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1、第三十六章微生物检验的质量控制现在学习的是第1页，共53页质量评价。室内质量控制是由实验室内部制订并质量评价。室内质量控制是由实验室内部制订并实施的，是保证每日工作质量的核心和基础。室实施的，是保证每日工作质量的核心和基础。室间质量评价则是由实验室外部的组织或机构对实间质量评价则是由实验室外部的组织或机构对实验室进行的质量评价。验室进行的质量评价。第一节第一节 室内质量控制室内质量控制 室内质量控制室内质量控制为保证临床微生物学检验结为保证临床微生物学检验结果的准确性而在实验室内采取的一系列行之有效果的准确性而在实验室内采取的一系列行之有效的措施。的措施。室内质量控制是微生物检验质量控制的核心
2、，室内质量控制是微生物检验质量控制的核心，也是做好室间质评的基础和前提。主要包括以下也是做好室间质评的基础和前提。主要包括以下几个方面的内容。几个方面的内容。一、对微生物检验人员的要求、培训与组织管理一、对微生物检验人员的要求、培训与组织管理现在学习的是第2页，共53页（一）要求（一）要求1.微生物实验室的负责人应由专业理论水平较高、操作熟练、微生物实验室的负责人应由专业理论水平较高、操作熟练、经验丰富、有管理能力的微生物学专家担任。经验丰富、有管理能力的微生物学专家担任。2.微生物检验人员除应具有丰富的专业知识、熟练的操作技能、微生物检验人员除应具有丰富的专业知识、熟练的操作技能、敏捷的思维
3、判断能力外，还应具有严谨的科学态度、高度的工敏捷的思维判断能力外，还应具有严谨的科学态度、高度的工作责任感和无私的献身精神。作责任感和无私的献身精神。3.微生物检验人员应经常阅读有关技术资料，及时掌握新知识、微生物检验人员应经常阅读有关技术资料，及时掌握新知识、新技术和本专业的发展现状及方向，不断进行专业技术的知识新技术和本专业的发展现状及方向，不断进行专业技术的知识更新。更新。4.微生物检验人员应不断接受有关技术方面的继续教育和培微生物检验人员应不断接受有关技术方面的继续教育和培训。训。现在学习的是第3页，共53页（二）培训（二）培训1.内部培训内部培训 1）定期讲课）定期讲课 2）考核鉴定
4、能力）考核鉴定能力 3）盲点检测）盲点检测2.外部培训：走出去，请进来两种形式。外部培训：走出去，请进来两种形式。二、编写微生物检验操作手册和卡片二、编写微生物检验操作手册和卡片 实验室内必须具有一本根据本实验室条件而编写的标准操作实验室内必须具有一本根据本实验室条件而编写的标准操作程序手册，间隔一段时间进行修订，删减过时需淘汰的内容，程序手册，间隔一段时间进行修订，删减过时需淘汰的内容，补充新的技术方法。并且赋予手册近似于法律的地位，使之成补充新的技术方法。并且赋予手册近似于法律的地位，使之成为全体工作人员操作时共同遵守的标准程序，不得随意更为全体工作人员操作时共同遵守的标准程序，不得随意更
5、现在学习的是第4页，共53页改或简化。要求：内容全面，文字简练，方便使改或简化。要求：内容全面，文字简练，方便使用，不断更新。用，不断更新。操作手册一般包括以下内容：实验室管理制度；操作手册一般包括以下内容：实验室管理制度；本室开展的检验项目及最低鉴定要求；标本的采本室开展的检验项目及最低鉴定要求；标本的采集和处理指南；微生物鉴定的简易程序；试剂、集和处理指南；微生物鉴定的简易程序；试剂、染色液和培养基的制备方法；药敏试验的方法和染色液和培养基的制备方法；药敏试验的方法和判读标准；实验室的安全与防护；各类参考数据；判读标准；实验室的安全与防护；各类参考数据；室内及室间质量控制；各类细菌生化反应
6、简表。室内及室间质量控制；各类细菌生化反应简表。三、培养基的质量控制三、培养基的质量控制 目前大多数实验室都使用干粉培养基配置或使目前大多数实验室都使用干粉培养基配置或使用成品培养基。对来自著名的微生物培养基生产用成品培养基。对来自著名的微生物培养基生产公司的成品培养基，质量比较稳定。只要按要求公司的成品培养基，质量比较稳定。只要按要求储存，在有效期内使用可获得满意效果。对自制储存，在有效期内使用可获得满意效果。对自制现在学习的是第5页，共53页的培养基应进行严格的质量控制。的培养基应进行严格的质量控制。（一）（一）原材料的挑选原材料的挑选:制作培养基的原材料成分制作培养基的原材料成分复杂，应
7、选用成分稳定的试剂，化学试剂应选用复杂，应选用成分稳定的试剂，化学试剂应选用分析纯制作分析纯制作MH 琼脂的原材料，尚有对胸腺嘧啶琼脂的原材料，尚有对胸腺嘧啶和和Ca2+、Mg2+等离子浓度的要求。使用干粉培养等离子浓度的要求。使用干粉培养基配制时，应对每一批号的干粉培养基进行登记基配制时，应对每一批号的干粉培养基进行登记并进行以下的质控程序。并进行以下的质控程序。（二）（二）配制过程配制过程:按照实验室操作手册中按照实验室操作手册中,培养基培养基的配制方法、配制步骤和注意事项严格进行。作的配制方法、配制步骤和注意事项严格进行。作好配制记录及培养基上的标签，注明培养基的名好配制记录及培养基上的
8、标签，注明培养基的名称、配制量、配方、配制者、配制日期及有效期。称、配制量、配方、配制者、配制日期及有效期。（三）质量控制（三）质量控制 1.培养基的外观检查：首先观察其颜色和透明有培养基的外观检查：首先观察其颜色和透明有现在学习的是第6页，共53页无异常，液体培养基应清晰透明，若有混浊与沉无异常，液体培养基应清晰透明，若有混浊与沉淀，说明培养基污染或成分析出；固体培养基应淀，说明培养基污染或成分析出；固体培养基应光滑湿润、色泽均匀、无干裂，否则不能使用。光滑湿润、色泽均匀、无干裂，否则不能使用。普通琼脂平板普通琼脂平板2 8可储存可储存1 2周，血平板至周，血平板至多储存多储存 1 周。培养
9、基与容器边缘分离则应弃去不周。培养基与容器边缘分离则应弃去不用。用。2.无菌试验：培养基灭菌后，应对每批培养基无菌试验：培养基灭菌后，应对每批培养基灭菌效果进行检测。对于分装后进行灭菌的培养灭菌效果进行检测。对于分装后进行灭菌的培养基一般应随机抽取基一般应随机抽取5%的量，置于的量，置于35 孵育箱中孵育箱中 24h,无菌生长为合格；对于无菌手续分装的培养无菌生长为合格；对于无菌手续分装的培养基则应对全部培养基置于基则应对全部培养基置于35 孵育箱中孵育箱中 24h，进，进行无菌试验；对选择性培养基，应取部分培养基行无菌试验；对选择性培养基，应取部分培养基加入加入10 20倍的无抑制性肉汤，稀
10、释抑制物质，倍的无抑制性肉汤，稀释抑制物质，现在学习的是第7页，共53页置于置于35 孵育箱中孵育箱中 24h,无菌生长为合格。无菌生长为合格。3.培养基的量：在容器中装入太多或太少的培养培养基的量：在容器中装入太多或太少的培养基均不合适。一般而言，斜面培养基的长度不超基均不合适。一般而言，斜面培养基的长度不超过试管的过试管的 2/3。双糖铁琼脂培养基，高层最少要。双糖铁琼脂培养基，高层最少要有有 1 cm。MH琼脂平板的厚度为琼脂平板的厚度为 4 mm，即直径，即直径为为 90 mm 的平皿，注入的平皿，注入 25ml 的培养基即可。其的培养基即可。其它平板厚度一般为它平板厚度一般为3mm，
11、在，在90 mm直径平皿中注直径平皿中注入入15 20ml的培养基。的培养基。4.培养基的培养基的pH:配制的培养基配制的培养基 pH 应与规定的应与规定的pH相差在相差在0.2之内，应在室温条件下用之内，应在室温条件下用 pH测定。测定。不宜用试纸法或目视比色法测定。不宜用试纸法或目视比色法测定。5.性能试验：应根据培养基的种类不同性能试验：应根据培养基的种类不同,分别用分别用已知阳性和阴性的标准菌株或参考菌株对每一批已知阳性和阴性的标准菌株或参考菌株对每一批现在学习的是第8页，共53页新配制或新购入的培养基进行测试，符合要求方可使用。新配制或新购入的培养基进行测试，符合要求方可使用。用于测
12、定各种培养基性能的菌种如下：用于测定各种培养基性能的菌种如下：培养基培养基 质控菌株质控菌株 判断标准判断标准 羊血琼脂平板羊血琼脂平板 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌ATCC25923 生长生长 生长试验生长试验 大肠埃希菌大肠埃希菌 ATCC25922 生长生长 溶血反应溶血反应 肺炎链球菌肺炎链球菌 ATCC19615 生长，生长，溶血溶血 化脓链球菌化脓链球菌 ATCC6305 生长，生长，溶血溶血 杆菌肽敏感杆菌肽敏感 化脓链球菌化脓链球菌 ATCC6305 10mm，敏感，敏感 （纸片法）（纸片法）B 群链球菌群链球菌 14mm，敏感，敏感 （纸片法）（纸片法）涎链球菌涎链球菌 1.96 1.96 0 0 -1.96 1.96 1.96 0 0 -1.96 -1.96 评价评价 极好极好 较好较好 较差较差 极差极差现在学习的是第52页，共53页 3）按级差计分法：每一种药敏纸片计 2 分，错一个级差扣 1 分。如：S I （扣 1 分）S R （扣 2 分）现在学习的是第53页，共53页