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1、会计学1微生物的实验室培养微生物的实验室培养(piyng)张张第一页，共75页。1.1.何为何为(h wi)(h wi)培养基？培养基？3.3.不同的培养基有不同的配方不同的培养基有不同的配方(pi fng)(pi fng)，但是其基本成分都相同，都包括哪些营，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养元素？有何作用？请举例说明。养元素？有何作用？请举例说明。阅读阅读(yud)(yud)教材教材P1415P1415相关内容，相关内容，回答以下问题：回答以下问题：2.2.按照不同的培养基划分标准，培养基按照不同的培养基划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？有哪些种类、配制特点及其应用？第2页/
2、共75页第二页，共75页。一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。（2）按功能）按功能(gngnng)来分，可分为选择培养基和鉴别培养来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。基。（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型培养基的类型(lixng)和用途和用途第3页/共75页第三页，共75页。液体液体液体液体(yt)(yt)(yt)(
3、yt)培养基：培养基：培养基：培养基：表面表面表面表面(biomin)(biomin)生长生长生长生长均匀混浊均匀混浊均匀混浊均匀混浊(hnzhu)(hnzhu)生长生长生长生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长backbackbackback半固体培养基：半固体培养基：半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力无动力无动力有动力有动力有动力有动力(弥散弥散弥散弥散)固体培养基：菌落固体培养基：菌落固体培养基：菌落固体培养基：菌落第4页/共75页第四页，共75页。微生物需要的五大类营养要素微生物需要的五大类营养要素微生物需要的五大类营养要素微生物需要的五大类营养要素(yo s)(yo s)(yo
4、s)(yo s)物质是：物质是：物质是：物质是：2.2.2.2.培养基的成分培养基的成分培养基的成分培养基的成分(chng fn)(chng fn)(chng fn)(chng fn)碳源碳源碳源碳源 、氮源、氮源、氮源、氮源 、无机盐、无机盐、无机盐、无机盐 、水、生长因子、水、生长因子、水、生长因子、水、生长因子无机无机无机无机(wj)(wj)(wj)(wj)碳源：碳源：碳源：碳源：CO2CO2CO2CO2；NaHCO3NaHCO3NaHCO3NaHCO3等等等等有机碳源：有机碳源：有机碳源：有机碳源：糖类糖类糖类糖类、脂肪酸、花生粉、脂肪酸、花生粉、脂肪酸、花生粉、脂肪酸、花生粉饼、石油
5、等饼、石油等饼、石油等饼、石油等构成细胞物质和一些代谢产物构成细胞物质和一些代谢产物构成细胞物质和一些代谢产物构成细胞物质和一些代谢产物异养微生物的能源异养微生物的能源异养微生物的能源异养微生物的能源来源：来源：来源：来源：作用：作用：作用：作用：（1 1 1 1）微生物的碳源）微生物的碳源）微生物的碳源）微生物的碳源第5页/共75页第五页，共75页。无机无机无机无机(wj)(wj)(wj)(wj)氮源：氮源：氮源：氮源：N2N2N2N2、NH4+NH4+NH4+NH4+、NO3-NO3-NO3-NO3-、NH3NH3NH3NH3等。等。等。等。有机氮源：尿素有机氮源：尿素有机氮源：尿素有机氮
6、源：尿素(nio s)(nio s)(nio s)(nio s)、牛肉膏、蛋、牛肉膏、蛋、牛肉膏、蛋、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等白胨、氨基酸等白胨、氨基酸等白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供(tgng)N(tgng)N(tgng)N(tgng)N元素的营元素的营元素的营元素的营养物质。养物质。养物质。养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含N N N N的代谢产物。的代谢产物。的代谢产物。的代谢产物。（2 2 2 2）微生物的氮源）微生物的氮源）微生物的氮源
7、）微生物的氮源概念：概念：概念：概念：来源：来源：来源：来源：作用：作用：作用：作用：第6页/共75页第六页，共75页。1.1.何为无菌技术何为无菌技术(jsh)(jsh)？无菌技术？无菌技术(jsh)(jsh)包括哪些方面？包括哪些方面？2.2.什么是消毒什么是消毒(xio d)(xio d)？灭菌？两者有？灭菌？两者有何区别？何区别？3.3.常用的消毒与灭菌常用的消毒与灭菌(mi jn)(mi jn)的方法有哪的方法有哪些？有何要求？些？有何要求？4.4.请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。作步骤。思考思考2：第7页/共75页第七页，共75页。二
8、二二二.无菌技术无菌技术无菌技术无菌技术(jsh)(jsh)(jsh)(jsh)1.1.1.1.无菌技术无菌技术无菌技术无菌技术(jsh)(jsh)(jsh)(jsh)的概的概的概的概念念念念 无菌操作泛指无菌操作泛指(fn zh)在培养微在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。染的方法。获得纯净培养物的关键获得纯净培养物的关键获得纯净培养物的关键获得纯净培养物的关键是：是：防止外来杂防止外来杂菌的入侵菌的入侵第8页/共75页第八页，共75页。消毒定义：消毒定义：消毒定义：消毒定义：使用较温和的物理使用较温和的物理使用较温和的物理使用较温和的物理(wl)(wl
9、)或化学方法，或化学方法，或化学方法，或化学方法，杀死物体表面或内部的部份微生物（不包杀死物体表面或内部的部份微生物（不包杀死物体表面或内部的部份微生物（不包杀死物体表面或内部的部份微生物（不包括芽孢和孢子）。括芽孢和孢子）。括芽孢和孢子）。括芽孢和孢子）。2.2.消毒消毒消毒消毒(xio d)(xio d)与灭菌的概念及两者的区别与灭菌的概念及两者的区别与灭菌的概念及两者的区别与灭菌的概念及两者的区别 灭菌灭菌灭菌灭菌(mi jn)(mi jn)的定的定的定的定义：义：义：义：是指使用强烈的理化因素杀死物体内是指使用强烈的理化因素杀死物体内是指使用强烈的理化因素杀死物体内是指使用强烈的理化因
10、素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达到到到到完全无菌完全无菌完全无菌完全无菌之过程。之过程。之过程。之过程。第9页/共75页第九页，共75页。煮沸消毒法：煮沸消毒法：煮沸消毒法：煮沸消毒法：100100100100煮沸煮沸煮沸煮沸5-6min5-6min5-6min5-6min。巴氏消毒法：巴氏消毒法：巴氏消毒法：巴氏消毒法：70-7570-7570-7570-75下煮下煮下煮下煮30min30min30min30min或或或或 80808080下煮下煮下煮下煮15min15
11、min15min15min。化学药剂消毒法：用化学药剂消毒法：用化学药剂消毒法：用化学药剂消毒法：用75%75%75%75%酒精酒精酒精酒精(jijng)(jijng)(jijng)(jijng)、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。源。源。源。紫外线消毒。紫外线消毒。紫外线消毒。紫外线消毒。.消毒消毒消毒消毒(xio d)(xio d)(xio d)(xio d)的的的的方法：方法：方法：方法：3.3.3.3.常用的消毒与灭菌常用的消毒与灭菌常用的消毒与灭菌常用的消毒与灭菌(mi j
12、n)(mi jn)(mi jn)(mi jn)的的的的方法方法方法方法第10页/共75页第十页，共75页。灼烧灭菌灼烧灭菌灼烧灭菌灼烧灭菌(mi(mi(mi(mi jn)jn)jn)jn)干热灭菌干热灭菌干热灭菌干热灭菌(mi(mi(mi(mi jn)jn)jn)jn)：160-170 160-170 160-170 160-170 下加热下加热下加热下加热1-2h1-2h1-2h1-2h。高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌(mi jn)(mi jn)(mi jn)(mi jn)：100kPa100kPa100kPa100kPa、121 121 121 121 下维持下维持下维持
13、下维持15-30min.15-30min.15-30min.15-30min.灭菌灭菌灭菌灭菌(mi jn)(mi jn)(mi jn)(mi jn)的的的的方法：方法：方法：方法：第11页/共75页第十一页，共75页。1 1关于微生物营养物质的叙述中，正关于微生物营养物质的叙述中，正确的是确的是A A、是碳源的物质不可能同时是氮源、是碳源的物质不可能同时是氮源 B B、凡碳源都提供能量、凡碳源都提供能量(nngling)(nngling)C C、除水以外的无机物只提供无机盐、除水以外的无机物只提供无机盐 D D、无机氮源也能提供能量、无机氮源也能提供能量(nngling)(nngling)D
14、第12页/共75页第十二页，共75页。2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确(zhngqu)(zhngqu)的是的是A A、防止杂菌污染、防止杂菌污染 B B、消灭杂菌、消灭杂菌C C、培养基和发酵设备都必须灭菌、培养基和发酵设备都必须灭菌 DD、灭菌必须在接种前、灭菌必须在接种前B第13页/共75页第十三页，共75页。3.3.培培培培养养养养基基基基、培培培培养养养养皿皿皿皿、接接接接种种种种环环环环、实实实实验验验验操操操操作作作作者者者者的的的的双双双双手手手手、空空空空气气气气、牛牛牛牛奶奶奶奶所所所所采采采采用用用用的的的的灭灭灭灭菌菌菌菌、消消消消毒
15、毒毒毒方法方法方法方法(fngf(fngf)依次是依次是依次是依次是()。化化化化学学学学消消消消毒毒毒毒灼灼灼灼烧烧烧烧灭灭灭灭菌菌菌菌干干干干热热热热灭灭灭灭菌菌菌菌紫紫紫紫外外外外线灭菌线灭菌线灭菌线灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法A A B B C C D DA第14页/共75页第十四页，共75页。4.4.可以作为硝化细菌碳源、氮源及能量来源的可以作为硝化细菌碳源、氮源及能量来源的可以作为硝化细菌碳源、氮源及能量来源的可以作为硝化细菌碳源、氮源及能量来源的物质物质物质物质(wzh)(wzh)依次是依次是依次是依次是（）A.A.
16、含碳有机物、氨、光含碳有机物、氨、光含碳有机物、氨、光含碳有机物、氨、光 B.B.含碳无机物、氮、氮含碳无机物、氮、氮含碳无机物、氮、氮含碳无机物、氮、氮C.C.含碳有机物、氨、氨含碳有机物、氨、氨含碳有机物、氨、氨含碳有机物、氨、氨 D.D.含碳无机物、氨、氨含碳无机物、氨、氨含碳无机物、氨、氨含碳无机物、氨、氨D第15页/共75页第十五页，共75页。n n5无菌技术包括以下几个方面的无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中错误的是叙述，其中错误的是()n nA对实验对实验(shyn)操作的空间、操操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌作者的衣着和手进行灭菌n nB将用于微生物培养的培养皿、将用于
17、微生物培养的培养皿、接种用具和培养基等进行灭菌接种用具和培养基等进行灭菌n nC为避免周围环境中微生物的污为避免周围环境中微生物的污染，实验染，实验(shyn)操作应在酒精灯操作应在酒精灯火焰附近进行火焰附近进行n nD实验实验(shyn)操作时应避免已经操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相灭菌处理的材料用具与周围物品相接触接触D第16页/共75页第十六页，共75页。n n6 6下列物质中，不能用作酵母菌碳源的下列物质中，不能用作酵母菌碳源的下列物质中，不能用作酵母菌碳源的下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（是（是（是（）n nA A 含碳有机物含碳有机物含碳有机物含碳有机物 B B
18、 蛋白胨蛋白胨蛋白胨蛋白胨 n nC C 含碳无机物含碳无机物含碳无机物含碳无机物 D D 花生花生花生花生(hu shn(hu shn)粉饼粉饼粉饼粉饼等天然物质等天然物质等天然物质等天然物质C第17页/共75页第十七页，共75页。7 7。关于。关于。关于。关于(guny)(guny)灭菌和消毒的理解不正确灭菌和消毒的理解不正确灭菌和消毒的理解不正确灭菌和消毒的理解不正确的是的是的是的是 A A灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细 胞、芽孢和孢子胞、芽孢和孢子胞、芽孢和孢子胞、芽孢和孢子 B B消毒和
19、灭菌实质上是相同的消毒和灭菌实质上是相同的消毒和灭菌实质上是相同的消毒和灭菌实质上是相同的 C C接种环用灼烧法灭菌接种环用灼烧法灭菌接种环用灼烧法灭菌接种环用灼烧法灭菌 DD常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等高压蒸汽灭菌等高压蒸汽灭菌等高压蒸汽灭菌等B第18页/共75页第十八页，共75页。n n8.下列叙述错误的是（）下列叙述错误的是（）A培养乳酸菌时需要在培养基中培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素添加维生素B培养霉菌时需将培养基的培养霉菌时需将培养基的PH调至碱性调至碱性C
20、培养细菌培养细菌(xjn)时需将时需将PH调调至中性或微碱性至中性或微碱性D培养厌氧微生物时则需要提供培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件无氧的条件 B第19页/共75页第十九页，共75页。n n9.9.甲、乙、丙是三种微生物，下表甲、乙、丙是三种微生物，下表甲、乙、丙是三种微生物，下表甲、乙、丙是三种微生物，下表I I、是用来培是用来培是用来培是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在中正常中正常中正常中正常生长繁殖；乙能在生长繁殖；乙能在生长繁殖；乙能在生长繁殖；乙能在I
21、I中正常生长繁殖，而甲和丙都不能；中正常生长繁殖，而甲和丙都不能；中正常生长繁殖，而甲和丙都不能；中正常生长繁殖，而甲和丙都不能；丙能在丙能在丙能在丙能在中正常生长繁殖，甲、乙都不能。下列说法中正常生长繁殖，甲、乙都不能。下列说法中正常生长繁殖，甲、乙都不能。下列说法中正常生长繁殖，甲、乙都不能。下列说法正确的是（正确的是（正确的是（正确的是（）n n n nA A、甲、乙、丙都是异养微生物、甲、乙、丙都是异养微生物、甲、乙、丙都是异养微生物、甲、乙、丙都是异养微生物n nB B、甲、乙都是自养、甲、乙都是自养、甲、乙都是自养、甲、乙都是自养(z y(z y n n)微生物、丙是异养微生物微生
22、物、丙是异养微生物微生物、丙是异养微生物微生物、丙是异养微生物n nC C、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养(z(z y y n n)微生物微生物微生物微生物n nDD、甲、乙是是固氮微生物、丙是异养微生物、甲、乙是是固氮微生物、丙是异养微生物、甲、乙是是固氮微生物、丙是异养微生物、甲、乙是是固氮微生物、丙是异养微生物D第20页/共75页第二十页，共75页。1.1.无菌技术无菌技术(jsh)(jsh)除了用来防止实验室的除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物
23、污染外，还有什么培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否请你判断以下材料或用具是否(sh fu)(sh fu)需要需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免答：无菌技术还能有效避免(bmin)操作者自身被微生物感染。操作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。第21页/
24、共75页第二十一页，共75页。微生物实验室培养微生物实验室培养微生物实验室培养微生物实验室培养(piyng)(piyng)的基本操作程序的基本操作程序的基本操作程序的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制(pizh)(pizh)3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存第22页/共75页第二十二页，共75页。三、实验三、实验(shyn)操作操作(一一)制备制备(zhbi)牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基(用于培用于培养细菌养细菌)1.牛肉膏蛋白胨
25、固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏牛肉膏 5.0g蛋白胨蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g琼脂琼脂 20.0g将上述物质溶解后，添加自来水，定将上述物质溶解后，添加自来水，定容至容至1000mL第23页/共75页第二十三页，共75页。2.2.2.2.制备牛肉膏蛋白制备牛肉膏蛋白制备牛肉膏蛋白制备牛肉膏蛋白(dnbi)(dnbi)(dnbi)(dnbi)胨培养基的步骤胨培养基的步骤胨培养基的步骤胨培养基的步骤（1 1 1 1）计算）计算）计算）计算（2 2 2 2）称量）称量）称量）称量(chn lin)(chn lin)(chn lin)(chn lin)（3 3 3 3）溶化）
26、溶化）溶化）溶化:调调调调PHPHPHPH值值值值（4 4 4 4）灭菌）灭菌）灭菌）灭菌:将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa100kPa100kPa100kPa、温度为、温度为、温度为、温度为121121121121，灭菌，灭菌，灭菌，灭菌1515151530min30min30min30min。（5 5 5 5）.倒平板倒平板倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到待培养基冷却到待培养基冷却到50505050左右时，在酒精灯附近倒平左右时，在酒精灯附近倒平左右时，在酒
27、精灯附近倒平左右时，在酒精灯附近倒平板。板。板。板。2d2d2d2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。第24页/共75页第二十四页，共75页。倒平板倒平板(pngbn)(pngbn)技术技术1.将灭过菌的将灭过菌的培养皿放在培养皿放在火焰旁的桌火焰旁的桌面上，右手面上，右手(yushu)拿拿装有培养基装有培养基的锥形瓶，的锥形瓶，左手拨出棉左手拨出棉塞。塞。1234第25页/共75页第二十五页，共75页。倒平板倒平板(pngbn)(pngbn)技术技术2.右手拿锥形右手拿锥形瓶，使瓶口
28、迅瓶，使瓶口迅速速(xn s)通过通过火焰。火焰。1234第26页/共75页第二十六页，共75页。倒平板倒平板(pngbn)(pngbn)技术技术12343.用左手的拇指和用左手的拇指和食指食指(shzh)将培将培养皿打开一条稍大养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培手将锥形瓶中的培养基养基(约约1020mL)倒入培养皿，倒入培养皿，左手立即盖上培养左手立即盖上培养皿的皿盖。皿的皿盖。第27页/共75页第二十七页，共75页。倒平板倒平板(pngbn)(pngbn)技术技术12344.等待平板等待平板(pngbn)冷却冷却凝固，大约需凝固，大约需510min。然。然后，
29、将平板后，将平板(pngbn)倒过倒过来放置，使皿来放置，使皿盖在下，皿底盖在下，皿底在上。在上。第28页/共75页第二十八页，共75页。1.培养基灭菌后，需要培养基灭菌后，需要(xyo)冷却冷却到到50 左右时，才能用来倒平板。你用左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行烫手时，就可以进行(jnxng)(jnxng)倒平板倒平板了。了。问题问题(wnt)讨论讨论第29页/共75页第二十九页，共75页。2.
30、为什么需要使锥形瓶的瓶口为什么需要使锥形瓶的瓶口(pn ku)通过火焰？通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶答：通过灼烧灭菌，防止瓶口口(pn ku)(pn ku)的微生物污染培养的微生物污染培养基。基。第30页/共75页第三十页，共75页。3.平板平板(pngbn)冷凝后，为什么要将平冷凝后，为什么要将平板板(pngbn)倒置？倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水地挥发，又可以防止皿
31、盖上的水珠落入培养基，造成珠落入培养基，造成(zo chn)(zo chn)污染。污染。第31页/共75页第三十一页，共75页。4.在倒平板的过程中，如果不小心将在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来平板还能用来(yn li)培养微生物吗？为培养微生物吗？为什么？什么？答：空气中的微生物可能答：空气中的微生物可能(knng)(knng)在皿盖与皿底之间的在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。用这个平板培养微生物。第32页/共75页第三十二页，共75页。9.关于制备牛
32、肉膏蛋白胨固体培养关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是（基，叙述错误的是（）A.操作顺序为计算、称量操作顺序为计算、称量(chn lin)、溶化、倒平板、灭菌、溶化、倒平板、灭菌B.将称好的牛肉膏连同称量将称好的牛肉膏连同称量(chn lin)纸一同放入烧杯纸一同放入烧杯C.待培养基冷却至待培养基冷却至50左右时进左右时进行倒平板行倒平板D.待平板冷却凝固约待平板冷却凝固约510min后将后将平板倒过来放置平板倒过来放置 A第33页/共75页第三十三页，共75页。10 有关倒平板的操作错误的是有关倒平板的操作错误的是（）将灭过菌的培养皿放在火焰将灭过菌的培养皿放在火焰(huyn)旁的桌
33、面上旁的桌面上B使打开的锥形瓶瓶口迅速通使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰过火焰(huyn)C将培养皿打开，培养皿盖倒将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上放在桌子上D等待平板冷却凝固后需要倒等待平板冷却凝固后需要倒过来放置过来放置C第34页/共75页第三十四页，共75页。（二）纯化（二）纯化(chn hu)大肠大肠杆菌杆菌平板划线平板划线(hu xin)(hu xin)法和稀释法和稀释涂布平板法涂布平板法微生物的接种微生物的接种(jizhng)(jizhng)方法：方法：纯化的原理：在培养基上将细菌稀释纯化的原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个菌或分散成单个细胞，使其长成单个菌落
34、，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落落第35页/共75页第三十五页，共75页。平板平板(pngbn)划线法划线法稀释稀释(xsh)涂布平板法涂布平板法第36页/共75页第三十六页，共75页。第37页/共75页第三十七页，共75页。第38页/共75页第三十八页，共75页。第39页/共75页第三十九页，共75页。一旦划破，会造成划线不均匀，一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法(wf)形成规矩的菌落，菌落会沿着形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
35、划破处生长，会形成一个条状的菌落。第40页/共75页第四十页，共75页。第41页/共75页第四十一页，共75页。第42页/共75页第四十二页，共75页。第43页/共75页第四十三页，共75页。第44页/共75页第四十四页，共75页。第45页/共75页第四十五页，共75页。第46页/共75页第四十六页，共75页。第47页/共75页第四十七页，共75页。第48页/共75页第四十八页，共75页。第49页/共75页第四十九页，共75页。1.1.为什么在操作的第一步以及为什么在操作的第一步以及(yj)(yj)每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？每次划线之前都要灼烧
36、接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次(shn c)划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次(shn c)划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。第50页/共75页第五十页，共75页。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却(lngqu)(lngqu)后再进行划线？后再进行划线？
37、答：以免答：以免(ymin)(ymin)接种环温度太高，杀死菌接种环温度太高，杀死菌种。种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是是(zn sh)(zn sh)从上一次划线的末端开始划线？从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第51页/共75页第
38、五十一页，共75页。n n11下列下列(xili)有关平板划线接种有关平板划线接种法的操作错误的是法的操作错误的是（）n nA将接种环放在火焰上灼烧将接种环放在火焰上灼烧 n nB将已冷却的接种环伸入菌液中将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液蘸取一环液n nC蘸取菌液和划线要在火焰旁进蘸取菌液和划线要在火焰旁进行行 n nD划线时要将最后一区的划线与划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连第一区的划线相连D第52页/共75页第五十二页，共75页。2.2.稀释稀释(xsh)(xsh)涂布涂布平板法平板法第53页/共75页第五十三页，共75页。1.将分别盛有将分别盛有9mL水的水的6支试管灭菌支
39、试管灭菌(mi jn)，并按，并按101106的顺序编号。的顺序编号。第54页/共75页第五十四页，共75页。2.用移液管吸取用移液管吸取1mL培养的菌液，注入培养的菌液，注入(zh r)第二支试管中。用手指轻压移液第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。分混匀。第55页/共75页第五十五页，共75页。3.从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注稀释液，注入入(zh r)102倍稀释的试管中，重复第倍稀释的试管中，重复第2步的步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的
40、稀释。稀释。第56页/共75页第五十六页，共75页。注意：注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试移液管需要经过灭菌。操作时，试管管(shgun)口和移液管离火焰口和移液管离火焰12cm处处.第57页/共75页第五十七页，共75页。计算计算计算计算(j sun)(j sun)(j sun)(j sun)每克样品中的菌每克样品中的菌每克样品中的菌每克样品中的菌落数：落数：落数：落数：每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数(CV)M(CV)M(CV)M(CV)M其中，其中，其中，其中，C C C C代表某一稀释度下平板上生长代表某一稀释度下平板上生长代表某一稀释度下平
41、板上生长代表某一稀释度下平板上生长(shngzhng)(shngzhng)(shngzhng)(shngzhng)的平均菌落数，的平均菌落数，的平均菌落数，的平均菌落数，V V V V代表涂代表涂代表涂代表涂布平板时所用的稀释液的体积布平板时所用的稀释液的体积布平板时所用的稀释液的体积布平板时所用的稀释液的体积(ml)(ml)(ml)(ml)，M M M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。代表稀释倍数。代表稀释倍数。第58页/共75页第五十八页，共75页。第59页/共75页第五十九页，共75页。第60页/共75页第六十页，共75页。第61页/共75页第六十一页，共75页。第62页/共75页第六十二
42、页，共75页。涂布平板的所有操作都应在火焰涂布平板的所有操作都应在火焰(huyn)附近进行。结合平板划线与系列附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如步应如何进行无菌操作？何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他吸管头不要接触任何其他(qt)(qt)物体、物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题问题(wnt)讨讨论论第63页/共75页第六十三页，共75页。微生物的恒温微生物的恒温(hngw
43、n)培养培养微生物的恒温微生物的恒温(hngwn)(hngwn)培养培养第64页/共75页第六十四页，共75页。微生物的恒温微生物的恒温(hngwn)培养培养第65页/共75页第六十五页，共75页。菌种的保存菌种的保存(bocn)(bocn)1.临时保藏临时保藏(bocng)：接种到固体斜面培养接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于基，菌落长成后置于4冰箱保存。冰箱保存。2.长期保存：长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法第66页/共75页第六十六页，共75页。四、课题四、课题(kt)(kt)成果评成果评价价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中如果
44、未接种的培养基在恒温箱中保温保温12 d后无菌落生长，说明培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功基的制备是成功(chnggng)的，否的，否则需要重新制备。则需要重新制备。第67页/共75页第六十七页，共75页。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到种过程中，无菌操作
45、还未达到(d do)要要求，需要分析原因，再次练习。求，需要分析原因，再次练习。第68页/共75页第六十八页，共75页。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录(jl)培养培养12 h与与24 h后的大肠杆菌菌落的大后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录小会有明显不同，及时观察记录(jl)的的同学会发现这一点，并能观察到其他一些同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。生良好的科学态度与习惯。第69页/共75页第六十九页，共75页。12获得纯净培养物的关键是（获得
46、纯净培养物的关键是（）A将用于微生物培养的器皿、接种用具和培将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌养基等器具进行灭菌 B接种纯种细菌接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养适宜环境条件下培养 D.防止防止(fngzh)外来杂菌的入侵外来杂菌的入侵D第70页/共75页第七十页，共75页。13.有关稀释涂布平板法，叙述错误的是（有关稀释涂布平板法，叙述错误的是（）A先将菌液进行一系列的梯度稀释先将菌液进行一系列的梯度稀释 B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面固体培养基的表面(biomin)C适宜条件下培养适宜条件下培养 D.结果都可
47、在培养基表面结果都可在培养基表面(biomin)形成单个形成单个的菌落的菌落D第71页/共75页第七十一页，共75页。14.在涂布平板在涂布平板(pngbn)操作时错操作时错误的是（误的是（）A.将涂布器在酒精灯火焰上灼烧将涂布器在酒精灯火焰上灼烧,直到烧红直到烧红B.取少量菌液滴加在培养基表取少量菌液滴加在培养基表面面C.将沾有少量酒精的涂布器在将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后火焰上引燃待酒精燃尽后,冷却冷却810 s再用再用D.涂布时可转动培养皿涂布时可转动培养皿,使涂布使涂布均匀均匀 A第72页/共75页第七十二页，共75页。15.将接种后的培养基和一个将接种后的培养基和一个(y)未接种的未接种的培养基都放入培养基都放入37恒温箱的目的是（恒温箱的目的是（）A.对比观察培养基有没有被微生物利用对比观察培养基有没有被微生物利用 B.对比分析培养基上是否生有杂菌对比分析培养基上是否生有杂菌C.没必要放入未接种的培养基没必要放入未接种的培养基 D.为了下次接种时再使用为了下次接种时再使用 B第73页/共75页第七十三页，共75页。本课题知识本课题知识(zh shi)(zh shi)小结小结:第74页/共75页第七十四页，共75页。感谢您的观看感谢您的观看(gunkn)！第75页/共75页第七十五页，共75页。