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1、版权所有，侵权必究！1页 高二生物教学案（52）姓名 班级 学号 课题 血红蛋白的提取和分离 主备：毛银兰 审校：仲娟 预 习 完 成 学习目标：本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。学习重点和难点：学习重点：凝胶色谱法的原理和方法。学习难点：色谱柱制作、填料的处理、色谱柱的装填和样品的加入与处理。预习内容 凝胶色谱操作 (1)凝胶色谱柱的制作 柱底部的制作 a选择合适的橡皮塞，中间打孔。b在橡皮塞顶部切出锅底状_，在 0.5 mL 的_头部切下_长的
2、一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。c剪尼龙网小圆片覆盖在_。用_的尼龙纱将橡皮塞_包好，插到玻璃管一端。d色谱柱下端用移液管头部作_，连接一细的_，并用_控制尼龙管的_与_，另一端放入收集_的收集器内。柱顶部的制作：插入安装了玻璃管的橡皮塞。(2)凝胶色谱柱的装填 填充材料：交联葡聚糖凝胶。方法：凝胶用_充分溶胀后，配成_，在与色谱柱下端连接的尼龙管打开的情况下，一次性缓慢倒入_。装填完后，立即连接_，在_高的操作压下，用 300 mL 的 20 molL1的磷酸缓冲液充分_平衡凝胶 12 h，使凝胶装填_。(3)样品的加入和洗脱 加样前：打开流出口，使柱内凝胶面上的_下降到
3、与_平齐，关闭出口。加样：用_将 1 mL_的样品加到色谱柱的_。加样后：打开_，使样品渗入凝胶床内，等完全进入后，关闭下端出口。小心加入缓冲液到_，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每_收集一管，连接收集。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 判断_的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质的鉴定。巩固练习 1初步分离血红蛋白的实验中用到的缓冲溶液为 ()AH2 CO3一 NaHCO3缓冲液 BNH4OHNH4Cl 缓冲液 CCH3 COOHCH3 COONa 缓冲液 DH3PO4缓冲液 2蛋白质提取和分离分为哪几步 ()A样品处理、凝胶色谱操作、S
4、DS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳 B样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 3 血红蛋白因含有什么物质而呈红色 ()AO2 BCO CCO2 D血红素 4下列操作正确的是 （）A分离红细胞时采用低速长时间离心 B红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可 C分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D透析时要用 20mmol/l 的磷酸缓冲液，透析 12h 5使用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的迁移速度完全取决于 ()A电荷的多少 B分子的大小 C肽链的多少 D分子形状的差异 6洗涤红细胞的目的是 ()A去除血清 B去除杂蛋白 C
5、除去血小板 D除去水 7制作凝胶色谱柱时，橡皮塞顶部凹穴内插入的移液管的部位及长度是 ()A移液管头部 5 cm B移液管尾部 5 cm C移液管头部 3 cm D移液管尾部 3 cm 8下列有关凝胶色谱法中样品的加入和洗脱的叙述中，正确的是 ()A先加入 1 mL 透析后的样品 B加样前要使缓冲液缓慢下降，全部流出 C如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功 D洗脱时可以用缓冲液也可以用清水 9装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管应 ()A先打开后关闭 B关闭 C先关闭后打开 D打开 10血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是 ()A磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 B血红
6、蛋白是一种两性物质，需要酸中和 C防止血红蛋白被 02氧化 D让血红蛋白处在稳定的 pH 范围内，维持其结构和功能 11在盛有红褐色的 Fe(OH)3，胶体的 U 形管的两个管口，各插一个电极，通直流电后，发现 阴极附近的颜色逐渐加深，这说明 ()AFe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阴极移动 BFe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阳极移动 CFe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阳极移动 DFe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阴极移动 12凝胶色谱法操作正确的是 （）A将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴 B将橡皮塞下部切出凹穴 C插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面 D将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片 13样品的加入和洗脱的操作不正确的是 （）A 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D用吸管小心的将 1ml 透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 14相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个 ()版权所有，侵权必究！2页 版权所有，侵权必究！3页