杂环类药物分析.pptx

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1、第一节第一节 吡啶类药物吡啶类药物结构与化学性质含有N原子的六元单环，例如：异烟肼、尼克刹米和硝苯地平第1页/共70页主要化学性质与鉴别反应 弱碱性：吡啶环N原子为碱性原子，吡啶环pKb为8.8（水中）尼克刹米：除了吡啶环上的N原子外，吡啶环位被酰氨基取代，遇碱水解释放二乙胺。Chp2005鉴别：取本品10滴，加氢氧化钠试液3ml，加热，即发生二乙胺的臭气，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。第2页/共70页主要化学性质与鉴别反应 还原性：还原性：异烟肼吡啶环异烟肼吡啶环 位被酰肼所取代，有较强的还原性，可被位被酰肼所取代，有较强的还原性，可被不同的氧化剂氧化，也可与某些含有羰基的化合物发生缩合反应

2、。不同的氧化剂氧化，也可与某些含有羰基的化合物发生缩合反应。异烟肼与硝酸银银镜反应Chp2005：取本品约10mg，置试管中，加水2ml 溶解后，加氨制硝酸银试液1ml，即发生 气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。第3页/共70页缩合反应Chp2005异烟肼鉴别：取本品约0.1g，加水5ml 溶解后，加10香草醛的乙醇溶液 1ml，摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶；滤过，用稀乙醇重结晶，在105 干燥后，依法 测定（附录 C），熔点为228 231，熔融时同时分解。第4页/共70页异烟肼的其他鉴别反应与亚硒酸作用，可将其还原为红色硒的沉淀vv与与1,2-1,2-萘醌萘醌-4-4-磺酸在碱性介

3、质中，可缩合呈红色。磺酸在碱性介质中，可缩合呈红色。红色第5页/共70页主要化学性质与鉴别反应吡啶环的特性：吡啶环开环 戊烯二醛反应（kning反应）适用于、位无取代的异烟肼、尼克刹米 Chp2005尼克刹米鉴别反应：取本品1 滴，加水50ml，摇匀，分取2ml，加溴化氰试液2ml 与2.5苯胺溶 液3ml，摇匀，溶液渐显黄色。第6页/共70页主要化学性质与鉴别反应吡啶环的特性：二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）：在无水的条件下，吡啶及其衍生物与3,4-二硝基氯苯混合共热或加热至熔融，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液将残渣溶解，溶液呈紫红色。异烟肼氧化成羧基；尼克刹米水解成羧基第7页/共

4、70页吡啶环的鉴别反应形成沉淀的反应可与重金属盐类或苦味酸形成沉淀尼克刹米的鉴别：取本品2滴，加水1ml，摇匀，加硫酸铜试液2滴与硫氰酸铵试液3 滴，即生 成草绿色沉淀。异烟肼、尼克刹米可与氯化汞形成白色沉淀。第8页/共70页分解产物的鉴别反应异烟肼、尼克刹米等与无水碳酸钠或氢氧化钙共热，可发生脱羧降解，并有吡啶臭味逸出。第9页/共70页紫外吸收光谱鉴别芳杂环在紫外光区有特征吸收药物药物药物药物溶剂溶剂溶剂溶剂max max(nm)(nm)max(nm)max(nm)异烟肼异烟肼异烟肼异烟肼HCl(0.01mol/L)HCl(0.01mol/L)265265约约约约420420水水水水2662

5、66234234 378 378尼克刹米尼克刹米尼克刹米尼克刹米HCl(0.01mol/L)HCl(0.01mol/L)263263 285 285NaOH NaOH(0.01mol/L)(0.01mol/L)255255 840 840260260 860 860硝苯地平硝苯地平硝苯地平硝苯地平无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇333333 140 140第10页/共70页有关物质检查一、异烟肼中肼的检查一、异烟肼中肼的检查异烟肼不稳定，游离肼即可能在原料中引入，又可能在贮藏过程异烟肼不稳定，游离肼即可能在原料中引入，又可能在贮藏过程中降解诱变剂和致癌物质中降解诱变剂和致癌物质1 1、TLCT

6、LC检查方法：取本品，加水制成每检查方法：取本品，加水制成每1 1ml ml 中含中含5050mgmg的溶液，作为供试的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼品溶液。另取硫酸肼 加水制成每加水制成每1 1ml ml 中含中含0.200.20mgmg（相当于游离相当于游离肼肼5050g g）的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录B B）试验，吸取供试品溶液试验，吸取供试品溶液1010l l 与对照溶液与对照溶液2 2ll，分别点于同一硅分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇丙醇胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇丙醇(3:2

7、)(3:2)为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，试液，1515分钟后检视。在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的分钟后检视。在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。位置上，不得显黄色斑点。限度：限度：0.02%0.02%。第11页/共70页2 2、比浊法、比浊法JP(14)JP(14)采用样品中加水杨酸的乙醇溶液观察浑浊的方法专属采用样品中加水杨酸的乙醇溶液观察浑浊的方法专属性差性差3 3、差示分光光度法、差示分光光度法原理：原理：肼对肼对-二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛黄色缩合物（对黄色缩合物（对-二甲氨基

8、苯甲醛连二甲氨基苯甲醛连氮）氮）465465nmnm波长有最大吸收波长有最大吸收异烟肼对异烟肼对-二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛缩合物（对缩合物（对-二甲氨基苄叉）二甲氨基苄叉）465465nmnm波长无吸收波长无吸收加入加入3%3%丙酮，可使得黄色缩合物（对丙酮，可使得黄色缩合物（对-二甲氨基苯甲醛连氮）二甲氨基苯甲醛连氮）变为无色的二甲基甲酮连氮，继而作为参比，用于测定变为无色的二甲基甲酮连氮，继而作为参比，用于测定 A A456nm456nm，并以对照品比较法计算游离肼的含量。并以对照品比较法计算游离肼的含量。专属、准确、灵敏，最低检测限可达专属、准确、灵敏，最低检测限可达0.10.1g/

9、mlg/ml。有关物质检查一、异烟肼中肼的检查一、异烟肼中肼的检查第12页/共70页有关物质检查二、尼克刹米中有关物质的检查二、尼克刹米中有关物质的检查 TLCTLC 无杂质对照品高低浓度对比法无杂质对照品高低浓度对比法检查方法：取本品，加甲醇制成每检查方法：取本品，加甲醇制成每1 1ml ml 中含中含4040mgmg的溶液，作为的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加甲醇分别稀释成每供试品溶液；精密量取适量，加甲醇分别稀释成每1 1ml ml 中含中含0.40.4mg mg 和和4040gg的溶液，作为对照溶液的溶液，作为对照溶液(1)(1)和和(2)(2)。照薄层色谱。照薄层色谱法（附录

10、法（附录 B B）试验，吸取上述三种溶液各试验，吸取上述三种溶液各1010l l，分别点于同一分别点于同一硅胶硅胶GFGF254254薄层板上，以氯仿丙醇薄层板上，以氯仿丙醇(75:25)(75:25)为展开剂，展开后，为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯晾干，置紫外光灯(254(254nm)nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点，下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液与对照溶液(2)(2)的主斑点比较，不得更深的主斑点比较，不得更深 ；如有；如有1 1点超过时，应点超过时，应不深于对照溶液不深于对照溶液(1)(1)的主斑点。的主斑点。第13页/共70页有关物质检查 遇光不稳定光化学歧化作用H

11、PLC法检查 (A)(B)三、硝苯地平中的有关物质检查三、硝苯地平中的有关物质检查三、硝苯地平中的有关物质检查第14页/共70页HPLC法检查硝苯地平中的有关物质检查 避光操作避光操作 取本品，精密称定，加甲醇分别制成每取本品，精密称定，加甲醇分别制成每1 1mlml中含中含1 1mgmg和和0.20.2mgmg的溶液，作为供试的溶液，作为供试品溶液品溶液和和。取硝苯地平有关杂质对照品取硝苯地平有关杂质对照品A A和和B B各各1010mgmg，精密称定，置精密称定，置5050mlml量瓶中，加甲醇稀量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液释至刻度，作为对照品溶液。分别精密量取供试。分别精密量

12、取供试 品溶液品溶液和对照品溶液和对照品溶液各各1 1mlml，置置100100mlml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（附录照高效液相色谱法（附录 DD）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水水(3:2)(3:2)为流动相；检测波长为为流动相；检测波长为235235nmnm。取对照品溶液取对照品溶液2020ll注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，调节调节 检测灵敏度，使杂质检测灵敏度，使杂质A A和和B B成分色谱峰的峰高为满量程的成分色谱峰的峰高为满量程的2020；杂质；

13、杂质A A和和B B之之间，杂质间，杂质B B与硝苯地平之间的分离度均应符合规定。与硝苯地平之间的分离度均应符合规定。取供试品溶液取供试品溶液和对照品溶液和对照品溶液各各2020ll，分别注入液相色谱仪。记录色谱图至主成分别注入液相色谱仪。记录色谱图至主成分峰保留时间的分峰保留时间的2 2倍。供试品溶液倍。供试品溶液如出现与对照品溶液如出现与对照品溶液中杂质中杂质A A和和B B相对应的峰，相对应的峰，其峰面积不得大于对照品溶液其峰面积不得大于对照品溶液中杂质中杂质A A和和B B的面积；如出现除杂质的面积；如出现除杂质A A和和B B以外的其以外的其他杂质峰，其峰面积不得大于对照品溶液他杂质

14、峰，其峰面积不得大于对照品溶液中硝苯地平的峰面积；中硝苯地平的峰面积；各杂质总量不各杂质总量不得大于得大于0.50.5。供试品溶液。供试品溶液中小于对照品溶液中小于对照品溶液中硝苯地平峰面积的中硝苯地平峰面积的1010 以下的以下的杂质峰忽略不计。杂质峰忽略不计。第15页/共70页第二节第二节 喹啉类药物喹啉类药物 硫酸奎宁 硫酸奎宁丁 盐酸环丙沙星(quinine sulfate)(quinidine sulfate)(ciprofloxacin hydrochloride)结构特点：含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环，环上杂原子的反应性能基本与吡啶相同。第16页/共70页主要化学性质碱 性：喹

15、啉环上的N原子具有碱性，与强酸成盐环丙沙星：盐酸；奎宁、奎尼丁：二元酸硫酸（喹核碱含脂环氮，碱性强）奎宁(左旋体)：pKb1为5.07 pKb2为9.7，饱和水溶液pH为8.8，易溶 于氯仿无水乙醇(2:1)奎尼丁(右旋体)：pKb1为5.4pKb2为10，易溶于沸水或乙醇。旋 光 性：硫酸奎宁(左旋体)，比旋度为-237至-244 硫酸奎宁丁(右旋体)，比旋度为+275至+290 盐酸环丙沙星，无旋光性荧光特性：硫酸奎宁和硫酸奎宁丁在稀硫酸中显蓝色荧光，盐酸环丙 沙星无荧光。第17页/共70页鉴别试验一、绿奎宁反应（一、绿奎宁反应（ThalleioquinThalleioquin）用于奎宁和

16、奎尼丁的鉴别用于奎宁和奎尼丁的鉴别鉴别方法：取本品约20mg，加水20ml溶解后，分取5ml，加溴试液3滴与氨试液1ml，即显翠绿色。硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的反应机理如图 取其水溶液加溴试液23滴和氨试液1ml，即显翠绿色；加酸至中性显蓝色；酸性则呈紫红色；翠绿色可转溶于醇、氯仿中不溶于醚。第18页/共70页鉴别试验二、光谱特征二、光谱特征紫外吸收光谱紫外吸收光谱盐酸环丙沙星：取本品，加盐酸环丙沙星：取本品，加0.10.1mol/Lmol/L盐酸溶液制成每盐酸溶液制成每11mlml中含中含88gg的溶液，照分光光度法的溶液，照分光光度法(附录附录 A)A)测定，在测定，在 277 277nmnm

17、与与315315nmnm的波长处有最大吸收。的波长处有最大吸收。荧光光谱荧光光谱硫酸奎宁：取本品约硫酸奎宁：取本品约2020mgmg，加水加水2020mlml溶解后，分取溶液溶解后，分取溶液1010mlml，加稀硫酸使成酸加稀硫酸使成酸 性，即显蓝色荧光。性，即显蓝色荧光。第19页/共70页鉴别试验硫酸奎宁、硫酸奎尼丁硫酸根氯化钡白色沉淀盐酸环丙沙星盐酸根硝酸银白色沉淀 三、无机酸盐三、无机酸盐三、无机酸盐第20页/共70页特殊杂质检查一、硫酸奎宁中的特殊杂质检查酸度酸性杂质取本品0.2g，加水20ml溶解后，测定pH值应为5.7 6.6。氯仿乙醇不溶物取本品2g，加氯仿无水乙醇(2:1)的混

18、合液15ml，在50加热10min后，用称定重量的垂熔坩埚滤过，滤渣用上述混合液分5 次洗涤，每次10ml，在105 干燥至恒重，遗留残渣不得过2mg。其他金鸡纳碱（TLC）取本品，加稀乙醇制成每1ml 含10mg的溶液，作为供试品溶液；精 密量取适量，加稀乙醇稀释制成每1ml 中含50g 的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱 法（附录 B）试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯 仿丙酮二乙胺(5:4:1.25)为展开剂，展开后，微热使展开剂挥散，喷以碘铂酸钾试 液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。第21页/共70页特殊杂质检查二、盐酸环丙沙

19、星中特殊杂质检查酸 度取本品，加水制成每1ml中含25mg的溶液，测定 pH值应为3.0 4.5。溶液的澄清度和颜色取本品0.1g，加水10ml溶解后，溶液应澄清；如显色，与黄色或黄绿色4号标准比色液(附录 A)比较，不得更深。有关物质（HPLC）ODS色谱柱；以0.05mol/L枸橼酸溶液-乙腈(82:18)用三乙胺调节pH值至3.5为流动相；检测波长为277nm。理论板数按盐酸环丙沙星峰计算应不低 于2000，盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度应符合规定。测定法 取本品适量，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，取20l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度 和记录仪衰减，使主成分的峰高为记录仪满

20、量程的24倍，记录时间应为主成分峰保留时间的2倍。按面积 归一化法计算，杂质总量不得过1.5。第22页/共70页第三节第三节 托烷类药物托烷类药物 硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱 (atropine)(scopolamine hydrochloride)结构特点：大多数为莨菪烷衍生的氨基醇与不同的有机酸缩合成酯的生物碱，常见的有颠茄生物碱和古柯生物碱。第23页/共70页化学性质水解性（酯水解生成醇和酸）阿托品 莨菪醇 莨菪酸第24页/共70页化学性质碱性阿托品和东莨菪碱结构中，五原脂环含有叔胺氮原子，较强的碱性，易于酸成盐，如阿托品pKb1为4.35旋光性氢溴酸东莨菪碱含有不对称碳原子，左旋体比旋

21、度为-24至-27阿托品虽然含有不对称碳原子，但外消旋化，无旋光性第25页/共70页鉴别试验 托烷生物碱一般鉴别试验托烷生物碱一般鉴别试验鉴别方法：取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇23滴，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。第26页/共70页鉴别试验氧化反应氧化反应水解生成的莨菪酸，在硫酸和重铬酸钾在加热条件下，发水解生成的莨菪酸，在硫酸和重铬酸钾在加热条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，逸出苦杏仁的臭味。生氧化反应，生成苯甲醛，逸出苦杏仁的臭味。第27页/共70页鉴别试验沉淀反应沉淀反应碱性生物碱沉淀剂生成沉淀碱性生物碱沉淀剂生成沉淀例：阿托品：氯化汞

22、醇试液例：阿托品：氯化汞醇试液黄色沉淀黄色沉淀东莨菪碱：氯化汞醇东莨菪碱：氯化汞醇东莨菪碱：氯化汞醇东莨菪碱：氯化汞醇白色复盐沉淀白色复盐沉淀白色复盐沉淀白色复盐沉淀第28页/共70页鉴别试验硫酸盐与溴化物反应硫酸盐与溴化物反应 硫酸阿托品：水溶液加氯化钡生成白色沉淀，沉淀在盐酸或硝酸硫酸阿托品：水溶液加氯化钡生成白色沉淀，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解；加醋酸铅试液也生成白色沉淀，在醋酸铵或氢氧化中均不溶解；加醋酸铅试液也生成白色沉淀，在醋酸铵或氢氧化钠试液中溶解。钠试液中溶解。氢溴酸东莨菪碱：水溶液加硝酸银试液，生成淡黄色凝乳沉淀，氢溴酸东莨菪碱：水溶液加硝酸银试液，生成淡黄色凝乳沉淀，能在氨

23、试液中微溶，但在硝酸中几乎不溶；滴加氯试液，溴即游能在氨试液中微溶，但在硝酸中几乎不溶；滴加氯试液，溴即游离，加氯仿振摇，氯仿层显黄色或红棕色。离，加氯仿振摇，氯仿层显黄色或红棕色。第29页/共70页氢溴酸东莨菪碱中特殊杂质检查来 源：茄科植物颠茄、白曼陀罗、莨菪中等提取（我国，白曼陀罗的干燥品：洋金花中提取东莨菪碱，制成氢溴酸盐）制 法：洋金花粗粉乙醇/渗漉渗漉液减压蒸馏浸膏H2SO4/提取酸性提取液Na2CO3,CHCl3/提取总生物碱Na2CO3,CHCl3/分离东莨菪碱HBr/成盐氢溴酸东莨菪碱（粗品）75%C2H5OH/精制成品第30页/共70页氢溴酸东莨菪碱中特殊杂质检查 酸度酸度

24、取本品取本品0.500.50g g，加水加水1010mlml溶解后，依法测定（附录溶解后，依法测定（附录 HH），），pHpH值应为值应为4.04.05.55.5。强酸弱碱强酸弱碱 其他生物碱其他生物碱取本品取本品0.100.10g g，加水加水2 2ml ml 溶解后，分成两等份：一份中加氨试液溶解后，分成两等份：一份中加氨试液2 23 3滴，不得发生浑浊；另一份中加氢氧化钾试液数滴，只许发滴，不得发生浑浊；另一份中加氢氧化钾试液数滴，只许发生瞬即消失的类白色浑浊。生瞬即消失的类白色浑浊。阿扑阿托品、颠茄碱阿扑阿托品、颠茄碱 易氧化物易氧化物取本品取本品0.150.15g,g,加水加水5 5

25、mlml溶解后，在溶解后，在15152020加高锰酸钾滴定液加高锰酸钾滴定液(0.02(0.02mol/L)0.05mlmol/L)0.05ml，1010分钟内红色不得完全消失。分钟内红色不得完全消失。阿扑阿托阿扑阿托品、其他含有不饱和双键的有机物质品、其他含有不饱和双键的有机物质第31页/共70页第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物R:-H、-Cl、-CF3、-COCH3、-SCH2CH3R:具有23碳链的二甲或二乙胺基，或含氮杂环如哌嗪和哌啶的衍生物典型药物：盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪、奋乃静、盐酸氟奋乃静、癸氟奋乃静、盐酸三氟拉嗪和盐酸硫利达嗪等吩噻嗪类药物为苯并噻嗪的衍吩噻嗪类药物为苯并

26、噻嗪的衍生物，分子结构中均含有硫氮生物，分子结构中均含有硫氮杂蒽母核，基本结构如下：杂蒽母核，基本结构如下：第32页/共70页主要的化学性质紫外吸收光谱特性硫氮杂蒽母核为共轭三环的系统，紫外区三个吸收峰值，约205nm、254nm、300nm，最强多在254nm附近，根据2位、10位取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。当母核的二价硫被氧化为砜或亚砜，则呈现四个峰值。红外吸收光谱特性由于取代基R和R的不同，具有不同的红外光谱，已被药典用于不同品种的鉴别。第33页/共70页主要的化学性质易氧化呈色硫氮杂蒽母核中的二价硫易氧化，不同的氧化剂如硫酸、硝酸、三氯化铁试液及过氧化氢等，母核易被氧化成亚砜、

27、砜等不同的产物，随取代基的不同，呈现不同的颜色，可用于鉴别。金属离子络合呈色未氧化的硫可与金属钯离子形成配位化合物，而氧化产物亚砜、砜则不能，可用于鉴别和含有测定，具有专属性。第34页/共70页鉴别试验 紫外吸收光谱鉴别紫外吸收光谱鉴别药物药物药物药物溶剂溶剂溶剂溶剂浓度浓度浓度浓度 (g/ml)g/ml)maxmax (nm)(nm)AA盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪盐酸盐酸盐酸盐酸(9(91000)1000)5 52542540.460.46915915306306盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪盐酸盐酸盐酸盐酸(0.1(0.1mol/L)mol/L)6 62492498

28、8393883937 7奋乃静奋乃静奋乃静奋乃静无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇7 72582580.650.65癸氟奋乃静癸氟奋乃静癸氟奋乃静癸氟奋乃静乙醇乙醇乙醇乙醇1010260260盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静盐酸盐酸盐酸盐酸(9(91000)1000)101025525555359553593 3盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪盐酸盐酸盐酸盐酸(1(120)20)1010256256630630盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪乙醇乙醇乙醇乙醇8 8264264与与与与315315第35页/共70页鉴别试验 氧化显色反应氧化显色反应药

29、物药物药物药物硫酸硫酸硫酸硫酸硝酸硝酸硝酸硝酸过氧化氢过氧化氢过氧化氢过氧化氢盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪显红色，渐变为淡黄色显红色，渐变为淡黄色显红色，渐变为淡黄色显红色，渐变为淡黄色盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪显樱桃红色，放置显樱桃红色，放置显樱桃红色，放置显樱桃红色，放置后颜色渐变深后颜色渐变深后颜色渐变深后颜色渐变深生成红色沉淀，加热即溶解，溶生成红色沉淀，加热即溶解，溶生成红色沉淀，加热即溶解，溶生成红色沉淀，加热即溶解，溶液由红色转变为橙黄色液由红色转变为橙黄色液由红色转变为橙黄色液由红色转变为橙黄色奋乃静奋乃静奋乃静奋乃静显深红色，放置后显深红色，放置后显

30、深红色，放置后显深红色，放置后红色渐褪去红色渐褪去红色渐褪去红色渐褪去盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静显淡红色，温热后显淡红色，温热后显淡红色，温热后显淡红色，温热后变成红褐色变成红褐色变成红褐色变成红褐色盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪生成微带红色的白色沉淀；放置生成微带红色的白色沉淀；放置生成微带红色的白色沉淀；放置生成微带红色的白色沉淀；放置后，红色变深，加热后变黄色后，红色变深，加热后变黄色后，红色变深，加热后变黄色后，红色变深，加热后变黄色盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪显蓝色显蓝色显蓝色显蓝色第36页/共70页鉴别试验与钯离子络合显色

31、鉴别方法：取本品约50mg，加甲醇2ml溶解后，加0.1%氯化钯溶液3ml，既有沉淀生成，并显红色，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。第37页/共70页鉴别试验 分解产物反应分解产物反应（如癸氟奋乃静等含氟有机药物）（如癸氟奋乃静等含氟有机药物）鉴别方法：取本品鉴别方法：取本品15152020mgmg，加碳酸钠与碳酸钾各约加碳酸钠与碳酸钾各约0.10.1gg，混匀，在混匀，在600 600 炽炽 灼灼15152020分钟，放冷，加水分钟，放冷，加水22mlml使溶解，加盐酸溶液使溶解，加盐酸溶液(12)(12)酸化，滤过，酸化，滤过，滤液加茜素锆试液滤液加茜素锆试液0.50.5mlml，应显黄色

32、。应显黄色。第38页/共70页特殊杂质检查盐酸异丙嗪 合成工艺合成工艺第39页/共70页特殊杂质检查盐酸异丙嗪杂质来源盐酸异丙嗪杂质来源使得最终合成产物变为：此异构体在丙酮中溶解度大，精制也不易除去。另外，异丙嗪不太稳定，易氧化，贮藏过程可能分解，第40页/共70页特殊杂质检查检查方法检查方法:(:(TLC)TLC)取本品，加二氯甲烷制成每取本品，加二氯甲烷制成每11mlml中含中含1010mgmg的溶液，作为供试的溶液，作为供试 品溶液；精密量取适量，加二氯甲烷稀释成每品溶液；精密量取适量，加二氯甲烷稀释成每11ml ml 中含中含0.150.15mgmg和和0.050.05mgmg的溶液，

33、作为对照溶液的溶液，作为对照溶液(1)(1)和和(2)(2)。照薄。照薄层色谱法（附录层色谱法（附录 BB）试验，吸取上述三种溶液各试验，吸取上述三种溶液各1010ll，分分别点于同一硅胶别点于同一硅胶GFGF254 254 薄层板上，以己烷丙酮二乙胺薄层板上，以己烷丙酮二乙胺(8.5:1:0.5)(8.5:1:0.5)为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254(254nm)nm)下检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于下检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3 3 个个 ；其杂质；其杂质斑点与对照溶液斑点与对照溶液(2)(2)的主斑点比较，不得更深；如有一点

34、超过，的主斑点比较，不得更深；如有一点超过，应不深于对照应不深于对照 溶液溶液(1)(1)的主斑点。的主斑点。注：避光操作；溶液临用新配。注：避光操作；溶液临用新配。第41页/共70页特殊杂质检查盐酸硫利达嗪中的有关物质检查盐酸硫利达嗪中的有关物质检查对光不稳定，无杂质对照品，对光不稳定，无杂质对照品，TLCTLC高低浓度对比法高低浓度对比法检查方法：取本品，加氯仿制成每检查方法：取本品，加氯仿制成每11mlml中约含中约含1010mgmg的溶液，的溶液，作为供试品溶液作为供试品溶液;精密量取适量，加氯仿稀释成每精密量取适量，加氯仿稀释成每11mlml中约中约含含5050gg的溶液，作为对照溶

35、液。照薄层色谱法的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法(附录附录 )试验，吸取上述两种溶液各试验，吸取上述两种溶液各55ll，分别点于同一硅胶分别点于同一硅胶GG薄层板薄层板上，以氯仿异丙醇浓氨溶液上，以氯仿异丙醇浓氨溶液(74:25:1)(74:25:1)为展开剂，展开为展开剂，展开后，晾干，先用碘化铋钾试液冰醋酸水后，晾干，先用碘化铋钾试液冰醋酸水(10:20:70)(10:20:70)的混的混合液喷雾，然后喷以过氧化氢试液，立即覆盖同样大小的洁合液喷雾，然后喷以过氧化氢试液，立即覆盖同样大小的洁净玻璃板，检视，供试净玻璃板，检视，供试 品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照品溶液如显杂质斑点，其颜

36、色与对照溶液所显的主斑点比较，不得更深。溶液所显的主斑点比较，不得更深。（避光操作）（避光操作）第42页/共70页第五节第五节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物 地西泮 阿普唑仑 奥沙西泮 氯氮卓 (diazepam)(alprozolam)(oxazepam)(chlordiazepoxide)结构特点：含氮杂原子、六元和七元环双环并合而成，其中1,4-苯并二氮杂卓类药物是目前临床应用最广泛的抗焦虑、抗惊厥药。如：地西泮、硝基地西泮、艾司唑仑、氯氮卓、阿普唑仑、三唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮等，其中，除了氯氮卓外，均为地西泮的衍生物。第43页/共70页化学性质 碱碱 性：性：非水

37、溶液滴定法测定含量非水溶液滴定法测定含量 水水 解：解：在强酸性溶液中，形成二苯甲酮衍生物，在强酸性溶液中，形成二苯甲酮衍生物，具有的特性可用于鉴别和含有测定具有的特性可用于鉴别和含有测定第44页/共70页鉴别试验1、沉淀反应氯氮卓稀盐酸溶液阿普唑仑稀盐酸溶液盐酸氟西泮水溶液氯硝西泮稀盐酸溶液碘化铋钾试液橙红色沉淀放置后颜色变深 2、水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓和奥沙西泮的盐酸溶液(12)，缓缓加热煮沸，放冷，加亚硝酸钠和碱性-萘酚试液，生成橙红色沉淀，后者放置后颜色变暗。一、化学鉴别一、化学鉴别一、化学鉴别第45页/共70页鉴别试验3 3、硫酸荧光反应：、硫酸荧光反应：苯并二氮杂卓类药物溶于硫

38、酸苯并二氮杂卓类药物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光稀硫酸在紫外光(365(365nm)nm)下显不同下显不同的颜色。的颜色。药物药物药物药物硫酸硫酸硫酸硫酸稀硫酸稀硫酸稀硫酸稀硫酸地西泮地西泮地西泮地西泮黄绿色黄绿色黄绿色黄绿色黄色黄色黄色黄色氯氮卓氯氮卓氯氮卓氯氮卓黄色黄色黄色黄色紫色紫色紫色紫色艾司唑仑艾司唑仑艾司唑仑艾司唑仑亮绿色亮绿色亮绿色亮绿色天蓝色天蓝色天蓝色天蓝色硝西泮硝西泮硝西泮硝西泮淡蓝色淡蓝色淡蓝色淡蓝色蓝绿色蓝绿色蓝绿色蓝绿色4、分解产物的反应 有机氯化合物，氧瓶燃烧法破坏，生成HCl，以5%氢氧化钠溶液吸收，硝酸酸化，显氯化物反应。第46页/共70页鉴别试验5、氯化铜焰色反应

39、分子结构含有氯元素，在铜网上燃烧发出氯化铜的绿色火焰。一、化学鉴别一、化学鉴别一、化学鉴别第47页/共70页鉴别试验二、紫外特征吸收二、紫外特征吸收药物药物药物药物溶剂溶剂溶剂溶剂浓度浓度浓度浓度 (g/ml)g/ml)maxmax (nm)(nm)AA地西泮地西泮地西泮地西泮0.5%0.5%硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液5 5242242约约约约0.510.51282282约约约约0.230.23366366氯氮卓氯氮卓氯氮卓氯氮卓盐酸盐酸盐酸盐酸(9(91000)1000)7 7245245、3083080.650.65阿普唑仑阿普唑仑阿普唑仑阿普唑仑盐酸盐酸盐酸盐酸(9

40、(91000)1000)1212264264盐酸氟西泮盐酸氟西泮盐酸氟西泮盐酸氟西泮硫酸甲醇硫酸甲醇硫酸甲醇硫酸甲醇(1(136)36)101023922392、28422842比值比值比值比值1.952.501.952.5036223622氯硝西泮氯硝西泮氯硝西泮氯硝西泮0.5%0.5%硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液101023922392，30723072奥沙西泮奥沙西泮奥沙西泮奥沙西泮乙醇乙醇乙醇乙醇1010229229，3152(3152(较较较较弱弱弱弱)IR：地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮第48页/共70页鉴别试验硅胶G薄层板，苯丙酮(

41、3:2)为展开剂，稀硫酸喷雾，105干燥30min，紫外灯下检视荧光斑点：药物药物药物药物RRf f值值值值斑点颜色斑点颜色斑点颜色斑点颜色*单一点样单一点样单一点样单一点样混合点样混合点样混合点样混合点样自然光自然光自然光自然光254254nmnm365365nmnm地西泮地西泮地西泮地西泮0.800.800.780.78无色无色无色无色黄色黄色黄色黄色(m)m)黄色黄色黄色黄色(m)m)氯氮卓氯氮卓氯氮卓氯氮卓0.340.340.340.34无色无色无色无色蓝紫色蓝紫色蓝紫色蓝紫色(s)s)蓝紫色蓝紫色蓝紫色蓝紫色(w)w)艾司唑仑艾司唑仑艾司唑仑艾司唑仑0.220.220.200.20无

42、色无色无色无色灰紫色灰紫色灰紫色灰紫色(m)m)蓝紫色蓝紫色蓝紫色蓝紫色(m)m)硝西泮硝西泮硝西泮硝西泮0.720.720.720.72黄色黄色黄色黄色紫色紫色紫色紫色(w)w)紫色紫色紫色紫色(w)w)奥沙西泮奥沙西泮奥沙西泮奥沙西泮0.490.490.520.52黄色黄色黄色黄色亮灰蓝色亮灰蓝色亮灰蓝色亮灰蓝色(s)s)亮灰蓝色亮灰蓝色亮灰蓝色亮灰蓝色(s)s)*s,m,w分别表示荧光的强、中、弱三、薄层色谱法三、薄层色谱法第49页/共70页鉴别试验酸水解产物的薄层色谱法苯并二氮杂卓类经酸水解后生成二苯甲酮衍生物，但专属性差，不同的药物可能水解产生相同的二苯甲酮衍生物（三唑仑、阿普唑仑等

43、经水解后不产生二苯甲酮衍生物，可以区别）。第50页/共70页特殊杂质检查TLC是本类药物较为常用的检查方法 例：地西泮检查方法：取本品，加丙酮制成每1ml 中含100mg 的溶液，作为供试品溶液；精密 量取适量，加丙酮稀释成每1ml 中含0.3mg 的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附 录 B）试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以醋酸乙酯己烷(1:1)为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。第51页/共70页特殊杂质检查HPLC法在杂质检查中的应用也逐渐增加例：氯氮卓（USP24、BP

44、2000采用薄层色谱法）HPLC检查法：色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相：甲醇磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氢氧化钠调pH6.0；流速1ml/min，检测波长254nm。结果：灵敏度高，可检测未知结构的痕量杂质。第52页/共70页特殊杂质检查HPLC法用于地西泮降解产物的检查色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水(70:30)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按地西泮峰计算应不低于1500，地西泮峰和内标物质峰的分离度应符合要求。检查方法：取本品，加甲醇分别制成每1ml中含1mg的供试品溶液和每1ml中含5g的对照溶液。照含量测定项下的色

45、谱条件进行试验，取对照溶液10l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的10；再准确量取上述两种溶液各10l分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍，供试品溶液的色谱图中主成分峰之后如显示杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液主成分峰的峰面积。第53页/共70页 第六节第六节 含量测定含量测定 高效液相色谱法高效液相色谱法非水溶液滴定法非水溶液滴定法铈量法铈量法比色法比色法紫外分光光度法紫外分光光度法气相色谱法气相色谱法第54页/共70页非水溶液滴定法原理一般方法冰醋酸作为溶剂，若滴定氢卤酸盐，则加5%醋酸汞的冰醋酸溶液，用高氯酸(0.1mol/L)滴

46、定，并用空白试验校正。问题讨论适用范围：Kb10-8的有机碱盐酸根影响：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸滴定剂稳定性：温度、贮藏条件都有影响终点指示方法：结晶紫指示剂，电位法第55页/共70页非水溶液滴定法vv应用实例应用实例游离弱碱性药物：地西泮、尼克刹米或氯氮卓，基于氮原子的弱碱性可游离弱碱性药物：地西泮、尼克刹米或氯氮卓，基于氮原子的弱碱性可以结晶紫为指示剂，非水溶液直接滴定，终点颜色绿色蓝绿色蓝色以结晶紫为指示剂，非水溶液直接滴定，终点颜色绿色蓝绿色蓝色不等。不等。氢卤酸盐类药物：加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成难电离的卤氢卤酸盐类药物：加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成难电离的卤化汞，

47、再用高氯酸滴定，可用结晶紫、橙黄化汞，再用高氯酸滴定，可用结晶紫、橙黄作为指示剂，或用电位法作为指示剂，或用电位法指示终点。指示终点。硫酸盐类药物：硫酸为二元酸，但在非水介质中只显示一元酸解离为硫酸盐类药物：硫酸为二元酸，但在非水介质中只显示一元酸解离为HSOHSO4 4-第56页/共70页硫酸奎宁的非水滴定3H+H+第57页/共70页硫酸奎宁的非水滴定第58页/共70页 非水溶液滴定法应用实例硝酸盐的滴定：由于硝酸的氧化性破坏指示剂变色，用电位法指示终点磷酸盐与有机酸盐：直接滴定第59页/共70页铈量法原理：氧化还原适用范围：硝苯地平邻二氮菲指示剂(还原型)红色 (氧化型)浅蓝色C12H8N

48、2溶于亚铁盐溶液吩噻嗪类药物自身颜色的变化+Free radical 红色自由基Bivalent cation 二价阳离子，无色第60页/共70页比色法一、酸性染料比色法原理：在适当的介质中，碱性药物(B)可与氢离子结合成(BH+)，而一些酸性染料可解离为(In-)，两者定量结合成有色络合物(BH+In-)离子对，可被有机溶剂定量提取，在一定波长处测定其吸收，即可算出碱性药物的含量。第61页/共70页对照品溶液的制备 精密称取在120干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制

49、备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硫酸阿托品2.5mg），置50ml量瓶中，加水振摇使硫酸阿托品溶解并稀释至刻度，用干燥滤纸滤过，收集续滤液，即得。测定方法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液取溴甲酚绿50mg与邻苯二甲酸氢钾1.021g，加0.2mol/L氢氧化钠溶液6.0ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要时滤过2.0ml，振摇提取2min后，静置使分层，分取澄清的氯仿液，照分光光度法（附录 B），在420nm的波长处分别测定吸收度，计算，并将结果与1.027 相乘，即得供试量中含有(C17H

50、23N O3)2H2SO4H2O的重量。例：硫酸阿托品片的含量测定例：硫酸阿托品片的含量测定例：硫酸阿托品片的含量测定第62页/共70页比色法一、酸性染料比色法影响因素水性最佳pH值：使得BH+和In-最多酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；可稍过量有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分第63页/共70页比色法二、钯离子比色法原理：吩噻嗪类药物的二价硫在pH20.1缓冲液中可与钯离子(Pb2+)形成红色络合物，10min呈色完全，可稳定2hour，在500nm波长附近有最大吸收，最适宜范围50g 250g第64页/共70页紫外分光光度法直接分光光