膜膜膜选选选选择择择择的的的的指指指指导导导导应选择应选择应选择应选择低吸附的滤器及滤膜。低吸附的滤器及滤膜。低吸附的滤器及滤膜。低吸附的滤
31、器及滤膜。若若若若需需需需要要要要冲冲冲冲洗洗洗洗滤滤滤滤膜膜膜膜,每每每每张张张张滤滤滤滤膜膜膜膜每每每每次次次次冲冲冲冲洗洗洗洗量量量量一一一一般般般般为为为为100ml100ml，且且且且冲冲冲冲洗洗洗洗量量量量不不不不宜宜宜宜过过过过大大大大修修修修改改改改为为为为总冲洗量不得超过总冲洗量不得超过总冲洗量不得超过总冲洗量不得超过1000ml 1000ml。水溶液供试品水溶液供试品水溶液供试品水溶液供试品 含抑菌成分需用适量的冲洗液冲洗膜含抑菌成分需用适量的冲洗液冲洗膜含抑菌成分需用适量的冲洗液冲洗膜含抑菌成分需用适量的冲洗液冲洗膜修改修改修改修改为为为为所用的冲洗量所用的冲洗量所用的冲
32、洗量所用的冲洗量、冲洗方法同方法验证冲洗方法同方法验证冲洗方法同方法验证冲洗方法同方法验证试验试验试验试验.装有药物的注射器供试品装有药物的注射器供试品装有药物的注射器供试品装有药物的注射器供试品 取取取取规规规规定定定定量量量量，删删删删去去去去装装装装上上上上无无无无菌菌菌菌针针针针头头头头.修修修修改改改改为为为为排排排排出出出出注注注注射射射射器器器器中中中中的的的的内内内内容容容容物物物物至至至至无无无无菌菌菌菌容容容容器器器器中中中中，若若若若需需需需要要要要可可可可吸吸吸吸入入入入稀稀稀稀释释释释液液液液或或或或标标标标签签签签所所所所示示示示的的的的溶溶溶溶剂剂剂剂溶溶溶溶解解
33、解解，或或或或非非非非水水水水溶溶溶溶性性性性制制制制剂剂剂剂供供供供试试试试品品品品项项项项下下下下方方方方法法法法操作。操作。操作。操作。无菌气雾剂供试品无菌气雾剂供试品无菌气雾剂供试品无菌气雾剂供试品 供供供供试试试试液液液液的的的的制制制制备备备备将将将将供供供供试试试试品品品品置置置置冰冰冰冰室室室室修修修修改改改改为为为为置至少置至少置至少置至少 -20-20的冷冻室约的冷冻室约的冷冻室约的冷冻室约1 1小时。小时。小时。小时。直接接种法直接接种法删除删除内酰胺类内酰胺类或或磺氨类供磺氨类供试品。试品。表表表表1 1、表表表表2 2、表表表表3 3增修订增修订增修订增修订表表表表1
34、 1（第（第3 3列）列）接种每种培养基改为接种每种培养基改为接种每种培养基改为接种每种培养基改为所需所需所需所需的最少检的最少检的最少检的最少检验数量验数量验数量验数量 表表表表2 2 （表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少（表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少（表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少（表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量检验数量检验数量检验数量修改为修改为修改为修改为液体制剂最少检验量及上市抽液体制剂最少检验量及上市抽液体制剂最少检验量及上市抽液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量验样品的最少检验数量验样品的最少检验数量验样品的最少检验数量第二列每支样品接入每
35、管培养基的最少样品量第二列每支样品接入每管培养基的最少样品量第二列每支样品接入每管培养基的最少样品量第二列每支样品接入每管培养基的最少样品量修改为修改为修改为修改为每支供试品接入每管培养基的最少样品每支供试品接入每管培养基的最少样品每支供试品接入每管培养基的最少样品每支供试品接入每管培养基的最少样品量量量量第三列最少检验数量（瓶或支）第三列最少检验数量（瓶或支）第三列最少检验数量（瓶或支）第三列最少检验数量（瓶或支）1 1 全量全量 0 0 修改为修改为修改为修改为供试品最少检验数量（瓶或支）供试品最少检验数量（瓶或支）供试品最少检验数量（瓶或支）供试品最少检验数量（瓶或支）0 0 注注注注
36、每种培养基各接种支供试品每种培养基各接种支供试品每种培养基各接种支供试品每种培养基各接种支供试品修改为修改为修改为修改为若供若供若供若供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检验数量加倍那么表中的最少检验数量加倍那么表中的最少检验数量加倍那么表中的最少检验数量加倍。表表表表3 3（表题）将上市抽验样品（固体制剂）的（表题）将上市抽验样品（固体制剂）的（表题）将上市抽验样品（固体制剂）的（表题）将上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量最少检验量最少检验量最少检验量
37、修改为修改为修改为修改为固体制剂最少检验量及上市抽验样品的固体制剂最少检验量及上市抽验样品的固体制剂最少检验量及上市抽验样品的固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量最少检验数量最少检验数量最少检验数量”第三第三第三第三列最少检验数量、列最少检验数量、列最少检验数量、列最少检验数量、1 1 全全量量 0 0 修改为修改为修改为修改为供试品最少检验数量（瓶或支）供试品最少检验数量（瓶或支）供试品最少检验数量（瓶或支）供试品最少检验数量（瓶或支）0 0 注注注注 每种培养基接种支培养基每种培养基接种支培养基每种培养基接种支培养基每种培养基接种支培养基修改为修改为修改为修改为若若若若供试品每个
38、容器内的装量不够接种两种培养基，供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检验数量加倍。那么表中的最少检验数量加倍。那么表中的最少检验数量加倍。那么表中的最少检验数量加倍。三：微生物微生物限度检查增修定内容限度检查增修定内容 修改内容 1 1、培养条件、培养条件、培养条件、培养条件 控制菌培养温度控制菌培养温度控制菌培养温度控制菌培养温度35353737修改为修改为修改为修改为30303535(细菌、控制菌培细菌、控制菌培细菌、控制菌培细菌、控制菌培养养养养温度相同温度相同温度相同温度相同)。修改
39、理由修改理由修改理由修改理由 此此此此温度适于所有中温菌生长，温度适于所有中温菌生长，温度适于所有中温菌生长，温度适于所有中温菌生长，一些高温菌在该温度下也一些高温菌在该温度下也一些高温菌在该温度下也一些高温菌在该温度下也可以生长可以生长可以生长可以生长。增修订内容 2 2、结果报告、结果报告、结果报告、结果报告 特殊品种可以最小包装特殊品种可以最小包装特殊品种可以最小包装特殊品种可以最小包装单单单单位报告位报告位报告位报告 特殊品种包括特殊品种包括特殊品种包括特殊品种包括 药典药典药典药典规定规定规定规定微量包装微量包装微量包装微量包装药品的检验量药品的检验量药品的检验量药品的检验量可以酌可
40、以酌可以酌可以酌减。减。减。减。还还还还有一些有一些有一些有一些贵重贵重贵重贵重药品也应考虑药品也应考虑药品也应考虑药品也应考虑检验量。检验量。检验量。检验量。3、检验量增修订内容 中药膜剂检验量中药膜剂检验量50 cm2 修改为修改为100cm2。沙门菌检验量沙门菌检验量修改为修改为检验量为检验量为20 g或或20ml并注明（其中并注明（其中10 g用于阳性用于阳性对照）。对照）。4、供试液的制备增修订内容 供试品检查时使用表面活性剂应证明供试品检查时使用表面活性剂应证明其其对对 微微生物生物生长和存活无影响生长和存活无影响修改为修改为无毒性无毒性。供试液的制备若需加温时，可采用其供试液的制
41、备若需加温时，可采用其他经他经 验验证的方法，但应均匀加热，且温度不证的方法，但应均匀加热，且温度不应应超超 过过45。新增贴剂供试液制备新增贴剂供试液制备 供试液供试液的制备的制备 经验证方法制备成供试液在无菌环境经验证方法制备成供试液在无菌环境进行。进行。避免粘贴面粘合在一起。避免粘贴面粘合在一起。置于含有置于含有表面活性剂（如聚山梨酯表面活性剂（如聚山梨酯80或或卵磷脂）的稀释剂中，制成供试液。卵磷脂）的稀释剂中，制成供试液。充分振摇。充分振摇。也可采用以其他适宜的方法制备成供试也可采用以其他适宜的方法制备成供试液。液。具抑菌活性的供试品增修订内容 删除删除应应消除供试液的抑菌活性消除供
42、试液的抑菌活性修改修改为为当供试品具有抑菌活性时，应尽量当供试品具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便、快速的方法，应避免选择操作简便、快速的方法，应避免损伤供试品中污染的微生物。在供试损伤供试品中污染的微生物。在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选品溶液性状允许的情况下，应尽量选用用薄膜过滤法。薄膜过滤法。离心沉淀集菌法 两次离心修改两次离心修改两次离心修改两次离心修改为一次离心；为一次离心；为一次离心；为一次离心；500500转转转转/分离心，分离心，分离心，分离心，不超过不超过不超过不超过3 3分钟，取全部上清液用于检分钟，取全部上清液用于检分钟，取全部上清液用于检分钟，取全部上清液用于检查
43、。查。查。查。影响因素影响因素影响因素影响因素 供试品供试品供试品供试品 污染菌特性污染菌特性污染菌特性污染菌特性 适用范围适用范围适用范围适用范围 仅使用于微生物限度检查供试液的制备。仅使用于微生物限度检查供试液的制备。仅使用于微生物限度检查供试液的制备。仅使用于微生物限度检查供试液的制备。尽量避免使用，不可使用快速离心。尽量避免使用，不可使用快速离心。尽量避免使用，不可使用快速离心。尽量避免使用，不可使用快速离心。细菌、霉菌及酵母菌计数增修订内容 新增新增新增新增计数培养基的适用性检查计数培养基的适用性检查计数培养基的适用性检查计数培养基的适用性检查菌种菌种菌种菌种 大肠埃希菌（大肠埃希菌
44、（大肠埃希菌（大肠埃希菌（Escherichia coliEscherichia coli）CMCCCMCC（B B）4410244102 金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（Staphylococcus Staphylococcus aureusaureus）CMCCCMCC（B B）26 00326 003 枯草芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌（Bacillus Bacillus subtilissubtilis）CMCCCMCC（B B）63 50163 501 白色念珠菌（白色念珠菌（白色念珠菌（白色念珠菌（Candida Candida
45、albicansalbicans）CMCCCMCC（F F）98 00198 001 黑曲霉黑曲霉黑曲霉黑曲霉（AspergillusAspergillus nigerniger）CMCCCMCC（F F）98 00398 003 增加了增加了菌悬液的制备及保存条件。菌悬液的制备及保存条件。菌悬液制备后在室温下放置应在菌悬液制备后在室温下放置应在2小时内使用，若保存在小时内使用，若保存在28可以在可以在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在存在 28，在验证过的贮存期内，在验证过的贮存期内使用，每株试验菌平行制备使用，每株试验菌平行制备2个平皿，个平皿，混匀，凝固
46、，按规定条件培养计数，混匀，凝固，按规定条件培养计数，同时用相应的对照培养基替代被检培同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。养基进行上述试验。增加了增加了对照培养。对照培养。2.2.新新新新增增增增常见干扰物的中和剂常见干扰物的中和剂常见干扰物的中和剂常见干扰物的中和剂和和和和灭活方灭活方灭活方灭活方法法法法 参见参见参见参见 表表表表1 1常见干扰物的中和剂或灭常见干扰物的中和剂或灭常见干扰物的中和剂或灭常见干扰物的中和剂或灭活方法活方法活方法活方法 6、供试品检查增修订内容、供试品检查增修订内容 平皿法平皿法 删去删去采用平皿法进行菌数采用平皿法进行菌数测定时，连续测定时，连续
47、23个稀释级的供试液。个稀释级的供试液。修改为修改为按计数方法的验证试验确认按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备。的程序进行供试液制备。培养时间培养时间修改内容修改内容 除另有规定外，细菌培养除另有规定外，细菌培养48小小时时改为改为3天天，霉菌、酵母菌培养，霉菌、酵母菌培养72小时小时改为改为 5天天，必要时，可适当必要时，可适当延长培养时间至延长培养时间至7天进行菌落计数天进行菌落计数并报告并报告。菌数报告规则增修订内容 若同稀释级两个平板的菌落平均若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于数不小于15，则两个平板的菌落数不，则两个平板的菌落数不能相差能相差1倍或以上。倍或以上。细菌细菌
48、、酵母菌和、酵母菌和霉菌霉菌平均平均菌落数菌落数在在30300、30100之间之间的稀释级的稀释级修修改为改为选取菌落数选取菌落数小于小于300cfu和和100cfu的稀释级的稀释级作为菌数报告的依据。作为菌数报告的依据。薄膜过滤法增修订内容 新增内容新增内容 采用其它直径的滤膜，冲采用其它直径的滤膜，冲洗量应相应的进行调整洗量应相应的进行调整（如（如使用膜直使用膜直径增大冲洗液量也应相应增加，可保径增大冲洗液量也应相应增加，可保证冲洗液覆盖整个滤膜）。证冲洗液覆盖整个滤膜）。删去删去每片滤膜的总过滤量不宜过大，每片滤膜的总过滤量不宜过大，修改为修改为总冲洗量不得超过总冲洗量不得超过1000m
49、l。7、控制菌检查增修订、控制菌检查增修订增增加加控控制制菌菌检检查查用用培培养养基基的的适适用用性性检查检查；检检查查项项目目包包括括促促生生长长、抑抑制制及及指指示示能能力力检查检查参照表参照表2 新增培养基新增培养基新增培养基新增培养基适用性检查适用性检查适用性检查适用性检查方法方法方法方法液体液体液体液体培养基培养基培养基培养基促生长能力检查促生长能力检查促生长能力检查促生长能力检查。固体固体固体固体培养基培养基培养基培养基促生长能力检查促生长能力检查促生长能力检查促生长能力检查。培养基抑制能力检查培养基抑制能力检查培养基抑制能力检查培养基抑制能力检查。液体液体液体液体培养基培养基培养
50、基培养基指示能力检查指示能力检查指示能力检查指示能力检查。固体固体固体固体培养基培养基培养基培养基指示能力检查。指示能力检查。指示能力检查。指示能力检查。试验结果与对照培养基比较试验结果与对照培养基比较试验结果与对照培养基比较试验结果与对照培养基比较控制菌检查用培养基的适用性检查控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查查查查控制菌检查控制菌检查控制菌检查控制菌检查 培养基培养基培养基培养基 特性特性特性特性 试验菌株试验菌株试验菌株试验菌株大肠埃希菌大肠埃希