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1、尿液蛋白尿液蛋白质检验一一尿液蛋白质检验Urine Protein Analysis黄 辉 3 3教学目标了解蛋白尿的定义一一理解蛋白尿形成的原因和机制二二掌握尿液蛋白质检查的检测原理、方法学评价、质量保证及临床意义三三4 4教学内容蛋白尿的定义一一蛋白尿形成的原因和机制二二尿液蛋白质的检验三三尿液蛋白质检验的临床意义四四5 5一、蛋白尿的定义肾小球的滤过肾小管与集合管的重吸收肾小管的分泌正常人尿液中蛋白质的含量很少！6 6一、蛋白尿的定义 健康人尿液蛋白质含量很少，当尿液蛋白质超过 150mg24h-1或超过 100mgL-1时,蛋白质定性试验为 阳 性 称 为 蛋白尿(proteinuri
2、a)。7 7二、蛋白尿形成的原因和机制肾性蛋白尿renal proteinuria肾小球性蛋白尿glomerular proteinuria混 合 性 蛋 白 尿mixed proteinuria肾小管性蛋白尿tubular proteinuria8 8二、蛋白尿形成的原因和机制肾前性蛋白尿prerenal proteinuria溢出性蛋白尿overflow proteinuria9 9二、蛋白尿形成的原因和机制肾后性蛋白尿postrenal proteinuria组织性蛋白尿histic proteinuria1010二、蛋白尿形成的原因和机制肾小球性蛋白尿：蛋白尿的选择性选择性蛋白尿：肾小
3、球损伤程度较轻，以分子量49万中相对分子量的白蛋白为主。非选择性蛋白尿：肾小球损伤程度较重，尿液中大分子量蛋白质和中分子量蛋白质同时存在。1111二、蛋白尿形成的原因和机制蛋白尿种类病变部位尿液蛋白质特点肾小球性蛋白尿肾小管性蛋白尿混合性蛋白尿溢出性蛋白尿组织性蛋白尿1212二、蛋白尿形成的原因和机制蛋白尿种类病变部位尿液蛋白质特点肾小球性蛋白尿肾小球中分子量蛋白、大分子量蛋白质增加肾小管性蛋白尿肾小管小分子量蛋白质增加为主混合性蛋白尿 肾小球、肾小管肾小球、肾小管受损程度不同而有一定的差异溢出性蛋白尿肾前性小分子量蛋白质组织性蛋白尿肾小管、泌尿组织T-H蛋白质增加为主1313三、尿液蛋白质的
4、检验 尿液中有无蛋白质？尿液中蛋白质的量？尿液中有哪一类蛋白质？1414三、尿液蛋白质的检验蛋白质理化性质蛋白质的两性电离和等电点蛋白质的变性蛋白质的沉淀蛋白质的呈色反应1515尿液蛋白质定性加热乙酸法磺基水杨酸法干化学试带法三、尿液蛋白质的检验1616三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：加热乙酸法蛋白质加热加热蛋白质变性蛋白质沉淀稀乙酸稀乙酸1717三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：加热乙酸法u方法经典而准确，为蛋白定性确证实验；u特异性强，干扰因素少；u灵敏度较低，为150mg/L；upH值、盐离子浓度对实验结果的影响。1818三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：磺基水杨酸法蛋白质酸性条
5、件酸性条件氨基酸阳离子蛋白盐沉淀磺酸根离子磺酸根离子1919三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：磺基水杨酸法u操作简便、反应灵敏、结果显示快；u检测灵敏度高，为50mg/L；u造影剂、青霉素钾盐等可以造成假阳性。2020三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：干化学试带法蛋白质酸碱指示剂复合物+酸碱指示剂电离发生颜色改变尼龙膜层：防止大分子物质对反应污染。碘酸盐层：破坏维生素C等干扰物质。试剂层：与尿中所检测化学物质发生反应。支持层：塑料片，起支持作用。试带组成尿液蛋白质的检验尿干化学分析仪工作原理示意图机械系统光学系统电路系统2323三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：干化学试带法u操作简便、快
6、速、易于标准化；u对球蛋白、本周蛋白的敏感度低；u不同类型试带灵敏度有一定的区别，在70100mg/L。2424三、尿液蛋白质的检验?如何选择这些定性方法？尿液蛋白质定性2525三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性实验方法操作性灵敏度实验干扰因素加热乙酸法较复杂150mgL-1尿液中盐浓度磺基水杨酸法简便50mgL-1药物及造影剂干化学试带法简便100mgL-1对球蛋白不敏感2626三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性采用干化学法或磺基水杨酸法进行尿蛋白初查。加热乙酸法作为尿蛋白定性确证实验。当不同定性实验方法结果不一致时如何处理？2727三、尿液蛋白质的检验1.尿液中存在的蛋白质为球蛋白。加强与
7、临床医师的沟通非常必要！磺基水杨酸法阳性，干化学试带法为阴性2.蛋白质含量介于两种方法灵敏度之间。3.尿液中含有青霉素或者造影剂等物质。2828三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定量双 缩 脲 法比 浊 法染料结合法需要对尿液标本进行浓缩处理！2929方 法原 理 双缩脲法蛋白质与碱性铜溶液作用，形成紫色缩合物。比浊法酸性条件下，生物碱类试剂与蛋白质结合沉淀。染料结合法染料与蛋白质结合后最大吸收峰发生漂移。三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定量3030三、尿液蛋白质的检验?如何选择这些定量方法？方 法方法优缺点双 缩 脲 法蛋白质测定经典方法，但灵敏度较低比 浊 法操作简便，线性范围窄，影响因素多染料
8、结合法显色稳定，容易对比色器皿造成污染尿液蛋白质定量3131三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定量1.根据实验室条件选择合适的定量方法。2.卫生部临检中心推荐双缩脲法和丽春红S法。3.加强尿液蛋白质定量的质量控制非常必要！3232尿液蛋白质分类SDS-PAGESDS-PAGE凝胶电泳双向凝胶电泳 三、尿液蛋白质的检验3333三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质分类：SDS-PAGE凝胶电泳 SDS与蛋白质结合，消除了蛋白质分子中的电荷差异，再通过聚丙烯酰胺的分子筛作用，将蛋白质按分子量大小相互分离。3434三、尿液蛋白质的检验尿液标本葡聚糖、PEG等SDS-PAGE凝胶电泳染色、光密度扫描36361 2
9、 3 4AlbAlb小小分分子子量量蛋蛋白白大大分分子子量量蛋蛋白白1 1 肾小球性蛋白尿肾小球性蛋白尿2 2 肾小管性蛋白尿肾小管性蛋白尿3 3 生理性蛋白尿生理性蛋白尿4 4 混合性蛋白尿混合性蛋白尿三、尿液蛋白质的检验3737三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质分类：双向凝胶电泳 蛋白组学的重要技术，第一向基于蛋白质的等电点不同进行分离，第二向则按蛋白质分子量的不同进行分离。3939三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质分类1.SDS-PAGE凝胶电泳用于对尿液蛋白质进行分类。2.双向凝胶电泳主要用于科学研究。4040三、尿液蛋白质的检验4141三、尿液蛋白质的检验质量保证u分析前质量控制；u分析中质
10、量控制：坚持室内质控、遵守SOP操作规程、注意实验过程中的影响因素；u分析后质量控制：完善的报告审核制度，结果不符合时及时分析原因。4242u生理性蛋白尿u病理性蛋白尿四、尿液蛋白质检验的临床意义肾前性蛋白尿肾性蛋白尿肾后性蛋白尿4343u功能性蛋白尿（functional proteinuria）u体位性蛋白尿(postural proteinuria)u偶然性蛋白尿(accidental proteinuria)四、尿液蛋白质检验的临床意义生理性蛋白尿4444病理性蛋白尿肾小球性蛋白尿肾小管性蛋白尿混合性蛋白尿溢出性蛋白尿组织性蛋白尿四、尿液蛋白质检验的临床意义4545 患者，男，68岁，因浮肿、无尿入院。入院前因上呼吸道感染多次使用庆大霉素和复方新诺明而出现浮肿，尿量进行性减少。体格检查：眼睑浮肿，双下肢可凹性水肿。1.初步诊断为什么疾病？2.要明确诊断需要哪些进一步的实验室检查？病例急性肾小管坏死4646课堂小结尿液标本蛋白质定性干化学试带法干化学试带法磺基水杨酸法磺基水杨酸法蛋白质定量染料结合法染料结合法比浊法比浊法蛋白质分类4747思考题自主设计实验加热乙酸法干化学试带法磺基水杨酸法1-+2+-+3-+合成三种人工尿液，要求：谢谢！