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1、会计学1细胞融合实验原理细胞融合实验原理实实 验验 原原 理理 两个或两个以上的细胞合并成一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合，也称细胞杂交，在自然情况下的受精过程即属这种现象。诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。1.病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），为RNA病毒。病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。2.化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体
2、、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：可促使细胞凝结；破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。3.电融合：是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。细胞融合技术在基因定位、基因表达产物、肿瘤诊断核治疗、生物新品种培育及单克隆抗体技术等领域有着非常广泛的应用前景。单克隆抗体技术就是通过细胞融合技术发展起来的，在生命科学研究核应用方面产生了重大影响。第1页/共6页实实 验
3、验 操操 作作1.1.在公鸡翼下静脉抽取在公鸡翼下静脉抽取2ml2ml鸡血，加入盛有鸡血，加入盛有8ml8ml的的AlseverAlsever液中，使血液与液中，使血液与AlseverAlsever液的的比例达液的的比例达1 1 4 4，混匀后可在冰箱中存放一周；混匀后可在冰箱中存放一周；2.2.取此储存鸡血取此储存鸡血0.2ml0.2ml加入加入0.8ml0.8ml的的0.850.85生理盐水，生理盐水，充分混匀，充分混匀，1500r/min1500r/min离心离心5min5min，弃去上清，加入，弃去上清，加入1ml1ml的的0.850.85生理盐水，重复上述条件离心两次。生理盐水，重复
4、上述条件离心两次。最后弃去上清，加最后弃去上清，加GKNGKN液液0.8ml0.8ml，离心；，离心；3.3.弃去上清，加入弃去上清，加入0.3ml0.3ml的的GKNGKN溶液，制成细胞悬溶液，制成细胞悬液；（也可以用血球计数板计数，用液；（也可以用血球计数板计数，用GKNGKN液将其液将其调整为调整为10106 6个个/ml/ml）；）；第2页/共6页实实 验验 操操 作作5.5.取以上细胞悬液取以上细胞悬液0.2ml0.2ml放入放入1ml1ml的的EPEP管中，然后放入管中，然后放入3737水浴中预热，同时将水浴中预热，同时将5050PEGPEG液一并预热液一并预热20min20min
5、；6.6.20min20min后将后将0.2ml0.2ml的的5050PEGPEG溶液逐滴沿离心管壁加溶液逐滴沿离心管壁加入到入到0.2ml0.2ml细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入3737水浴中保温水浴中保温20min20min；7.7.20min20min后，加入后，加入GKNGKN溶液溶液1ml1ml，静止于水浴中，静止于水浴中20min20min左右；左右；8.8.1500r/min1500r/min离心离心5min5min，弃去上清，加，弃去上清，加GKNGKN溶液再离溶液再离心心1 1次；次；9.9.弃去上清，加入弃去上清，加入GKNGKN液少许，混
6、匀，取少量悬浮于液少许，混匀，取少量悬浮于载玻片上，加入詹纳斯绿染液，用牙签混匀，载玻片上，加入詹纳斯绿染液，用牙签混匀，3min3min盖上盖玻片，观察细胞融合情况。盖上盖玻片，观察细胞融合情况。第3页/共6页融 合 过 程第4页/共6页相关实验溶液的配制相关实验溶液的配制n nAlseverAlsever溶液：葡萄糖溶液：葡萄糖2.05g2.05g，柠檬酸钠，柠檬酸钠0.80g0.80g，NaCl 0.42gNaCl 0.42g，溶于，溶于100ml100ml双蒸水中。双蒸水中。n nGKNGKN溶液：溶液：NaCl 8gNaCl 8g，KCl 0.4gKCl 0.4g，Na2HPO4Na2HPO4 2H2O 1.77g2H2O 1.77g，NaH2PO4NaH2PO4 H2O 0.69gH2O 0.69g，葡萄糖，葡萄糖2g2g，酚红，酚红0.01g0.01g，溶于，溶于1000ml1000ml水中。水中。n n5050PEGPEG溶液：称取一定量的溶液：称取一定量的PEGPEG（WMWM40004000）放入烧杯中，沸）放入烧杯中，沸水浴加热，使之熔化，待冷却至水浴加热，使之熔化，待冷却至5050时，加入等体积预热至时，加入等体积预热至5050的的GKNGKN溶液，混匀，置溶液，混匀，置3737备用。备用。第5页/共6页