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1、关于色谱联用技术第一页，本课件共有72页色谱的定性分析色谱的定性分析气相色谱气相色谱-质谱联用技术质谱联用技术气相色谱气相色谱-傅里叶红外光谱联用技术傅里叶红外光谱联用技术液相色谱液相色谱-质谱联用技术质谱联用技术液相色谱液相色谱-傅里叶变换红外光谱联用技术傅里叶变换红外光谱联用技术第二页，本课件共有72页气相色谱气相色谱-质谱联用技术质谱联用技术关键技术问题关键技术问题仪器接口仪器接口除去色谱柱后流出物的载气，保留组分除去色谱柱后流出物的载气，保留组分协调色谱仪和质谱仪之间的压力和流量协调色谱仪和质谱仪之间的压力和流量(抽真空抽真空)质谱扫描速度质谱扫描速度满足气相色谱出峰速度快满足气相色谱
2、出峰速度快第三页，本课件共有72页第四页，本课件共有72页第五页，本课件共有72页进样系统进样系统:将分析样品导入离子源的装置将分析样品导入离子源的装置;包括包括:直接进样直接进样,GC,LC及及 接口接口,参考物或靶气气参考物或靶气气体进样等体进样等 离子源离子源:使被测样品分子离子化成为带电离使被测样品分子离子化成为带电离子的装置子的装置,并对离子进行并对离子进行 加速使其进入加速使其进入分析器分析器 质量分析器质量分析器:将离子按不同质荷比将离子按不同质荷比(m/z)大小分离大小分离的分析部分的分析部分;离子通过分析器后离子通过分析器后,按不同质按不同质荷比分开荷比分开,并将相同的质荷比
3、离子聚焦在一并将相同的质荷比离子聚焦在一起起,从而形成质谱。从而形成质谱。检测分析器检测分析器:接收离子束并将电信号放大的接收离子束并将电信号放大的装置装置 控制及数据处理系统控制及数据处理系统:处理并给出分析结果处理并给出分析结果,现代计算机还可以控制现代计算机还可以控制 质谱仪进行各项质谱仪进行各项工作工作 真空系统真空系统:利用机械泵利用机械泵,扩散泵或分子泵等扩散泵或分子泵等,抽抽取离子源和分析器的空气并达到高真空取离子源和分析器的空气并达到高真空,使使离子从离子源到达接收器离子从离子源到达接收器 质谱仪的组成及其主要作用质谱仪的组成及其主要作用 第六页，本课件共有72页基本原理基本原
4、理磁聚焦质谱磁聚焦质谱四级杆质谱四级杆质谱飞行时间质谱飞行时间质谱第七页，本课件共有72页磁聚焦质谱磁聚焦质谱如果在离子源被电离的样品分子质量为如果在离子源被电离的样品分子质量为m，电荷为，电荷为 z(e)，(S1)加速电压为加速电压为V，（电场作用能量为：，（电场作用能量为：zV；则离子被加速的速度；则离子被加速的速度为为v，获得动能为：，获得动能为：1/2mv2。1/2mv2=zV (1)受到磁场（磁场强度受到磁场（磁场强度B）中磁力的作用，沿磁场曲线半径）中磁力的作用，沿磁场曲线半径R的轨道发生偏转，在做曲线运动时，此离子受到离心力作用，的轨道发生偏转，在做曲线运动时，此离子受到离心力作
5、用，即即mv2/R。同时，该力与磁力（向心力）。同时，该力与磁力（向心力）zvB 达到相当时，此达到相当时，此离子才能通过磁场，进入检测系统被记录。离子才能通过磁场，进入检测系统被记录。mv2/R=zvB (2)第八页，本课件共有72页一、单聚焦磁质谱一、单聚焦磁质谱离子源内：离子源内：磁场中：向心力：磁场中：向心力：zeV=(1/2)mv2离心力：离心力：zevB=(mv2)/rmz:电荷数，电荷数，V：加速电压，：加速电压，m：离子质量：离子质量B：磁场强度，：磁场强度，rm：运动的曲率半径：运动的曲率半径不同质荷比离子的偏转半径不同不同质荷比离子的偏转半径不同V:有有8000v和和100
6、00vm/z=(ermB2)/(2V)磁场的作用：磁场的作用：1.质量色散质量色散2.方向聚焦方向聚焦第九页，本课件共有72页第十页，本课件共有72页发展最快：毛细管气相色谱与四极杆台式质谱联用发展最快：毛细管气相色谱与四极杆台式质谱联用结构简单、体积小、扫描速度快、灵敏度和分辨率相对小，结构简单、体积小、扫描速度快、灵敏度和分辨率相对小，但能满足一般实验室要求但能满足一般实验室要求通过加在四极杆上的交变电压，改变电压和频率进行扫描。从通过加在四极杆上的交变电压，改变电压和频率进行扫描。从而允许一定质量（速度）的离子通过四极场到达接受器（是电而允许一定质量（速度）的离子通过四极场到达接受器（是
7、电场扫描）。场扫描）。四极杆台式质谱四极杆台式质谱第十一页，本课件共有72页通过加在四极杆上的交变电压，改变电压和频率进行通过加在四极杆上的交变电压，改变电压和频率进行扫描。从而允许一定质量（速度）的离子通过四极场扫描。从而允许一定质量（速度）的离子通过四极场到达接受器（是电场扫描）。到达接受器（是电场扫描）。m/z=2E/v2其中：其中：E=电压（离子动能），电压（离子动能），v=离子速度离子速度四极（型）质谱四极（型）质谱优点优点扫描速度快，价格便宜，体积小，目前扫描速度快，价格便宜，体积小，目前已开发出台式仪器被广泛使用。已开发出台式仪器被广泛使用。质量范围窄，分辨率有限（目前，还质量范
8、围窄，分辨率有限（目前，还不能测定高分辨）不能测定高分辨）缺点缺点第十二页，本课件共有72页+第十三页，本课件共有72页利用相同能量的带电离子，由于质量的差异而具有不同速度的原利用相同能量的带电离子，由于质量的差异而具有不同速度的原理，实现不同质量的离子以不同时间通过相同的漂移距离（领域）理，实现不同质量的离子以不同时间通过相同的漂移距离（领域）到达接受器。到达接受器。飞行时间质谱飞行时间质谱第十四页，本课件共有72页利用相同能量的带电离子，由于质量的差异而具有不利用相同能量的带电离子，由于质量的差异而具有不同速度的原理，实现不同质量的离子以不同时间通过同速度的原理，实现不同质量的离子以不同时
9、间通过相同的漂移距离（领域）到达接受器。相同的漂移距离（领域）到达接受器。m/z=2E/v2,v=d/t代入左式得到代入左式得到m/z=Kt2(k=2E/d2)(d：飞行距离；：飞行距离；t：飞行时间：飞行时间)飞行时间质谱仪飞行时间质谱仪优点优点扫描速度快，灵敏度高，质量范围宽，扫描速度快，灵敏度高，质量范围宽，结构简单，造价低廉等结构简单，造价低廉等 缺点缺点分辨率相对低。但是，现在已经提分辨率相对低。但是，现在已经提高到高到10000以上分辨率以上分辨率 第十五页，本课件共有72页Flight TubeDetectorIon SourceWhat is Time of Flight(TO
10、F)?The lighter ions strike the detector before the heavier ions.This“time of flight”can be converted to mass 4-25 kV第十六页，本课件共有72页质谱分析的主要电离技术及其应用范围：质谱分析的主要电离技术及其应用范围：EI-MS:高挥发性、一般分子量高挥发性、一般分子量1,000 Da的化合物的化合物CI-MS:高挥发性、一般分子量高挥发性、一般分子量1,000 Da的化合物的化合物FAB-MS:热不稳定、难挥发性、中等极性，分子量热不稳定、难挥发性、中等极性，分子量 3,000 D
11、a的化合物的化合物ESI-MS:热不稳定、中至高极性，可检测到数十热不稳定、中至高极性，可检测到数十万万Da分子量分子量 的化合物，混合物，此外（包括的化合物，混合物，此外（包括APCI-MS，相对弱极性分子）真正实现了，相对弱极性分子）真正实现了LC-MS技术。技术。MALDI-(Tof)MS:主要用于蛋白质等生物大分子的测定主要用于蛋白质等生物大分子的测定（可检测到近百万（可检测到近百万Da分子量分子量）。）。第十七页，本课件共有72页EICIFABESIMALDI第十八页，本课件共有72页电子轰击电离方法（电子轰击电离方法（EI）是通过具有一定能量的（轰）是通过具有一定能量的（轰击）电子
12、直接作用于被气化的样品分子，使其电离的击）电子直接作用于被气化的样品分子，使其电离的离子化技术；离子化技术；分别实现样品的气化与离子化的典型方法，也是应用分别实现样品的气化与离子化的典型方法，也是应用最长久的经典方式。最长久的经典方式。由于首先对被测样品在进样系统中的玻璃管或金属由于首先对被测样品在进样系统中的玻璃管或金属管中加热气化，同时在一定能量的电子轰击下实现管中加热气化，同时在一定能量的电子轰击下实现电离，因此电离，因此EI技术属于技术属于硬硬电离方法。电离方法。EI法（法（Electron Impact Ionization）第十九页，本课件共有72页M+e-M z+(z+1)e-(
13、z 1)(1)M+e-M-(2)第二十页，本课件共有72页h技术成熟，离子源结构简单技术成熟，离子源结构简单；h峰重现性好，具有标准数据及图谱库、峰重现性好，具有标准数据及图谱库、适用于检索；适用于检索；h离子化效率高，碎片离子多，提供一定的结构信息离子化效率高，碎片离子多，提供一定的结构信息缺点缺点（应用范围比较窄）应用范围比较窄）h不适合极性大、热不稳定性化合物；不适合极性大、热不稳定性化合物；h分子量有限，一般分子量有限，一般1,000 Da。第二十一页，本课件共有72页CI法亦是一种样品的汽化与离子化分别实施的电离法典型法亦是一种样品的汽化与离子化分别实施的电离法典型它也不适合对易热分
14、解的化合物，但是，因为要利用离子它也不适合对易热分解的化合物，但是，因为要利用离子分子反应来实现离子化，因此是分子反应来实现离子化，因此是软电离软电离法。法。是其它软电离法，如是其它软电离法，如FAB、MALDI、APCI、TSP等的等的基础，同时是气相离子化学的主要技术。基础，同时是气相离子化学的主要技术。在在CI离子源中，首先用电子轰击导入的反应气体，使其离子化。离子源中，首先用电子轰击导入的反应气体，使其离子化。化学电离法（化学电离法（CI,Chemical Ionization）第二十二页，本课件共有72页由于离子源中充满反应气体，而且相对为高压（由于离子源中充满反应气体，而且相对为高
15、压（1数数Torr,即即102级级Pa），因此发生多次离子），因此发生多次离子分子碰撞，分子碰撞，通过交换电荷发生离子通过交换电荷发生离子分子反应，还与过量的反应气体分子反应，还与过量的反应气体发生发生二次二次离子等。离子等。B+e-B+2e-(1)(电子电离电子电离)B+B (B+H)+(B-H)(2)（氢转移）（氢转移）(B-H)+or(B-H)-(3)（多次反应）（多次反应）b-or b-(4)（碎片离子）（碎片离子）B+e-B-(5)第二十三页，本课件共有72页第二十四页，本课件共有72页概念概念快原子轰击电离法是，用高速原子（离子）枪射快原子轰击电离法是，用高速原子（离子）枪射出的出
16、的数数kV的高速中性原子束（的高速中性原子束（Ar,XeorCs+离子）对离子）对溶解在底物中的样品溶液进行轰击，产生溶解在底物中的样品溶液进行轰击，产生M+H+orM+等离子的电离法。等离子的电离法。FAB法的关键是选择适当的法的关键是选择适当的（基质）底物（基质）底物，从从而而,可以进行从低极性到较高极性的范围较广的有机可以进行从低极性到较高极性的范围较广的有机化合物测定，是目前应用比较广的电离技术。化合物测定，是目前应用比较广的电离技术。快原子轰击法快原子轰击法(FAB,Fast Atom Bombardment)第二十五页，本课件共有72页 当高速中性原子当高速中性原子(离子）轰击底物
17、溶液后，在发生离子）轰击底物溶液后，在发生爆发性爆发性汽汽化的同时，发生分子间冲突，离子化的同时，发生分子间冲突，离子分子反应，从而，产生分子反应，从而，产生（解离性）氢质子转移反应（解离性）氢质子转移反应11和和22式及式及33式，以及与（电式，以及与（电子轰击法相似）的轰击离子化反应子轰击法相似）的轰击离子化反应44等等.(M+B)+AfastM+H+B-H-+A1(M+B)+AfastM-H-+B+H+A2M+B+H+M+H+B3(M+B)+AfastM+B+A+e-4M：样品分子：样品分子B：底物分子：底物分子Afast:高速原子（离子）高速原子（离子）第二十六页，本课件共有72页 产
18、生的分子离子产生的分子离子一般，常见的一般，常见的M+H+离子离子根据底物脱氢以及分解反应产生的根据底物脱氢以及分解反应产生的M-H+容易提供电子的芳烃化合物产生容易提供电子的芳烃化合物产生M+甾类化合物、氨基霉素等还产生甾类化合物、氨基霉素等还产生M+NH4+糖甙、聚醚等一般可（产生）观察到糖甙、聚醚等一般可（产生）观察到M+Na+第二十七页，本课件共有72页大气压电离技术（atmospheric pressure ionization,API）顾名思义是一种常压电离技术，它不需要真空API技术包括电喷雾（ESI）和大气压化学电离（atmospheric pressure chemical
19、ionization,APCI）两种离子化技术电喷雾离子化法电喷雾离子化法（ESI，Electrospray Ionization）第二十八页，本课件共有72页第二十九页，本课件共有72页样品溶液由泵输送从毛细管流出的瞬间，在雾样品溶液由泵输送从毛细管流出的瞬间，在雾化气（化气（N2）、）、强电场（强电场（25kV）和近于大气压的干燥气体（）和近于大气压的干燥气体（N2）的作用下，）的作用下，溶液在毛细管端口发生喷雾，产生高电荷的液体微粒（液溶液在毛细管端口发生喷雾，产生高电荷的液体微粒（液滴），滴），所以称之为所以称之为电喷雾电喷雾随着液滴中溶剂的挥发液滴逐渐缩小，当电荷间的斥力克服了液随着
20、液滴中溶剂的挥发液滴逐渐缩小，当电荷间的斥力克服了液滴的内聚力时，发生滴的内聚力时，发生“库仑爆炸库仑爆炸”（Coulomicexplosion）。较小的液滴继续蒸发，电场增强，离子向表面移动，表）。较小的液滴继续蒸发，电场增强，离子向表面移动，表面的离子密度越来越大，最终导致离子从表面蒸发，产生单面的离子密度越来越大，最终导致离子从表面蒸发，产生单电荷或电荷或多电荷离子多电荷离子多电荷离子多电荷离子第三十页，本课件共有72页它是（目前）最软的电离技术，通常只产生分子离子它是（目前）最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，峰，因此可以测定不稳定的极性化合物，并可直接测定混合物。因此可以测定不稳定
21、的极性化合物，并可直接测定混合物。多电荷离子多电荷离子多电荷离子多电荷离子的形成，可以分析生物大分子，如蛋白质和寡核的形成，可以分析生物大分子，如蛋白质和寡核苷酸等。苷酸等。通过调节离子源参数（改变取样锥体电压），可以控制离子通过调节离子源参数（改变取样锥体电压），可以控制离子在离子源内的断裂，从而给出结构信息（源内在离子源内的断裂，从而给出结构信息（源内CID）。）。l l主要特点主要特点第三十一页，本课件共有72页FAB-MSFAB-MS谱谱谱谱ESI-MSESI-MS谱谱谱谱第三十二页，本课件共有72页基质辅助激光解吸离子化法基质辅助激光解吸离子化法MALDIMALDI（Matrix-A
22、ssisted Laser Desorption IonizationMatrix-Assisted Laser Desorption Ionization）第三十三页，本课件共有72页试试样样溶溶解解或或悬悬浮浮于于基基质质中中，激激光光束束辐辐射到基质和试样分子上。射到基质和试样分子上。基基质质吸吸收收激激光光束束能能量量后后汽汽化化，部部分分试试样分子伴随基质的汽化而解吸。样分子伴随基质的汽化而解吸。基基质质吸吸收收大大部部分分激激光光能能量量，减减少少了了试试样样分分子子被被激激光光能能量量破破坏坏及及过过度度电电离离成成碎片离子。碎片离子。激光：固体氮激光，紫外光激光：固体氮激光，紫
23、外光 波长：波长：337nm 功率：功率：106108W/cm2 脉冲时间：脉冲时间：10-610-9秒秒第三十四页，本课件共有72页气质联用的条件气质联用的条件柱条件柱条件1-2mL/min，最大，最大5mL/min内径内径0.25-0.32mm扫描条件扫描条件选定质量范围选定质量范围选择离子检测选择离子检测第三十五页，本课件共有72页总离子流图总离子流图质量碎片图质量碎片图气质联用给出的信息第三十六页，本课件共有72页第三十七页，本课件共有72页气质联用质谱谱库及检索简介气质联用质谱谱库及检索简介电子轰击质谱电子轰击质谱70eV检索检索标准电离条件标准电离条件按特定程序进行比较按特定程序进
24、行比较相似度由高到低列出化合物相似度由高到低列出化合物第三十八页，本课件共有72页NISTNIST/EPA/NIHWiley库库农药库、药物库、挥发油库农药库、药物库、挥发油库常用的质谱谱库：常用的质谱谱库：检索方式：检索方式：在线检索在线检索离线检索离线检索第三十九页，本课件共有72页电子轰击离子源，电子轰击离子源，70eV谱库中的为纯物质谱库中的为纯物质(本底扣除功能本底扣除功能)选择合适的质谱图选择合适的质谱图相似度结合其他信息如基峰、分子离子峰及杂原相似度结合其他信息如基峰、分子离子峰及杂原子等子等用已知标准物质对照定性用已知标准物质对照定性检索条件：检索条件：第四十页，本课件共有72
25、页气象色谱气象色谱-傅里叶红外光谱联用傅里叶红外光谱联用傅里叶红外光谱仪傅里叶红外光谱仪光源光源Micheison干涉仪干涉仪探测器探测器计算机计算机第四十一页，本课件共有72页高分辨率高分辨率波数精度高波数精度高扫描速度快扫描速度快光谱范围宽光谱范围宽灵敏度高灵敏度高FTIS的特点：的特点：第四十二页，本课件共有72页色谱柱色谱柱选择宽口径，厚液膜的涂璧开管柱选择宽口径，厚液膜的涂璧开管柱柱前气化柱前气化光管体积与色谱峰体积相匹配光管体积与色谱峰体积相匹配光管温度控制在光管温度控制在200以下以下GC-FTIR的的GC条件：条件：第四十三页，本课件共有72页应用应用复杂有机混合物定性、定量分
26、析的有效手段复杂有机混合物定性、定量分析的有效手段在环保、医药、化工、石油工业、食品、在环保、医药、化工、石油工业、食品、香料和生化等领域香料和生化等领域第四十四页，本课件共有72页液相质谱联用技术液相质谱联用技术LC-MS联用存在的技术难题联用存在的技术难题压力匹配压力匹配流量匹配流量匹配气化问题气化问题第四十五页，本课件共有72页LC-MS接口接口直接液体导入直接液体导入移动带式接口移动带式接口热喷雾接口热喷雾接口粒子束接口粒子束接口电喷雾电离接口电喷雾电离接口第四十六页，本课件共有72页LC-MS分析条件的选择：分析条件的选择：接口的选择接口的选择正负离子模式的选择正负离子模式的选择流动
27、相的选择流动相的选择温度的选择温度的选择第四十七页，本课件共有72页第四十八页，本课件共有72页第四十九页，本课件共有72页第五十页，本课件共有72页第五十一页，本课件共有72页第五十二页，本课件共有72页第五十三页，本课件共有72页液相色谱液相色谱-傅里叶红外光谱联用傅里叶红外光谱联用多数化合物的红外光谱吸收较弱，要求样品量大多数化合物的红外光谱吸收较弱，要求样品量大HPLC的流动相具有红外吸收的流动相具有红外吸收第五十四页，本课件共有72页流动池接口：流动池接口：平板式投射平板式投射柱式投射流动池柱式投射流动池柱内柱内ATR流动池流动池第五十五页，本课件共有72页第五十六页，本课件共有72
28、页第第10章章 液相色谱样品预处理液相色谱样品预处理色谱分析的全过程色谱分析的全过程样品的样品的采集采集采集采集取样点的选择和样品收集，样品的运输和储存取样点的选择和样品收集，样品的运输和储存样品的样品的制备制备制备制备待测组分与干扰组分分离、转化成可分析形态待测组分与干扰组分分离、转化成可分析形态色谱分析色谱分析数据处理和结果的表达数据处理和结果的表达第五十七页，本课件共有72页液相色谱的要求液相色谱的要求可溶解可溶解不会发或难挥发的样品不会发或难挥发的样品过滤过滤样品不适合直接分析样品不适合直接分析含量低含有干扰基质,粘滞流体、胶体溶液、固体第五十八页，本课件共有72页混悬液：混悬液：滤过
29、滤过离心离心沉降沉降液体：液体：固相萃取固相萃取液液萃取液液萃取稀释稀释蒸发蒸发蒸馏蒸馏微渗析微渗析冷冻干燥冷冻干燥第五十九页，本课件共有72页固体：固体：固液萃取固液萃取索氏提取索氏提取强制流动浸出强制流动浸出均匀化均匀化超声超声溶解溶解加速溶剂萃取加速溶剂萃取自动索氏提取自动索氏提取超临界流体萃取超临界流体萃取微波辅助提取微波辅助提取热提取热提取第六十页，本课件共有72页第六十一页，本课件共有72页第六十二页，本课件共有72页在水中有较低的溶解度在水中有较低的溶解度具有挥发性具有挥发性与与HPLC检测技术相容检测技术相容具有极性并可形成氢键，以利于提高有机相中被测物的回具有极性并可形成氢键
30、，以利于提高有机相中被测物的回收率收率纯度高，尽可能降低对样品的污染纯度高，尽可能降低对样品的污染液液萃取中溶剂的选择：液液萃取中溶剂的选择：第六十三页，本课件共有72页粒径粒径40m m柱压低，塔板数少，分离效率低，一次性使用柱压低，塔板数少，分离效率低，一次性使用正相吸附剂正相吸附剂硅酸镁，氨基、氰基、双醇基硅胶，氧化铝硅酸镁，氨基、氰基、双醇基硅胶，氧化铝反相吸附剂反相吸附剂键合相硅胶，芳环氰基键合相硅胶，芳环氰基离子交换吸附剂离子交换吸附剂阳离子：苯磺酸，丙磺酸，丁磺酸阳离子：苯磺酸，丙磺酸，丁磺酸阴离子：三甲基丙基胺，氨基，二乙基丙基胺阴离子：三甲基丙基胺，氨基，二乙基丙基胺固相萃取
31、技术：固相萃取技术：SPE第六十四页，本课件共有72页聚合二乙烯苯聚合二乙烯苯-N-乙烯吡咯烷酮乙烯吡咯烷酮亲水和亲酯免疫亲和吸附剂免疫亲和吸附剂抗体-琼脂糖或硅胶分子印迹型吸附剂分子印迹型吸附剂生物基质第六十五页，本课件共有72页洗脱剂洗脱剂传质速率正相吸附剂：非极性有机溶剂反相吸附剂：极性有机溶剂离子：缓冲液第六十六页，本课件共有72页固相萃取装置：SPE柱第六十七页，本课件共有72页第六十八页，本课件共有72页固相微萃取技术固相微萃取技术(solidphasemicroextractionSPME)涂有固定相的熔融石英纤维来吸附、富集样品涂有固定相的熔融石英纤维来吸附、富集样品克服了克服
32、了SPE的操作繁琐、空白值高、吸附柱易堵的操作繁琐、空白值高、吸附柱易堵塞等缺陷塞等缺陷第六十九页，本课件共有72页有机材料有机材料纤维素类、聚酰胺类、芳香杂环类、聚砜类、聚纤维素类、聚酰胺类、芳香杂环类、聚砜类、聚烯烃类、桂橡胶类、含氟聚合物烯烃类、桂橡胶类、含氟聚合物无机材料无机材料陶瓷、硼酸盐玻璃、金属陶瓷、硼酸盐玻璃、金属天然物质改性或再生而制成的天然膜天然物质改性或再生而制成的天然膜膜分离技术：膜分离技术：第七十页，本课件共有72页柱前衍生化柱前衍生化柱后衍生化柱后衍生化紫外衍生化紫外衍生化苯甲酰化2,4-二硝基氟代苯苯基异硫氰酸酯苯基磺酰氯有机酸的酯化荧光衍生化荧光衍生化衍生化技术：衍生化技术：第七十一页，本课件共有72页感感谢谢大大家家观观看看第七十二页，本课件共有72页