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1、会计学1微生物菌种复壮微生物菌种复壮(fzhung)与保藏与保藏第一页，共22页。第一节第一节 菌种的退化菌种的退化(tuhu)与复壮与复壮n n一、菌种退化的定义一、菌种退化的定义n n生产菌种或选育过程中筛选出生产菌种或选育过程中筛选出来的较优良菌株，由于进行移来的较优良菌株，由于进行移接传代或保藏之后，群体中某接传代或保藏之后，群体中某些生理特征和形态特征逐渐减些生理特征和形态特征逐渐减退或完全丧失退或完全丧失(sngsh)的现象。的现象。第2页/共22页第二页，共22页。n n二、菌种退化的原因二、菌种退化的原因n n(一一)基因突变基因突变n n(二二)连续连续(linx)移代移代n
2、 n(三三)培养和保藏条件培养和保藏条件的影响的影响第3页/共22页第三页，共22页。n n(一一)基因突变基因突变n n1.基因突变导致基因突变导致(dozh)菌种退化菌种退化n n2.质粒脱落导致质粒脱落导致(dozh)菌种退化菌种退化第4页/共22页第四页，共22页。n n(二二)连续连续(linx)移代移代第5页/共22页第五页，共22页。n n(三三)培养和保藏条件的影响培养和保藏条件的影响n n不良培养条件如营养成分、温度不良培养条件如营养成分、温度湿度、湿度、pH值、通气量等和保藏值、通气量等和保藏条件如营养、含水量、温度、氧条件如营养、含水量、温度、氧气等，不仅会诱发低产基因型
3、菌气等，不仅会诱发低产基因型菌株的出现，而且会造成低产基因株的出现，而且会造成低产基因和高产基因细胞的数量比发生变和高产基因细胞的数量比发生变化。化。n n培养基条件影响不同类型细胞或培养基条件影响不同类型细胞或细胞核的数量细胞核的数量n n培养基也会影响菌种形态特征和培养基也会影响菌种形态特征和培养特征培养特征n n不良的环境不良的环境(hunjng)，如温度、，如温度、湿度、湿度、pH值、氧气等都会不同值、氧气等都会不同程度的引起菌种退化。程度的引起菌种退化。第6页/共22页第六页，共22页。n n三、菌种退化的防止三、菌种退化的防止n n1.尽量减少传代：减少自发尽量减少传代：减少自发突
4、变的几率。突变的几率。n n2.菌种经常纯化：菌种经常纯化：n n3.创造良好培养条件：适合创造良好培养条件：适合原种的生长。原种的生长。n n4.用单核细胞移植传代：孢用单核细胞移植传代：孢子。子。n n5.采用有效的菌种保藏采用有效的菌种保藏(bocng)方法：数量性状。方法：数量性状。第7页/共22页第七页，共22页。n n四、菌种的复壮及其方法四、菌种的复壮及其方法四、菌种的复壮及其方法四、菌种的复壮及其方法n n(一一一一)菌种复壮的原理菌种复壮的原理菌种复壮的原理菌种复壮的原理n n人们通过人工选择法分离筛选出那些原有优良性状的个人们通过人工选择法分离筛选出那些原有优良性状的个人们
5、通过人工选择法分离筛选出那些原有优良性状的个人们通过人工选择法分离筛选出那些原有优良性状的个体，使菌种获得纯化，这一过程即复壮。体，使菌种获得纯化，这一过程即复壮。体，使菌种获得纯化，这一过程即复壮。体，使菌种获得纯化，这一过程即复壮。n n“狭义复壮狭义复壮狭义复壮狭义复壮”：在菌种已发生退化的情况下，通过纯化：在菌种已发生退化的情况下，通过纯化：在菌种已发生退化的情况下，通过纯化：在菌种已发生退化的情况下，通过纯化分离和测定生产性能等方法，从退化群体中找出少数尚分离和测定生产性能等方法，从退化群体中找出少数尚分离和测定生产性能等方法，从退化群体中找出少数尚分离和测定生产性能等方法，从退化群
6、体中找出少数尚未衰退的个体，进一步繁殖，以达到恢复该菌种原有典未衰退的个体，进一步繁殖，以达到恢复该菌种原有典未衰退的个体，进一步繁殖，以达到恢复该菌种原有典未衰退的个体，进一步繁殖，以达到恢复该菌种原有典型性状的一种消极措施。型性状的一种消极措施。型性状的一种消极措施。型性状的一种消极措施。n n“广义复壮广义复壮广义复壮广义复壮”：在菌种的生产性能尚未退化前就经常有：在菌种的生产性能尚未退化前就经常有：在菌种的生产性能尚未退化前就经常有：在菌种的生产性能尚未退化前就经常有意识地进行纯种分离与生产性能的测定工作意识地进行纯种分离与生产性能的测定工作意识地进行纯种分离与生产性能的测定工作意识地
7、进行纯种分离与生产性能的测定工作(gngzu)(gngzu)，以，以，以，以保持菌种稳定的生产性状，甚至使其逐步提高的一种积保持菌种稳定的生产性状，甚至使其逐步提高的一种积保持菌种稳定的生产性状，甚至使其逐步提高的一种积保持菌种稳定的生产性状，甚至使其逐步提高的一种积极措施。极措施。极措施。极措施。第8页/共22页第八页，共22页。n n(二二)菌种复壮的主要方法菌种复壮的主要方法n n1.纯种分离纯种分离n n2.淘汰法：低温处理淘汰法：低温处理(chl)n n3.宿主体内复壮法：寄生性微宿主体内复壮法：寄生性微生物生物第9页/共22页第九页，共22页。第二节第二节 工业工业(gngy)微生
8、微生物菌种的保藏物菌种的保藏n n一、菌种保藏一、菌种保藏n n1.定义：在广泛收集实验室和生定义：在广泛收集实验室和生产菌种、菌株的基础上，将它们产菌种、菌株的基础上，将它们妥善保藏，使之达到不死、不衰、妥善保藏，使之达到不死、不衰、不污染以便于研究、交换和使用不污染以便于研究、交换和使用的目的。的目的。n n2.菌种保藏方法的共同特点菌种保藏方法的共同特点n n(1)挑选典型菌种的优良纯种，挑选典型菌种的优良纯种，最好采用休眠体；最好采用休眠体；n n(2)创造一个适合长期休眠的环创造一个适合长期休眠的环境条件，如干燥、低温、缺氧、境条件，如干燥、低温、缺氧、避光避光(b un)、缺乏营养
9、以及、缺乏营养以及添加保护剂或酸度调节剂等。添加保护剂或酸度调节剂等。第10页/共22页第十页，共22页。n n3.常用常用(chn yn)的菌的菌种保藏方法种保藏方法n n(1)斜面保藏方法斜面保藏方法n n(2)液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法n n(3)干燥保藏法干燥保藏法n n(4)冷冻干燥保藏法冷冻干燥保藏法n n(5)真空干燥法真空干燥法n n(6)液氮超低温保藏法液氮超低温保藏法n n(7)液相保藏法液相保藏法第11页/共22页第十一页，共22页。n n(1)斜面保藏方法斜面保藏方法n n主要影响因素：主要影响因素：n nA.菌种保藏培养基菌种保藏培养基n na.营养成分贫乏，氮源略
10、多，而营养成分贫乏，氮源略多，而糖类少；糖类少；n nb.培养基交替：保藏斜面在传代培养基交替：保藏斜面在传代过程中，营养贫乏和丰富培养基过程中，营养贫乏和丰富培养基交替使用，有利于保持菌种的优交替使用，有利于保持菌种的优良特性；良特性；n nc.碳、氮源：配制斜面保藏培养基碳、氮源：配制斜面保藏培养基时，要选择那些不易引起菌种回时，要选择那些不易引起菌种回复突变的碳、氮源；复突变的碳、氮源；n nd.斜面保藏培养基最好用植物等斜面保藏培养基最好用植物等天然天然(tinrn)有机物浸出汁配制，有机物浸出汁配制，有利于保持菌种活性。有利于保持菌种活性。n nB.培养条件培养条件第12页/共22页
11、第十二页，共22页。n n优点优点优点优点n n简便有效，特别适合于非长期保藏的菌种以及不能采简便有效，特别适合于非长期保藏的菌种以及不能采简便有效，特别适合于非长期保藏的菌种以及不能采简便有效，特别适合于非长期保藏的菌种以及不能采用低温干燥方法保藏的菌种。用低温干燥方法保藏的菌种。用低温干燥方法保藏的菌种。用低温干燥方法保藏的菌种。n n缺点缺点缺点缺点n nA.A.存在自发突变：由于斜面含有营养和水分，菌种生存在自发突变：由于斜面含有营养和水分，菌种生存在自发突变：由于斜面含有营养和水分，菌种生存在自发突变：由于斜面含有营养和水分，菌种生长繁殖长繁殖长繁殖长繁殖(fnzh)(fnzh)未完
12、全停止，代谢活动仍微弱进行。未完全停止，代谢活动仍微弱进行。未完全停止，代谢活动仍微弱进行。未完全停止，代谢活动仍微弱进行。n nB.B.移植代数多：比其他保藏方法多，易发生变异和引移植代数多：比其他保藏方法多，易发生变异和引移植代数多：比其他保藏方法多，易发生变异和引移植代数多：比其他保藏方法多，易发生变异和引起退化；起退化；起退化；起退化；n nC.C.传代频繁：不仅影响菌种质量，也容易造成杂菌污传代频繁：不仅影响菌种质量，也容易造成杂菌污传代频繁：不仅影响菌种质量，也容易造成杂菌污传代频繁：不仅影响菌种质量，也容易造成杂菌污染；染；染；染；n nD.D.水分蒸发：造成浓度增高，渗透压加大
13、，易引起菌水分蒸发：造成浓度增高，渗透压加大，易引起菌水分蒸发：造成浓度增高，渗透压加大，易引起菌水分蒸发：造成浓度增高，渗透压加大，易引起菌种退化甚至死亡。种退化甚至死亡。种退化甚至死亡。种退化甚至死亡。(1)(1)斜面保藏斜面保藏(bocng)(bocng)方法方法第13页/共22页第十三页，共22页。n n(2)液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法n n其实是斜面保藏的一种方式，其实是斜面保藏的一种方式，它比斜面保藏的好处是因为在它比斜面保藏的好处是因为在斜面中加入石蜡油，保存期间斜面中加入石蜡油，保存期间可以可以(ky)防止培养基水分蒸发防止培养基水分蒸发并隔绝氧气，克服了斜面保藏并隔绝氧气，
14、克服了斜面保藏的缺点。的缺点。第14页/共22页第十四页，共22页。n n(3)干燥保藏法干燥保藏法n n自然界中不少微生物由于可产自然界中不少微生物由于可产生孢子或芽孢，在干燥环境中生孢子或芽孢，在干燥环境中抵抗力强，不易死亡，因此把抵抗力强，不易死亡，因此把菌种接种到一些适宜的载体上，菌种接种到一些适宜的载体上，人为创造干燥环境，能够达到人为创造干燥环境，能够达到菌种保藏的目的。菌种保藏的目的。n n常用干燥保藏方式常用干燥保藏方式(fngsh)n n砂土保藏法砂土保藏法n n滤纸条保藏法滤纸条保藏法n n无水硅胶保藏法无水硅胶保藏法n n麸皮保藏法麸皮保藏法第15页/共22页第十五页，共
15、22页。n n(4)冷冻干燥保藏法冷冻干燥保藏法n n用保护剂制备用保护剂制备(zhbi)菌悬液，然菌悬液，然后将含菌样快速降至冰冻状态，后将含菌样快速降至冰冻状态，减压抽真空，使冰升华成水蒸气减压抽真空，使冰升华成水蒸气排出，从而使含菌样脱水干燥，排出，从而使含菌样脱水干燥，并在真空状态密封瓶口隔绝空气，并在真空状态密封瓶口隔绝空气，造成无氧的真空环境，置于低温造成无氧的真空环境，置于低温保存。保存。第16页/共22页第十六页，共22页。n n(5)真空干燥法真空干燥法n n(6)液氮超低温保藏法液氮超低温保藏法n n(7)液相保藏法液相保藏法n nA.蒸馏水保藏法蒸馏水保藏法n nB.磷酸
16、盐缓冲液保藏法磷酸盐缓冲液保藏法n nC.食盐食盐(shyn)溶液保藏法溶液保藏法第17页/共22页第十七页，共22页。n n二、菌种保藏注意事项二、菌种保藏注意事项二、菌种保藏注意事项二、菌种保藏注意事项n n1.1.保藏菌种要用良好保藏菌种要用良好保藏菌种要用良好保藏菌种要用良好(lingho)(lingho)的培养基，采用新鲜培养的培养基，采用新鲜培养的培养基，采用新鲜培养的培养基，采用新鲜培养的菌种；的菌种；的菌种；的菌种；n n2.2.操作中应严格无菌操作；操作中应严格无菌操作；操作中应严格无菌操作；操作中应严格无菌操作；n n3.3.注意保藏菌种的制备质量注意保藏菌种的制备质量注意
17、保藏菌种的制备质量注意保藏菌种的制备质量n n4.4.为防止菌种退化，应创造最适宜的保藏条件；为防止菌种退化，应创造最适宜的保藏条件；为防止菌种退化，应创造最适宜的保藏条件；为防止菌种退化，应创造最适宜的保藏条件；n n5.5.严格控制传代次数；严格控制传代次数；严格控制传代次数；严格控制传代次数；n n6.6.恢复培养时，应移接到保藏前相同培养基上进行培养，恢复培养时，应移接到保藏前相同培养基上进行培养，恢复培养时，应移接到保藏前相同培养基上进行培养，恢复培养时，应移接到保藏前相同培养基上进行培养，以维持优良性能的稳定性。以维持优良性能的稳定性。以维持优良性能的稳定性。以维持优良性能的稳定性
18、。第18页/共22页第十八页，共22页。工业工业(gngy)微生物育种学微生物育种学总结总结第19页/共22页第十九页，共22页。主要主要(zhyo)内容内容定向培育定向培育(dngxingpiy)与选种与选种诱变诱变(yu bin)育种育种杂交育种杂交育种代谢控制育种代谢控制育种基因工程育种基因工程育种原理原理基因突变基因突变诱发突变诱发突变遗传、生长遗传、生长代谢控制代谢控制基因体外重组基因体外重组方法方法分离、出发菌株分离、出发菌株诱变、杂交诱变、杂交筛选筛选保藏保藏第20页/共22页第二十页，共22页。重点重点(zhngdin)诱变诱变(yu bin)机制与诱变机制与诱变(yu bin)剂种类剂种类代谢代谢(dixi)类型与代谢类型与代谢(dixi)调控机制调控机制杂交原理与方式杂交原理与方式分离与筛选、鉴定方法分离与筛选、鉴定方法第21页/共22页第二十一页，共22页。感谢您的观看感谢您的观看(gunkn)！第22页/共22页第二十二页，共22页。