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1、1制备色谱技术制备薄层色谱法设备简单，操作方便、分离快速、灵敏度及分辨率高；切割谱带更加方便；a.自动化：自动点样仪、自动程序展开仪、薄层扫描仪、多种强制流动技术、多种联用技术如傅立叶变换红外、拉曼、质谱等。第1页/共53页2制备色谱技术常规制备薄层色谱PTLC薄层板制备 为了增大上样量，增加了吸附剂用量。固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、C2、C18等反相健合硅胶支撑：玻璃板或铝箔平均25m,540 m硅胶H、硅胶G、硅胶F254、硅胶F365、硅胶P第2页/共53页3制备色谱技术硅胶粒径范围影响：越细越均匀，分离度越高，但？1.粒径范围宽，分离效率低，怎么办？-薄层厚度的渐变 薄层厚度从底部到
2、前沿逐渐增加，这样展开剂的速度逐渐变慢，样品谱带在展开过程中逐步富集，可保持较窄的谱带。第3页/共53页4制备色谱技术薄层板的制作方法：常采用湿法：平铺法和涂铺法。混合平铺涂铺器自然干燥一夜105-120活化黏合剂硅胶煅石膏或羧甲基纤维素钠水溶液第4页/共53页5制备色谱技术薄层色谱条件选择操作参数流速展开模式分离距离样品量流动相选择性溶剂强度黏度展开缸类型薄层板和展开缸空腔体积比值温度蒸气相固定相薄层厚度颗粒大小质量开放型操作不连续第5页/共53页6常用溶剂(1)电子接受体溶剂：苯、甲苯、乙酸乙酯、丙酮等；(2)质子给体溶剂：异丙醇、正丁醇、甲醇、无水乙醇等；(3)强质子给体溶剂：氯仿、冰醋
3、酸、甲酸、水等；(4)质子受体溶剂：三乙胺、乙醚等；(5)偶极作用溶剂：二氯甲烷(6)惰性溶剂：环己烷、正己烷等。制备色谱技术第6页/共53页7制备色谱技术上样和展开先用甲醇展开一次，除去可能存在的杂质；低挥发性溶剂溶解样品会引起样品带变宽，因此选用挥发性溶剂（己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等），且溶剂极性尽可能小。样品浓度以能均匀分布于吸附剂表面不析出为宜，5-10%；1.带状点样，尽可能窄；如点样带太宽，可用高极性溶剂展开至点样带上方2cm处进行浓缩，然后将铺板干燥后再用展开剂展开。？第7页/共53页8制备色谱技术样品检测有色物质直接观察斑点；荧光物质在紫外灯下观察；无色无荧光可在荧光板分离，紫
4、外光下显示暗斑；a.喷显色剂，结构稳定且不易氧化物质可以用碘蒸气显色，可逆；第8页/共53页9制备色谱技术常用显色剂：硫酸：硫酸:乙醇(1:1)溶液，喷后110烤5分钟，不同有机物显不同的颜色；0.05%高锰酸钾溶液，还原性物质显黄色，背景淡红色；酸性重铬酸钾：5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150烤薄层；a.5%磷钼酸乙醇溶液：喷后120烤，还原性物质显蓝色，再用氨气熏，背景无色。第9页/共53页10制备色谱技术样品收集：切割：刮刀或与真空相连的管型刮离器；回收：极性尽可能低的溶剂洗脱，通常1g吸附剂用5mL溶剂，丙酮和氯仿常用，甲醇因溶解硅胶及其中含有的杂质不常用。4型玻璃沙芯漏斗过滤洗脱液
5、，再用m滤膜过滤。a.硅胶的黏合剂以及荧光指示剂等杂质，可用Sephadex LH-20过滤纯化。第10页/共53页11制备色谱技术常规制备TLC速度慢，效率低，如何提高？加压离心第11页/共53页12加压制备OPLC 弹性气垫，外压使没有气相存在，展开剂强制流动，展开速度加快制备色谱技术更细的固定相颗粒、更长的薄层板第12页/共53页13离心制备CTLC 离心力加速流动相，分离速度快，操作简单，占用空间小，使用溶剂少，可反复使用，可进行梯度洗脱，进样量大，一次分离量0.1-0.2g.制备色谱技术第13页/共53页14不同制备TLC方法的比较 制备色谱技术参数PTLCOPLCCTLC流动相迁移
6、方法毛细作用加压离心薄层厚度/mm0.5-20.5-21-4分离长度/cm181812分离模式线形线形环形组分分开方法离线在线在线典型上样量/mg50-15050-30050-500分离谱带数2-52-72-12第14页/共53页15常规柱色谱技术：n可使用较大直径的色谱柱，更多的固定相，因此样品量可以更大；n分离速度较慢，样品可能被不可逆吸附；n不适合小颗粒的吸附剂？n改进方法：减压、加压等制备色谱技术第15页/共53页16柱色谱常用固定相(1)硅胶：官能团和分子的几何形状，对异构体的分离选择性远大于其他色谱方法。烷基卤素（FClBrI）醚硝基混合物腈叔胺酯酮醛醇酚伯胺酰胺羧酸2MPa；制备
7、色谱技术第34页/共53页35加压液相色谱制备分离方法的建立：(1)采用薄层色谱确定分离条件。对于快速和低压色谱，常用薄层色谱选择分离条件。硅胶薄层色谱确定正相色谱条件，反相硅胶薄层色谱确定反相色谱条件，一般选择Rf不大于且具有较好分离效果的展开剂。制备色谱技术第35页/共53页36(2)采用分析HPLC来确定分离条件。对于中压和高压色谱则需要用分析HPLC条件进行选择。优化条件时，寻求较小的容量因子(k99%；(2)纯品几乎完全回收，回收率95%；(3)分离程序简单，不需要为了得到纯品进一步分析所得到的组分。制备色谱技术过载：低浓度时，进样量增加使得容量因子改变超过10第37页/共53页38
8、浓度过载和体积过载 制备色谱技术K不变，线性结果可预测K变化，非线性结果难预测第38页/共53页39边缘切割与循环色谱分离 分离不佳时 制备色谱技术密闭进样器是将流经检测器的柱流出液通过多通阀连至泵的入口；交替柱循环装置是连接两根色谱柱，通过阀门将第二根色谱柱切割得到的样品再加到第一根色谱柱上循环分离。第39页/共53页40中心切割制备色谱技术 适当损失组分，但避免色谱峰两端微量组分的污染。第40页/共53页41制备加压色谱设备要求(1)泵：流量大，压力不需要太大；(2)进样器：大样品环六通阀，环管细而长而不是短而粗，样品溶液低浓度，大体积；(3)色谱柱：装填均匀常采用柱床压缩技术即径向压缩和
9、轴向压缩；(4)检测器：不需要高灵敏；制备色谱技术第41页/共53页42快速色谱法 简单易行制备色谱技术第42页/共53页43低压和中压色谱法 第七章 制备色谱技术第43页/共53页44制备HPLC 制备色谱技术参数内径/mm长度/cm填料粒径/m柱效进样量/mg分析型柱4-5253.5,5500002525-5010更低更大第44页/共53页45生产级的HPLC(1)溶剂花费是最大成本，昂贵、毒性、难处理溶剂不使用；(2)填料易得，性能好，重现性好；(3)溶剂回收再用；(4)直径大于5cm的色谱柱需专门设计，保证床层稳定，避免高压破坏。制备色谱技术第45页/共53页46模拟移动床色谱(SMB
10、)通常的色谱存在下列问题：(1)不能连续操作；(2)溶剂和分离材料利用率低；(3)流出组分被高度稀释；SMB同样的分离材料，生产力增加60倍，溶剂消耗量减少80倍。制备色谱技术第46页/共53页47模拟移动床色谱原理：制备色谱技术第47页/共53页48模拟移动床色谱原理：制备色谱技术第48页/共53页49模拟移动床色谱原理：制备色谱技术第49页/共53页50制备气相色谱：制备色谱技术第50页/共53页51径向柱色谱：制备色谱技术第51页/共53页52在惰性流动相中加入对固定相吸附或者溶解能力比所有组份都强的物质为顶替剂（或者直接用顶替剂做流动相。适适合合于于制制备备纯纯物物质质或或者者浓浓缩缩分分离离某某一一组组份份，缺缺点点是是每每经经一一次次使用后，必须更新柱子使用后，必须更新柱子顶替法样品流出曲线制备色谱技术顶替色谱法：第52页/共53页53感谢您的观看！第53页/共53页