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1、名称名称英文名称英文名称食物来源食物来源脂溶脂溶性维性维生素生素维生素维生素AVitaminA鱼肝油、蛋黄、肝、肾、乳鱼肝油、蛋黄、肝、肾、乳维生素维生素DVitaminD鱼肝油、肝脏、蛋黄、牛奶鱼肝油、肝脏、蛋黄、牛奶维生素维生素EVitaminE绿蔬、植物油、豆类、玉米绿蔬、植物油、豆类、玉米维生素维生素KVitaminK绿叶蔬菜、大豆绿叶蔬菜、大豆水溶水溶性维性维生素生素维生素维生素B族族VitaminBcomplex维生素维生素B1（硫胺素）（硫胺素）thiamine,糙米、麦麸、酵母、豆类糙米、麦麸、酵母、豆类维生素维生素B2（核黄素）（核黄素）riboflavin肝、肾、蛋黄、豆类
2、、酵母肝、肾、蛋黄、豆类、酵母维生素维生素B3（泛酸）（泛酸）pantothenicacid蛋黄、动物肝脏、酵母蛋黄、动物肝脏、酵母维生素维生素B5（烟酸、尼克酸）（烟酸、尼克酸）nicotinamide,金枪鱼、动物肝脏、蘑菇金枪鱼、动物肝脏、蘑菇维生素维生素B6（吡哆素）（吡哆素）pyridoxine肝脏、蛋黄、肉、大豆、谷肝脏、蛋黄、肉、大豆、谷维生素维生素B7（生物素）（生物素）vitaminH,biotin酵母、动物肝脏酵母、动物肝脏维生素维生素B11（叶酸）（叶酸）folicacid绿叶蔬菜、豆类、动物肝脏绿叶蔬菜、豆类、动物肝脏维生素维生素B12（钴胺素）（钴胺素）cobalam
3、ins肉类、鱼类、家禽、奶类肉类、鱼类、家禽、奶类维生素维生素C（抗坏血酸）（抗坏血酸）ascorbicacid新鲜蔬菜、豆芽、水果新鲜蔬菜、豆芽、水果表表3-5维生素的类别及食物来源维生素的类别及食物来源第1页/共55页根据溶解性，可分为：根据溶解性，可分为：l脂脂溶溶性性维维生生素素（fat-soluble)：维维生生素素A(包包括括胡萝卜素胡萝卜素)、维生素、维生素D、维生素、维生素E和维生素和维生素K等。等。l 水水溶溶性性维维生生素素(water-soluble)：维维生生素素B族族(包包括括B1、B2、烟烟酸酸、B6、泛泛酸酸、生生物物素素、肌肌醇醇、胆胆碱碱、叶叶酸酸、B12等等
4、)和和维维生生素素C。第2页/共55页一、一、脂溶性维生素的测定脂溶性维生素的测定（一）概述概述维维生生素素A是是由由-紫紫罗罗酮酮环环与与不不饱饱和和一一元元醇醇所所组组成成的的一一类类化化合合物物及及其其衍衍生生物物的的总总称称。包包括括维维生生素素A A1 1和和A A2 2，维维生生素素A A1 1又又称称视视黄黄醇醇，维维生生素素A2即即3-脱氢视黄醇。脱氢视黄醇。第3页/共55页1716192071115CH2OH18维生素A维生素A采用国际单位表示：1国际单位维生素 g维生素A(醇)；g乙酸维生素A(酯）14913第4页/共55页-胡胡萝萝卜卜素素(carotene)在在肝肝脏脏
5、、小小肠肠粘粘膜膜或或其其它它组组织织中中可可转转化化为为维维生生素素A，故胡萝卜素又称为维生素，故胡萝卜素又称为维生素A源。源。维维生生素素E，又又称称生生育育酚酚，有有多多种种异异构构体体，其其中中-生生育育酚酚的的生生理理活活性性最最高高，分分布布最广泛。最广泛。第5页/共55页脂溶性维生素的理化性质：脂溶性维生素的理化性质：(1)溶解性：溶解性：不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、三氯甲烷、乙醚、苯等有机溶剂；不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、三氯甲烷、乙醚、苯等有机溶剂；(2)耐酸碱性：耐酸碱性：维生素维生素A、D对酸不稳定，对酸不稳定，对碱稳定对碱稳定；维维生生素素E对对酸酸稳稳定定
6、，对对碱碱不不稳稳定定，但但在在抗抗氧氧化化剂剂存存在在下下或或惰惰性性气气体体保保护护下下，也也能能承受与碱一起煮沸。承受与碱一起煮沸。第6页/共55页(3)(3)耐热性和耐氧化性：耐热性和耐氧化性：维维生生素素A、D、E耐耐热热性性好好，能能经经受受煮煮沸沸。维维生生素素A易易被被氧氧化化，光光、热热促促进进其其氧化；氧化；维生素维生素E在空气中缓慢氧化，光、热、碱能促进氧化；在空气中缓慢氧化，光、热、碱能促进氧化；维生素维生素D性质稳定，不易被氧化。性质稳定，不易被氧化。检测时脂溶性维生素时应避光检测时脂溶性维生素时应避光第7页/共55页摄入量摄入量根据我国居民营养素参考摄入量成人男性：
7、800 gRE,女性：700 gRE视黄酮当量（retinolequivalents，RE）1 gRE=1 g视黄酮=6 g-胡萝卜素=12 g其他类胡萝卜素第8页/共55页测测定定食食品品中中脂脂溶溶性性维维生生素素时时，通通常常采采用用皂皂化化法法处处理理样样品品，以以除除去去脂脂肪肪等等杂杂质质，在在皂皂化化和和浓浓缩缩时时，常常加加入入抗抗氧氧化化剂剂(如如焦焦性性没没食食子子酸酸、维维生生素素C等等),然然后后用用乙乙醚醚、石石油油醚醚等等有有机溶剂提取浓缩脂溶性维生素。机溶剂提取浓缩脂溶性维生素。第9页/共55页(二二)维生素维生素A A的三氯化锑比色法的三氯化锑比色法1.原理原理
8、在在三三氯氯甲甲烷烷溶溶液液中中，维维生生素素A与与三三氯氯化化锑锑反反应应可可生生成成蓝蓝色色化化合合物物，在在620nm波波长长处处有有最最大大吸吸收收，其其吸吸光度与维生素光度与维生素A的含量成正比。的含量成正比。第10页/共55页2.2.样品处理样品处理样样品品 加加NaOH醇醇溶溶液液 水水浴浴上上回回流流(使使脂脂肪肪转转变变成成肥肥皂皂并并溶溶于于水水中中)加加乙乙醚醚提提取取维维生生素素A净净化化处处理理乙乙醚醚提提取取液液后后挥挥干乙醚干乙醚三氯甲烷定容三氯甲烷定容。第11页/共55页3.3.注意事项：注意事项：(1)三氯甲烷中不应含有水分，因三氯化锑遇水会水解出现沉淀，干扰
9、比色测定三氯甲烷中不应含有水分，因三氯化锑遇水会水解出现沉淀，干扰比色测定SbCl3十十H2OSbOCl十十2HCl在三氯甲烷中加入在三氯甲烷中加入乙酸酐乙酸酐，以保证脱水。，以保证脱水。(2)SbCl3与与维维生生素素A所所产产生生的的蓝蓝色色物物质质通通常常只只能能稳稳定定3 3 6s6s，6s以以后后便便开开始始退退色色，因因此在吸收池中反应，产生颜色后立即读取吸光度值。此在吸收池中反应，产生颜色后立即读取吸光度值。第12页/共55页(3)维生素维生素A见光易分解，实验操作应在暗处进行。见光易分解，实验操作应在暗处进行。2 2胡萝卜素的纸色谱法胡萝卜素的纸色谱法以以丙酮丙酮-石油醚石油醚
10、提取提取水洗涤（除去提取液中水溶性色素及丙酮）水洗涤（除去提取液中水溶性色素及丙酮）石油醚提取液浓缩。石油醚提取液浓缩。第13页/共55页层析滤纸层析滤纸提取液条状点提取液条状点样样石油醚展开石油醚展开将将Rf值值与标准胡萝卜素相同的色斑与标准胡萝卜素相同的色斑剪下用石油醚溶解剪下用石油醚溶解450nm波长下测定吸光度，与标波长下测定吸光度，与标准系列比较定量。准系列比较定量。第14页/共55页3.3.维生素维生素A A和维生素和维生素E E的的HPLCHPLC测定法测定法食食品品样样品品经经皂皂化化处处理理后后，用用乙乙醚醚提提取取维维生生素素A和和维维生生素素E，浓浓缩缩后后，挥挥去去乙乙
11、醚醚，以以乙乙醇醇溶溶解解提提取取物物。在在反反相相C18色色谱谱柱柱上上，以以甲甲醇醇(+水水或或己己烷烷)为为流流动动相相进进行行色色谱谱分分离离，紫紫外外分分光光光度检测器检测，光度检测器检测，与标准比较定量与标准比较定量。第15页/共55页第16页/共55页二、水溶性维生素的测定二、水溶性维生素的测定水溶性维生素水溶性维生素(VB1,VB2,Vc)的理化性质：的理化性质：l溶解性：溶解性：易溶于水易溶于水，不溶于苯、乙醚、三氯甲烷等有机溶剂。，不溶于苯、乙醚、三氯甲烷等有机溶剂。l稳稳定定性性：在在酸酸性性介介质质中中稳稳定定，即即使使加加热热维维生生素素B1、B2也也不不被被破破坏坏
12、；在在碱碱性性介介质质中中不稳定，易于分解。不稳定，易于分解。Vc在酸性还原性介质中稳定。在酸性还原性介质中稳定。第17页/共55页l维维生生素素B B2 2对对光光敏敏感感，在在酸酸性性、中中性性及及碱碱性性环环境境中中都都易易被被光光线线破破坏坏，维维生生素素C C对对氧氧、铜铜离离子子敏敏感感，易易被被氧化。氧化。第18页/共55页（一）维生素（一）维生素B1的测定的测定维维生生素素Bl又又名名硫硫胺胺素素(thiamine)，易易溶溶于于水水和和丁丁醇醇、异异丁丁醇醇、异异戊戊醇醇等等有有机机溶剂。维生素溶剂。维生素B1的测定主要采用的测定主要采用荧光分析法荧光分析法(GB12390-
13、90)。人人体体每每日日需需要要量量为为1 12mg2mg。VBVB1 1参参与与糖糖代代谢谢及及乙乙酰酰胆胆碱碱(Ach)(Ach)的的代代谢谢，促促进进消消化化功功能能。维维生生素素B B1 1缺缺乏乏可可引引起起神神经经系系统统病病变变还还可可引引起起心心血血管管系系统统病病变变。在在酵酵母母、米米糠糠、花生、豆类、牛乳、蛋黄中含量丰富。花生、豆类、牛乳、蛋黄中含量丰富。第19页/共55页食食品品中中的的维维生生素素Bl经经提提取取净净化化后后，在在碱碱性性铁铁氰氰化化钾钾溶溶液液中中被被氧氧化化成成硫硫色色素素，在在紫紫外外光光照照射射下下，硫硫色色素素产产生生蓝蓝色色荧荧光光，溶溶液
14、液的的荧荧光光强强度度与与维维生生素素B1的的浓浓度成正比，与标准比较定量。度成正比，与标准比较定量。1.测定原理测定原理 第20页/共55页本方法检出限为本方法检出限为g，线性范围为线性范围为g10g。硫胺素是由取代的嘧啶环和噻唑环由亚甲基相联而成的一类化合物硫胺素是由取代的嘧啶环和噻唑环由亚甲基相联而成的一类化合物 第21页/共55页2.样品处理：样品处理：样品粉碎或匀浆于低温冰箱中保存，测定前解冻。(1)样品中硫胺素的样品中硫胺素的提取提取：稀稀盐盐酸酸提提取取高压锅（121）加热淀淀粉粉酶酶水解水解4550过夜游离硫胺素。游离硫胺素。(2)样品中硫胺素的样品中硫胺素的纯化纯化：样样液液
15、人人造造浮浮石石交交换换管管硫硫胺胺素素被被吸吸附附水水洗洗除除杂杂质质酸酸性性氯氯化化钾钾洗洗脱脱硫胺素。硫胺素。(3)硫色素硫色素的生成、萃取和荧光测定的生成、萃取和荧光测定:第22页/共55页取一定体积样品提取液取一定体积样品提取液和硫胺素标准液（各和硫胺素标准液（各2份）份）加碱性铁氰化钾加碱性铁氰化钾加氢氧化钠加氢氧化钠形成硫色素形成硫色素破坏硫胺素破坏硫胺素用丁醇萃取，分层用丁醇萃取，分层有机相脱水，荧光测定。有机相脱水，荧光测定。第23页/共55页根根据据标标准准硫硫胺胺素素含含量量和和荧荧光光强强度度及及样样品品荧荧光光强强度度(均均扣扣除除空空白白)，计计算算样样品品中中硫胺
16、素的含量。硫胺素的含量。3.注意注意(1)样样品品与与铁铁氰氰化化钾钾溶溶液液混混合合后后，所所呈呈黄黄色色至至少少应应保保持持15s，否否则则需需再再滴滴加加铁铁氰氰化化钾溶液钾溶液12滴。但滴。但铁氰化钾过多又会破坏硫色素铁氰化钾过多又会破坏硫色素。(2)紫外光会破坏硫色素，硫色素形成后应迅速测定，并避光操作。紫外光会破坏硫色素，硫色素形成后应迅速测定，并避光操作。第24页/共55页(3)硫色素能溶于正丁醇，且稳定。硫色素能溶于正丁醇，且稳定。(4)洗衣粉内常含荧光物质，故所用的仪器，禁用洗衣粉洗涤。洗衣粉内常含荧光物质，故所用的仪器，禁用洗衣粉洗涤。第25页/共55页(二二)维生素维生素
17、B2的测定的测定维维生生素素B B2 2又又名名核核黄黄素素(riboflavin)(riboflavin)，是是多多种种酶酶（含含有有核核黄黄素素的的氧氧化化还还原原酶）辅基的组成成分，参与机体的氧化还原过程。酶）辅基的组成成分，参与机体的氧化还原过程。主要存在于瘦肉、肝、肾、心、奶类、蛋类、绿叶蔬菜等动物性食品，许多绿叶蔬菜和豆类也含有一定量维生素B2，而谷类中则含量较少。第26页/共55页猪肝猪肝2.082.08猪肾猪肾1.141.14猪心猪心0.480.48牛奶牛奶0.140.14鸡蛋鸡蛋0.320.32黄豆黄豆0.200.20芹菜芹菜0.190.19苋菜苋菜0.120.12西兰花西兰
18、花0.130.13表表1 1 常见食品中维生素常见食品中维生素B B2 2的含量（的含量（mg/100gmg/100g）第27页/共55页 维生素B B2 2易溶于水，在酸性和中性溶液中稳定，于120120加热6h6h仅有少量被破坏，但在碱性溶液中较易分解。游离核黄素对光敏感对光敏感，特别是紫外光，在酸性、中性或碱性条件下都易被光线破坏。只有当维生素B B2 2与磷酸蛋白质结合成复合物，对光才比较稳定。VBVB2 2在水溶液中呈现黄绿色荧光在水溶液中呈现黄绿色荧光,测定维生素测定维生素B2常用荧光分析法。常用荧光分析法。第28页/共55页1.测定原理测定原理样品 酸解、酶解使VBVB2 2游离
19、 高锰酸钾氧化色素和杂质 硅镁吸附剂柱净化 测定 荧光强度(激发波长为440nm440nm，525nm525nm波长处检测。试液中加连二亚硫酸钠 还原VBVB2 2为无荧光物质 测定杂质的荧光强度。还原前后荧光强度的差值与维生素B B2 2含量成正比，与标准比较定量。本方法检出限为g，线性范围为g20g。第29页/共55页2.2.样品处理样品处理样样品品酸酸性性条条件件下下于于120水水解解核核黄黄素素游游离离调调节节pH值值使使蛋蛋白白质质在在等等电电点点沉沉淀淀过滤除去杂质过滤除去杂质核核黄黄素素溶溶液液KMnO4酸酸性性条条件件氧氧化化色色素素和和杂杂质质H2O2除除去多余的去多余的KM
20、nO4。第30页/共55页3.核黄素的吸附和洗脱核黄素的吸附和洗脱核黄素溶液核黄素溶液硅镁吸附剂硅镁吸附剂柱柱热水洗除杂质热水洗除杂质丙酮丙酮-冰乙酸冰乙酸-水水(5+2+9)洗脱洗脱收集洗脱液。收集洗脱液。第31页/共55页4.4.荧光测定荧光测定 测定样品的荧光读数测定样品的荧光读数A，样品空，样品空白的荧光读数白的荧光读数Ao，标准溶液的荧光读，标准溶液的荧光读数数B，标准管空白荧光读数，标准管空白荧光读数Bo,可计可计算样品中维生素算样品中维生素B2的含量。的含量。第32页/共55页4.说明说明(1)加加入入连连二二亚亚硫硫酸酸钠钠(Na(Na2 2S S2 20 04 4)，还还原原
21、维维生生素素B2使使生生成成无无荧荧光光的的物物质质，可可排排除除杂杂质质荧荧光光所所引引起起的的干干扰扰。加加入入后后应应尽尽快快进进行行测测定定，否否则则会会氧氧化化成成有有荧荧光光的核黄素。的核黄素。第33页/共55页l(2)(2)操作应在避光条件下进行。操作应在避光条件下进行。第34页/共55页(三）HPLC同时测定B族维生素B族维生素的检测方法很多，高效液相色谱法分析速度快、灵敏度高、准确性好，样品量需用量少，可以同时测定多种B族维生素。国家卫生标准方法(GB/T5009.197-2003)可以同时测定保健食品中的VB2、烟酸和烟酰胺的高效液相色谱法。第35页/共55页样品经甲醇、水
22、和磷酸的混合液提取，滤膜过滤后，以1-葵烷磺酸钠-乙腈-磷酸为流动相，用C18柱分离，紫外280nm检测，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。1.实验原理实验原理第36页/共55页2.样品处理称取适量研磨混匀的样品，加入称取适量研磨混匀的样品，加入甲醇、水和磷酸的混合液（）超声提取甲醇、水和磷酸的混合液（）超声提取5min5min，3000r/mim3000r/mim离心离心5min5min，上清液经，上清液经滤膜过滤后即可进样。滤膜过滤后即可进样。第37页/共55页3.色谱条件C18柱（150mm4.6mm,5m），流速1ml/min，柱温：室温，检测波长为280nm，流动相为1-葵烷磺酸钠溶
23、液（g1-葵烷磺酸钠溶解于850ml水中）+乙腈+磷酸=850+150+1。第38页/共55页4.方法说明1）可通过调节流动相的pH值来控制维生素的电离，从而调节其保留时间和分离度。2）可在测定过程中变换检测波长，提高检测灵敏度，如维生素B1、烟酸、烟酰胺最大吸收波长为254nm，维生素B2、维生素B6、叶酸为280nm。第39页/共55页3 3）流动相中加入）流动相中加入1%1%磷酸，可降低维生磷酸，可降低维生素的离子化，改善峰形，减缓峰的拖素的离子化，改善峰形，减缓峰的拖尾现象。尾现象。4 4）由于）由于B B族维生素在水中可以解离为族维生素在水中可以解离为带电荷的离子，在系统中加入一种与
24、带电荷的离子，在系统中加入一种与上述电荷相反的离子对试剂，使其形上述电荷相反的离子对试剂，使其形成中性离子对，即可于反相离子对色成中性离子对，即可于反相离子对色谱中进行分离。谱中进行分离。第40页/共55页维 生 素 C C，又 称 为 抗 坏 血 酸(ascorbic(ascorbic acid)acid)，具有较强的还原性，被氧化后形成脱氢型抗坏血酸，仍然具有生理活性。脱氢型抗坏血酸水解成2,3-2,3-二酮古洛糖酸后，便失去生理活性。在蔬菜和水果中含量很丰富。(三三)维生素维生素C的测定的测定第41页/共55页O=CO=CCOOHHO-CO=CC=OHO-COO=COC=OHO-CH-C
25、H-C-OHHO-C-HHO-C-HHO-C-HCH2OHCH2OHCH2OH（还原型）（脱氢型）（二酮古洛糖酸）第42页/共55页2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚在在酸酸性性溶溶液液中中呈呈红红色色，VC能能将将其其还还原原成成无无色色。将将2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚装装入入滴滴定定管管中中，滴滴定定样样品品中中的的维维生生素素C，当当维维生生素素C全全部部氧氧化化后后，滴下的染料使溶液显示粉红色，指示滴定终点。滴下的染料使溶液显示粉红色，指示滴定终点。1.还原型抗坏血酸的测定还原型抗坏血酸的测定（1.2,6-二氯酚靛酚滴定法）二氯酚靛酚滴定法）第43页/共55页本本法法是是测测定定还还原原型
26、型维维生生素素C最最简简便便方方法法，适适合合于于蔬蔬菜菜水水果果中中维维生生素素C含含量量的的测测定定，但但不适宜于红色蔬菜。不适宜于红色蔬菜。样品中某些杂质可还原染料，但速度较慢，终点以粉红色出现样品中某些杂质可还原染料，但速度较慢，终点以粉红色出现15s不退为准。不退为准。整个测定过程要迅速，以免维生素整个测定过程要迅速，以免维生素C被空气中氧所氧化，并避免接触金属离子。被空气中氧所氧化，并避免接触金属离子。第44页/共55页2.总抗坏血酸的测定（总抗坏血酸的测定（2,4-二硝基苯肼比色二硝基苯肼比色法法,GB/5009.86-2003）用用酸酸处处理理过过的的活活性性炭炭作作氧氧化化剂
27、剂，将将还还原原型型维维生生素素C全全部部氧氧化化成成脱脱氢氢型型维维生生素素C。然然后后与与2,4-二二硝硝基基苯苯肼肼作作用用，生生成成红红色色的的脎脎，根根据据脎脎在在硫硫酸酸溶溶液液中中的的含含量与维生素量与维生素C总量成正比，在总量成正比，在520nm波长下比色定量。波长下比色定量。第45页/共55页注意事项1.1.样品用样品用20g/L20g/L草酸草酸匀浆或研磨。匀浆或研磨。2.2.活性炭置于活性炭置于1mol/L HCl1mol/L HCl中回流中回流1 12 2 h h，过滤，滤液用水洗至无铁离子，于，过滤，滤液用水洗至无铁离子，于110110度烘箱中烘干，备用。度烘箱中烘干
28、，备用。3.3.检出限为检出限为ug/mLug/mL第46页/共55页(1)(1)原理：原理：样品中还原型抗坏血酸经样品中还原型抗坏血酸经活性炭活性炭氧化为脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺氧化为脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺反应生成具有荧光的喹喔啉（反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline),quinoxaline),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比。在一定条件下成正比。适用于蔬菜、水果及其制品中还原型和脱氢型抗坏血酸的测定。适用于蔬菜、水果及其制品中还原型和脱氢型抗坏血酸的测定。3.抗坏血酸的荧光分析法抗坏血酸的荧光分析法（GB/T5009.8
29、6-2003)第47页/共55页(2)样品处理：样品制备样品制备：取一定量样品，加偏磷酸：取一定量样品，加偏磷酸-乙酸溶液，匀浆，用酸碱度（乙酸溶液，匀浆，用酸碱度（pH 1.2pH 1.2），），过滤。过滤。氧化氧化：分别取滤液及标准液，加适量活性炭，振摇过滤，分别收集滤液分别取滤液及标准液，加适量活性炭，振摇过滤，分别收集滤液除去干扰：除去干扰：各取试样氧化液和标准氧化液作为空白，分别加入各取试样氧化液和标准氧化液作为空白，分别加入硼酸硼酸-乙酸钠乙酸钠溶液，溶液，放置在冰箱中，备用。放置在冰箱中，备用。再分别取试样氧化液和标准氧化液各一份，加入再分别取试样氧化液和标准氧化液各一份，加入乙
30、酸钠乙酸钠溶液溶液，备用。，备用。第48页/共55页邻苯二胺溶液在空气中颜色变暗，邻苯二胺溶液在空气中颜色变暗，影响显色，应临用前配制。影响显色，应临用前配制。活性炭对抗坏血酸的氧化作用，是活性炭对抗坏血酸的氧化作用，是基于基于其表面吸附的氧进行界面反应其表面吸附的氧进行界面反应，应加入适量，否则测定结果偏低。应加入适量，否则测定结果偏低。(3）方法说明）方法说明第49页/共55页 当食物中含当食物中含丙酮酸时丙酮酸时，可与邻，可与邻苯二胺反应生成一种荧光物质，干苯二胺反应生成一种荧光物质，干扰测定。扰测定。加入加入硼酸硼酸可与脱氢抗坏血酸结可与脱氢抗坏血酸结合而不与合而不与邻苯二胺邻苯二胺反
31、应，以此消除反应，以此消除样品中丙酮酸产生的荧光干扰。样品中丙酮酸产生的荧光干扰。第50页/共55页4.维生素维生素C的高效液相色谱分的高效液相色谱分析析(1)(1)原理：原理：样品用样品用0.5%0.5%草酸超声波提取，以草酸超声波提取，以mol/L NH4Ac-HAcmol/L NH4Ac-HAc缓缓冲溶液冲溶液(pH4.5)(pH4.5)作流动相，反相作流动相，反相C18C18液相色谱柱分离，紫外检测器于液相色谱柱分离，紫外检测器于262nm262nm波长下测定维生素波长下测定维生素C C的吸光度值。样液经的吸光度值。样液经0.45 m0.45 m滤膜过滤后进行高效液相滤膜过滤后进行高效
32、液相色谱分析。根据保留时间定性，标准曲线法定量。色谱分析。根据保留时间定性，标准曲线法定量。第51页/共55页(2)(2)样品处理样品处理饮料：取一定量饮料经饮料：取一定量饮料经mm滤膜过滤后进样滤膜过滤后进样分析。分析。保健食品：称取一定量粉碎、混匀的样品，保健食品：称取一定量粉碎、混匀的样品，用用5g/L5g/L草酸溶液超声波提取草酸溶液超声波提取15min,15min,定容后经定容后经mm滤膜抽滤后进样分析。滤膜抽滤后进样分析。蔬菜和水果样品：用蔬菜和水果样品：用5g/L5g/L草酸溶液匀浆，草酸溶液匀浆，取部分上清液经取部分上清液经mmmm滤膜抽滤后进样分析。滤膜抽滤后进样分析。第52
33、页/共55页(3)(3)测测 定定色谱条件：色谱条件：C18C18柱（柱（4.6250mm4.6250mm，5mm5mm）；）；流动相为流动相为mol/L NH4Ac-mol/L NH4Ac-HAcHAc（pH4.5pH4.5），），检测波长为检测波长为262nm262nm；流速为流速为ml/min;ml/min;进样量为进样量为10l10l；2020 C C柱温。柱温。第53页/共55页1 1维生素维生素C C极易被氧化，因而在操作过极易被氧化，因而在操作过程中标准溶液的配制和样品的处理均用程中标准溶液的配制和样品的处理均用具有还原性的草酸溶液，标准溶液和处具有还原性的草酸溶液，标准溶液和处理后的样液应放冰箱保存，并尽快测定。理后的样液应放冰箱保存，并尽快测定。2 2该方法在该方法在g/mlg/ml浓度范围内线性良浓度范围内线性良好，检出限为好，检出限为50ng/ml50ng/ml。第54页/共55页感谢您的观看！第55页/共55页