《第六章-动物实验的基本方法课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第六章-动物实验的基本方法课件.ppt（65页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、第六章第六章动物实验的基本技术方法动物实验的基本技术方法一一.动物实验前的准备动物实验前的准备动物实验前的理论准备动物实验前的理论准备:实验动物方面的基础知识实验动物方面的基础知识实验动物方面的基础知识实验动物方面的基础知识;选题选题选题选题;方案的制订方案的制订方案的制订方案的制订;方法方法方法方法的选定的选定的选定的选定动物实验前的条件准备动物实验前的条件准备:实验仪器、药品、试剂、实验动物实验仪器、药品、试剂、实验动物实验仪器、药品、试剂、实验动物实验仪器、药品、试剂、实验动物 预备实验预备实验二二动物实验的设计与分组动物实验的设计与分组1.设计原则：对照性原则：设对照组，应有可比性，分
2、为自体对照和组间对照一致性原则：对照组和试验组除处理因素外，其他因素保持一致重复性原则 同一处理要设多个样本例数，为估计试验误差、降低试验误差、增强代表性，提高实验结果的精确度随机性原则：随机分组客观性原则 实验设计、选择观察指标以及结果判断要客观2.差异的控制：差异的控制：差异的来源：实验者；动物；动物与环境的相互作用u实验者带来的差异 实验过程的实施：不准确的测量 u动物与环境相互作用引起的差异群居因素，每个笼盒饲养动物数量动物与实验操作过程之间的相互作用引起饲养操作与实验操作的顺序实验操作引发的动物之间的影响三三.实验动物的领取实验动物的领取明确实验所用动物的品种、品系、规格、等级、以及
3、实验的大致时间表填写动物申领计划表，教研室主任签字生效填写动物领用表,确定所领动物的品种、品系、规格、数量四.实验动物的抓取和固定 l小鼠的抓取和固定小鼠的抓取和固定抓取方法抓取方法 图图61 小鼠抓取小鼠抓取l大鼠的抓取与固定大鼠的抓取与固定 抓取方法抓取方法固定方法固定方法:徒手固定徒手固定;固定板固定固定板固定;卵圆钳固定卵圆钳固定豚鼠的抓取与固定豚鼠的抓取与固定 抓取方法抓取方法 固定方法固定方法 徒手固定徒手固定固定板固定固定板固定 图 豚鼠抓取和保定图 兔抓取和保定 图图 狗嘴捆绑保定的方法狗嘴捆绑保定的方法猪的抓取与固定猪的抓取与固定 抓取方法抓取方法固定方法固定方法五五.动物的
4、编号、标记及去毛方法动物的编号、标记及去毛方法 动物的编号与标记：动物的编号与标记：常用的标记液：常用的标记液：3%5%苦味酸溶液（黄色）苦味酸溶液（黄色）0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）中性红或碱性品红溶液（红色）2%硝酸银溶液（咖啡色，涂后需光照硝酸银溶液（咖啡色，涂后需光照10分钟）分钟）煤焦油酒精溶液（黑色）煤焦油酒精溶液（黑色）图 个体染色标记法编号原则：编号原则：先左后右，从前到后。左前肢记为先左后右，从前到后。左前肢记为1 1号，号，左侧腹部为左侧腹部为2 2号，左后肢号，左后肢3 3号，头顶部为号，头顶部为4 4号，号，腰背部腰背部5 5号，尾基部号，尾基部6 6号，右前肢
5、号，右前肢7 7号，右侧号，右侧腹部腹部8 8号，右后肢号，右后肢9 9号。编号超过号。编号超过1010时，可时，可使用两种不同颜色的溶液，把一种颜色作使用两种不同颜色的溶液，把一种颜色作为个位数，另一种为十位数。为个位数，另一种为十位数。六六.实验动物被毛的去除方法实验动物被毛的去除方法 1.剪毛法剪毛法 2.拔毛法拔毛法 3.剃毛法剃毛法 4.脱毛法脱毛法常用的化学药品：常用的化学药品：硫化钡（硫化钡（BaSBaS）、硫化钠）、硫化钠（NaSNaS）、硫化钙（）、硫化钙（CaSCaS）七七.动物的麻醉方法动物的麻醉方法常用的麻醉剂常用的麻醉剂 1.挥发性麻醉剂挥发性麻醉剂:乙醚、氯仿等乙醚
6、、氯仿等 2.非非挥挥发发性性麻麻醉醉剂剂：苯苯巴巴比比妥妥钠钠、戊戊巴巴比比妥妥钠钠、硫硫喷喷妥妥钠钠等等巴巴比比妥妥类类的的衍衍生生物物，盐盐酸氯胺酮、水合氯醛等酸氯胺酮、水合氯醛等 3.中药麻醉剂：中药麻醉剂：洋金花、东莨菪碱等洋金花、东莨菪碱等 动物的麻醉方法动物的麻醉方法1全身麻醉全身麻醉 吸入法吸入法:腹腔和静脉给药麻醉法腹腔和静脉给药麻醉法 2.局局部部麻麻醉醉:盐盐酸酸普普鲁鲁卡卡因因、盐盐酸酸可可卡卡因因、利利多卡因多卡因麻醉注意事项麻醉注意事项:静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张性、角膜反射和对皮肤夹捏的反应，当这些活动明显减弱或消失时，停止注射。麻醉时要注意保温。保温方法
7、有：实验桌内装灯，电褥，台灯照射等 作慢性实验时，在寒冷季节，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平。注意保持动物的呼吸道的通畅，麻醉前禁食.八八.动物的给药途径和方法动物的给药途径和方法实实验验动动物物的的给给药药方方法法主主要要分分为为注注射射法法和和投投入入法法两两种种，注注射射法法又又分分为为：皮皮下下注注射射、肌肌肉肉注注射射、腹腹腔腔注注射射、脑脑膜膜下下注注射射、脑脑内内注注射射、胸胸腔腔内内注注射射、腰腰椎椎内内注注射射、静静脉脉注注射射、关关节节腔腔注注射射和和心心内内注注射射等等方方法法，投投入入法法可可分分为为：鼻鼻腔腔内内投投入入、胃胃腔腔内内投投入入、肠肠管管内内投投入入
8、、气气管内投入以及经口腔投入。管内投入以及经口腔投入。图图 大小鼠的灌胃大小鼠的灌胃皮内注射（皮内注射（i.d）:观察皮肤血管的通透性变化及观察皮肤血管的通透性变化及观察皮内反应，多用于接种、致敏实验等。雄性观察皮内反应，多用于接种、致敏实验等。雄性较雌性皮肤紧密，注射难度大。较雌性皮肤紧密，注射难度大。肌肉注射（肌肉注射（i.mi.m）：）：较少应用较少应用 腹腔注射（腹腔注射（i.pi.p）:静脉注射（静脉注射（i.v）：）：一般采用尾静脉注射。小鼠尾一般采用尾静脉注射。小鼠尾部背腹各有一根动脉，两侧各有一根静脉。部背腹各有一根动脉，两侧各有一根静脉。图图 小鼠尾静脉注射小鼠尾静脉注射大鼠
9、的给药途径和方法大鼠的给药途径和方法灌灌胃胃:左左手手按按徒徒手手固固定定方方式式固固定定大大鼠鼠,使使大大鼠鼠伸伸开开两两前肢前肢,手掌握住大鼠背。方法与小鼠相同。手掌握住大鼠背。方法与小鼠相同。皮皮下下注注射射：常常选选在在左左侧侧下下腹腹部部或或后后腿腿皮皮肤肤处处，方方法同小鼠。法同小鼠。皮皮内内注注射射：常常选选用用背背部部脊脊柱柱两两侧侧的的皮皮肤肤，方方法法同同小鼠。小鼠。肌肉注射：肌肉注射：一般选择股二头肌注射，但应避一般选择股二头肌注射，但应避免伤及坐骨神经，否则会导致后肢瘫痪免伤及坐骨神经，否则会导致后肢瘫痪 腹腔注射：腹腔注射：用左手的大拇指、食指和中指用左手的大拇指、食
10、指和中指从大鼠的前肢和头部后面抓住大鼠，同时从大鼠的前肢和头部后面抓住大鼠，同时用身体抵住大鼠的两后肢使之固定，使腹用身体抵住大鼠的两后肢使之固定，使腹部向上并伸展，注射方法与小鼠相同。部向上并伸展，注射方法与小鼠相同。静脉注射：静脉注射：尾静脉尾静脉豚鼠的给药途径和方法经口给药：固体药物的投入液体药物的投入皮下注射：大腿内侧面、背部、肩部等皮下脂肪少的部位皮内注射：脊柱两侧肌肉注射：大腿外侧肌肉腹腔注射静脉注射：耳缘静脉外侧跖静脉兔的给药途径和方法兔的给药途径和方法灌胃：确保灌胃管插入胃内；药液推完后将残留在灌胃管内的药物用水冲入胃内，确保给药剂量的准确皮内注射：背部脊柱两侧的皮肤皮下注射：
11、背部和腿部皮肤肌肉注射腹腔注射静脉注射：耳缘静脉 图图 兔的灌胃兔的灌胃 图图 兔的耳静脉注射兔的耳静脉注射犬的给药途径和方法经口给药：液体药物的投入：同兔固体药物的投入皮下注射肌肉注射腹腔注射静脉注射：头静脉、小隐静脉、正中静脉、大隐静脉等 图图 狗的小隐静脉注射狗的小隐静脉注射猴的给药途径和方法经口给药：固体药物的投入液体药物的投入皮下注射肌肉注射静脉注射图图 猴的后肢皮下静脉注射猴的后肢皮下静脉注射猪的给药途径和方法猪的给药途径和方法 灌胃、皮下（耳根）、皮内（耳壳外侧或腹侧）、腹腔注射、静脉注射（耳缘静脉）实验动物用药量的确定及计算方法实验动物用药量的确定及计算方法动物给药量的确定：动
12、物给药量的确定：先用小鼠粗略的探索中毒剂量或致死剂量，然后用小于中毒量的剂量或致死量的若干分之一为应用剂量，一般可取1/10-1/15。植物药粗制剂的剂量多按生药折算化学药品可参考化学结构相似的已知药物，特别是化学结构和作用都相似的药物的剂量。确定剂量后，若第一次实验的作用不明显，动物也没有中毒的表现，可加大剂量再次实验。最好同时用几个剂量做实验。用大动物进行实验时，开始的剂量可用给鼠类剂量的1/15-1/2。确定动物给药剂量时，要考虑动物的年龄大小和体质强弱确定动物给药剂量时，也要考虑因给药途径的不同，所用剂量也不同。实验动物用药量的计算方法 一般按mg/kg体重或g/kg体重计算，应用时须
13、从已知药液的浓度换算出相当于每kg体重应注射的药液量（ml数），以便给药人与动物及各类动物间药物剂量的换算方法人与动物用药量的换算：动物对药物的耐受性比人大，一般可按此比例：人用药量为1，小鼠、大鼠为25-50，兔、豚鼠为15-20，狗、猫为5-10。也可采用人与动物的体表面积计算法来换算人的体表面积计算法：许文生氏公式 体表面积（cm2)=0.0061身高（cm)+0.0218 体重(kg)-0.1529动物的体表面积计算法：Meeh-Rubner公式 W（体重，g）2/3 A（体表面积，m2)=K 10000 K是常数，大、小鼠为9.1；豚鼠9.8；兔10.1；猫9.8；狗11.2；猴11
14、.8 九.动物血液的采集方法(一)大小鼠的血液采集方法眶静脉丛（窦）采血（多次重复）：轻压颈部两侧，眼球充分外突眶动脉和眶静脉取血（大量采血）：尽量使动物眼周围皮肤往眼后压，眼球突出充血，弯头镊迅速夹去眼球尾静脉采血：剪尾或切开尾静脉：将尾巴在热水中浸泡数分钟或用酒精/二甲苯反复擦试针刺尾静脉其它：心脏采血、大血管采血等(二)兔、豚鼠的血液采集方法耳中央动脉采血：兔耳缘静脉采血：兔心脏采血：兔、豚鼠颈动（静）脉采血：背跖静脉采血：豚鼠(三)犬的血液采集方法前后肢皮下浅层静脉采血：颈静脉采血隐动（静）脉采血股动脉采血心脏采血(四)猪的血液采集方法耳大静脉心脏采血(五)猴的血液采集方法前肢头静脉后
15、肢皮下静脉十十.动物的安乐死方法动物的安乐死方法一.原则：尽量减少动物的痛苦，避免产生惊恐、挣扎、喊叫注意实验人员的安全方法容易操作不能影响实验结果尽可能缩短致死时间判断是否死亡时不仅要看呼吸，而且要观察神经反射、肌肉松弛等情况二二.方法方法颈椎脱臼法：大、小鼠、豚鼠、兔空气栓塞法：兔、猫、犬放血法：大、小鼠、豚鼠、兔、猫、犬断头法：大、小鼠、沙鼠药物法：药物吸入：大、小鼠、豚鼠等；CO2、CO、乙醚、氯仿等药物注射：兔、犬静脉注射 氯化钾、巴比妥类麻醉剂、DDT等病理解剖与取材病理解剖：动物麻醉后固定好，依次打开胸、腹腔，观察脏器形态病理组织学取材：病理切片、染色及组化用 ：10%甲醛溶液作
16、为固定液 ：取样要有代表性，包括病灶及周围组织 ：组织块大小1-1.5cm，厚度不超过0.2cm ：组织要完整，注意夹捏组织时别弄破，减少人为的组织损伤 :固定液要淹没组织块，最好每个组织块单瓶固定，瓶体上标注好组别、动物编号、组织名称、组织块数量、取材时间等内容。电镜超薄切片取材：4%戊二醛固定 ：用刀片切成1cm3大小的组织块，避免反复切割组织造成人为损伤，取材要迅速，尽快放入固定液中 :固定液要淹没组织块，每个组织块单瓶固定，瓶体上标注好组别、动物编号、组织名称、取材时间等内容。动物实验中的饲养管理单性别分笼饲养 性别鉴定：生殖孔与肛门之间的距离，雄性比雌性长动物个体标记：染色法各组别笼
17、盒进行标记，按顺序放置饲养密度：注意房间的温湿度、通风换气、光照等环境因素饲养管理：不间断饮食 ：及时更换垫料与笼盒：一般小鼠每周至少更换一次垫料，大鼠一周两次；笼盒与垫料一起更换，并进行清洗与灭菌处理 ：及时添加饲料、更换饮水，饮水原则上整瓶更换，半瓶时倒掉后瓶体清洗灭菌 ：每日至少进入动物房观察1次，饲养操作与观察尽量固定时间 ：房间每周至少清扫一次，最好用消毒药水进行必要的擦洗。：更换的垫料及废弃物不得随便丢弃，动物尸体单独包装后送至冷库，集中焚烧处理。论文中有关实验动物和动物实验的描述论文中有关实验动物和动物实验的描述动物的品种、品系、规格、性别、数量、分组、来源动物的品种、品系、规格
18、、性别、数量、分组、来源 品种、品系名称要写全，不能用缩写；明确所选用动物的年（月、周）龄、体重（平均数标准差）；性别（单一性别或雌雄各半）；数量（每个实验组几只）；来源（动物供应单位，生产或使用许可证号）如：40只8-10周龄成年健康C57BL/6J小鼠，购自中科院上海实验动物中心（SCXK（沪）2008-1021）。雌雄各半，体重为20.4 1.23g，随机分成4组，每组10只。动物饲养的环境与条件 动物自由采食和饮水，小动物（大、小鼠）饲养于屏障系统内，一般要写出屏障系统的主要技术指标，如写成“饲养于温度为21 2，湿度为50 5%的屏障系统内”动物实验所用方法 如采血、给药以及动物处死的方法等，写法要规范。如灌胃、眶静脉丛采血、颈椎脱臼处死等。