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1、关于细菌与病毒的病原学检查法第一页，本课件共有15页第一节第一节 细菌感染的微生物学检查法细菌感染的微生物学检查法一、细菌学诊断一、细菌学诊断l形态学检查形态学检查1.普通光学显微镜检查法：普通光学显微镜检查法：2.暗视野显微镜检查法：检查活菌、暗视野显微镜检查法：检查活菌、螺旋体及其动力螺旋体及其动力3.荧光显微镜检查法：荧光显微镜检查法：l病原菌的分离培养病原菌的分离培养l生化试验生化试验l血清学鉴定血清学鉴定:玻片凝集试验玻片凝集试验l动物实验：毒力、致病性动物实验：毒力、致病性l毒力检测：毒力检测：LD50、ID50，毒素，毒素l药物敏感试验：纸片扩散法药物敏感试验：纸片扩散法第二页，
2、本课件共有15页二、检测病原菌成分二、检测病原菌成分l抗原检测：抗原检测：凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光技术凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光技术l核酸检测：核酸检测：1.核酸杂交技术核酸杂交技术:Southern印迹杂交、印迹杂交、Northern印迹杂交、印迹杂交、原位杂交原位杂交2.PCR技术技术3.基因芯片基因芯片4.16rRNA基因序列分析：编码基因序列分析：编码rRNA，保守区、可变区，保守区、可变区第三页，本课件共有15页三、抗体的检测（血清学诊断）三、抗体的检测（血清学诊断）u凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集u沉淀试验
3、：环状、絮状、双向、对流电泳沉淀试验：环状、絮状、双向、对流电泳u补体结合试验：补体结合试验：u酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISA）：）：取双份血清，抗体效价比早期高取双份血清，抗体效价比早期高4倍以上有意义。倍以上有意义。第四页，本课件共有15页第二节第二节 病毒感染的微生物学检查法病毒感染的微生物学检查法第五页，本课件共有15页一、形态学检查一、形态学检查1.电子显微镜检查电子显微镜检查l直接镜检法：直接镜检法：107颗粒颗粒/ml，电镜观察病毒颗粒，电镜观察病毒颗粒的形态和结构的形态和结构l免疫电镜法（免疫电镜法（IEM）：）：标本标本+特异性抗体特异性抗体 病毒颗粒聚集病毒
4、颗粒聚集 电镜电镜观察观察轮状病毒的粪便、轮状病毒的粪便、HAV、HBV的血清、疱疹病的血清、疱疹病毒的疱疹液，可早期诊断。毒的疱疹液，可早期诊断。2.光学显微镜检查光学显微镜检查痘病毒、观察包涵体、痘病毒、观察包涵体、CPE第六页，本课件共有15页二、病毒分离培养的方法二、病毒分离培养的方法1、动物接种、动物接种l 常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴等；常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴等；l接种途径：皮下、皮内、脑内、腹腔、静脉等接种途径：皮下、皮内、脑内、腹腔、静脉等接种；接种；l 观察：动物出现感染症状，取病变组织进一步检观察：动物出现感染症状，取病变组织进一步检查查第七页，本课件
5、共有15页2、鸡胚培养、鸡胚培养：孵化：孵化914天的鸡胚天的鸡胚l 接接种种途途径径有有：绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜、羊羊膜膜腔腔、尿尿囊囊腔腔、卵黄囊。卵黄囊。l鉴定：血凝和血凝抑制试验鉴定：血凝和血凝抑制试验尿囊腔接种尿囊腔接种羊膜腔接种羊膜腔接种第八页，本课件共有15页卵黄囊接种卵黄囊接种绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种第九页，本课件共有15页3、组织培养、组织培养器官培养、器官培养、组织培养、细胞培养组织培养、细胞培养细胞培养：细胞培养：l单层细胞培养、悬浮细胞培养；单层细胞培养、悬浮细胞培养；l原代细胞培养原代细胞培养：由新鲜组织制备：由新鲜组织制备l二二倍倍体体细细胞胞：二二倍倍体体性性质
6、质，传传4050代代，人人胚胚肺肺成纤维细胞成纤维细胞l传传代代细细胞胞系系：由由突突变变的的二二倍倍体体细细胞胞或或肿肿瘤瘤细细胞胞建建立的，立的，HeLa细胞细胞第十页，本课件共有15页三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标u细胞的变化：细胞的变化：CPEu红细胞吸附（红细胞吸附（HAd）：）：u红细胞凝集：红细胞凝集：u病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒,Vero细胞。细胞。u中中和和试试验验（NT）：是是病病毒毒在在活活体体内内或或细细胞胞培培养养中中被被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验特异性抗体中和而失去感染性的一种试验
7、u空空斑斑形形成成试试验验：蚀蚀斑斑形形成成单单位位（PFU），感感染染性性病病毒的滴度用毒的滴度用PFU/ml表示。表示。四、病毒成分的检测四、病毒成分的检测病毒抗原的检测：病毒抗原的检测：HIV和和HBV抗原抗原病毒核酸的检测病毒核酸的检测第十一页，本课件共有15页 A B CA：未感染的成纤维细胞。：未感染的成纤维细胞。B：单纯疱疹病毒感染后使细胞变圆。：单纯疱疹病毒感染后使细胞变圆。C：呼吸道合胞病毒感染后出现细胞融合。：呼吸道合胞病毒感染后出现细胞融合。第十二页，本课件共有15页五、病毒抗体的检测：五、病毒抗体的检测：l中和试验：中和试验：阳阳性性：可可能能以以前前有有过过隐隐性性感
8、感染染，用用于于流流行病学调查。行病学调查。l补体结合试验：补体结合试验：用用已已知知病病毒毒的的可可溶溶性性抗抗原原检检测测病病人人血血清清中中有有无无相相应应抗抗体体，作作为为近近期期感感染染的的指标。指标。第十三页，本课件共有15页l血凝抑制试验血凝抑制试验病毒病毒+红细胞红细胞 血凝现象血凝现象病毒病毒+抗体抗体+红细胞红细胞 血凝现象消失血凝现象消失用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行病用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行病学调查及鉴定病毒的型和亚型。学调查及鉴定病毒的型和亚型。lELISA法：法：HSV、CMV、EB病毒等病毒等l蛋白印迹技术：用已知病毒蛋白检测未知蛋白印迹技术：用已知病毒蛋白检测未知病毒病毒第十四页，本课件共有15页01.03.2023感感谢谢大大家家观观看看第十五页，本课件共有15页