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1、槐米中芦丁得提取、分离与鉴定(一)一、实验目得 1、通过芦丁得提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物得原理及操作。2、通过芦丁结构得鉴定,了解苷类结构研究得一般程序与方法。二、实验原理 芦丁:浅黄色针状结晶,mp174-178。溶解度:1:8000;热水 1:200;冷乙醇 1:300;热乙醇 1:30;冷甲醇 1:100;热甲醇 1:10、槲皮素:黄色结晶,mp313-314(2 分子结晶水),能溶解于冷乙醇(1:650),易溶于沸乙醇(1:60),可溶于甲醇、乙酸乙酯等;难溶于水,实验室以稀硫酸水解,乙醇重结晶制得。本实验主要就是利用芦丁分子中含有较多得酚羟基,显弱酸性,可溶于碱中,加酸酸化
2、后又可析出结晶得性质,采用碱溶酸沉法提取,并用芦丁对冷、热水得溶解度相差悬殊得特性进行精制。三、药品材料 槐米、石灰乳、盐酸、广泛 PH 试纸 四、实验操作 芦丁得得提取与精制 芦丁得提取:取槐米 20g 置 500ml 烧杯中,加入沸水 400ml 及 1g 硼砂,搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟(注意保持PH8-9),并随时补充蒸发掉得水分,趁热用双层纱布滤过,收集滤液,药渣再用 200ml水按同样得操作再提取 20 分钟,合并两次滤液。浓缩至 1/2 体积,滤液在 60-70再用盐酸调至 PH4-5,静置一周,析出芦丁。五、实验说明及注意事项 1、本实验采用碱溶液酸沉法从
3、槐米中提取芦丁,收率稳定,且操作简便。在提取前应注意将槐米捣碎,使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质,加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。PH 应严格控制 8-9,不得超过 10,。因为在强碱条件下煮沸,时间稍长可促使芦丁水解破坏,使提取率明显下降。酸沉淀时 PH4-5,不宜过低,否则会使芸香苷成烊盐溶于水,降低了收率。2、提取过程中加入硼砂作用:保护芦丁分子中得邻二酚羟基不被氧化,亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合,使芦丁不受损失。槐米中芦丁得提取、分离与鉴定(二)一、实验目得 1、掌握芦丁水解生成苷元得方法及二者之间得分离。2、熟悉芦丁、槲皮素得结构性质、检识方法与纸层析鉴定方法。二实验原理
4、芦丁粗品可利用芦丁对冷、热水 得溶解度相差悬殊得特性进行精制。芦丁可被稀酸水解,生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖,并能通过纸层析鉴定。芦丁及槲皮素还可以通过化学反应及紫外光谱鉴定。三、药品材料 芦丁粗品、硫酸、盐酸、氢氧化钠、镁粉、-萘酚、三氯化铝、葡萄糖溶液、鼠李糖溶液、95%乙醇、碳酸钡、广泛 PH 试纸、层析滤纸等。四、实验操作（一）芦丁得提取与精制 1、芦丁得提取:取前次操作芦丁沉淀液,慢慢倾去上清液后,抽滤,沉淀用少量冷水洗涤 2-3 次,抽干,得到芦丁得粗产物。2、重结晶:称定粗品芦丁得重量,按约 1:200 得比例悬浮于蒸馏水中,煮沸 10 分钟使芦丁全部溶解,趁热抽滤,冷却滤液,静置
5、析晶。抽滤,置于空气中晾干或 60-70干燥,得精制芦丁,称重,计算收率。3、芦丁得水解:取芦丁 1g,置于 250ml 圆底烧瓶中,加入 2%硫酸溶液80ml 直火微沸回流1 小时,至析出得黄色沉淀不再增加为止,放冷抽滤,滤液保留作糖检查,沉淀用少量水洗去酸,抽干水分,晾干称重,得粗制槲皮素,然后用乙醇(95%乙醇约 15ml)重结晶即得精制槲皮素。取水解后得母液 20ml,加入碳酸钡细粉中与至 PH7,滤除生成得碳酸钡沉淀。滤液置水浴上浓缩至 1-2ml,供纸色谱用。（二）鉴定 1、性质实验(1)盐酸-镁粉反应:取芦丁少量置于试管中,加 1ml 乙醇使溶解,加 5 滴浓盐酸,再加少许镁粉,
6、注意观察颜色变化得情况。(2)Molisch 反应:取芦丁与槲皮素少量,分别置试管中各加 1ml 乙醇使溶解,加几滴-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁加浓硫酸10滴,注意观察两液面间产生得颜色变化,并比较芦丁与槲皮素得区别。2、色谱鉴定(1)芦丁及槲皮素得纸色谱检识 点样:取新华 1 号滤纸;距下端 3cm 处用铅笔划线,为起始线,隔 1、5cm处点样品。将点好得样品得滤纸挂在层析杠中饱与半个小时,再上行展开。支持剂:层析滤液(5cm*10cm)展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层 样品:自制槲皮素得乙醇溶液 自制芦丁得乙醇溶液 对照品:芦丁标准得乙醇溶液 显色剂:a、可见光下观察色斑,紫外灯
7、下观察荧光斑点 b、喷雾三氯化铝乙醇溶液,紫外灯下观察荧光斑点(2)糖得纸色谱检识 支持剂:层析滤纸(5cm*10cm)展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层 样品:水溶液 对照品:1%葡萄糖标准品醇溶液及 1%鼠李糖标准品溶液 显色剂:喷以邻苯二甲酸苯胺溶液,105烘焙 5 分钟至斑点显色清晰（3）芦丁及槲皮素得薄层色谱鉴定 吸附剂:硅胶 G 板,105-110活化 1 小时 展开剂:氯仿-甲醇-甲酸(15:5:1)样品:自制槲皮素得乙醇溶液 自制芦丁得乙醇溶液 对照品芦丁标准品得乙醇溶液 显色剂:a、可见光下观察色斑,紫外灯下观察荧光斑点 b、喷雾三氯化铝乙醇溶液,紫外灯下观察荧光斑点 五、实验说明及注意事项 芦丁得提取方法较多,如碱提取酸沉法,就是利用其具有酸性易溶于碱性水,加酸酸化后又析出沉淀得性质进行得。