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1、#有限公司 研发部#辐 照 灭 菌 确 认 方 案 验证方案审批表 一、验证方案拟订表 方案起草人 方案起草日期 二、验证方案审核 审核人（签名）日 期 三、验证方案批准 批准人（签名）：批准日期：年 月 日 方案执行日期：年 月 日 四、验证执行小组成员 成 员 签 名 组 长 副组长 小组成员 目 录 1.主要内容和适用范围 2.辐照剂量测定 2.1 原理 2.2 选择 SAL 和获得产品样品 2.3 测定初始污染菌 2.3.1 初始污染菌的计算 2.3.2 初始污染菌的测定 2.3.3 校正系数的测定 2.3.4 产品释出物的检验 2.4 建立验证剂量 2.5 完成验证剂量实验 2.6
2、建立灭菌剂量 3.辐照灭菌加工确认 4.验证总结报告书#辐照灭菌确认方案 1主要内容和适用范围 本文对于#的灭菌确认过程做了详细描述，确认的内容包括辐照剂量的设定及辐照加工确认。本方案制定的目的在于证实产品辐照符合 ISO11137-2006的要求，灭菌后的产品能达到 10-6的无菌保证水平。2辐照灭菌剂量设定 原理 验证的原理是基于 ISO11137 方法，即先对辐照前产品的初始污染菌进行测定，然后选择验证剂量。再用验证剂量对产品进行辐照，并测定存活微生物的样品件数，以此来确定最低灭菌剂量（SAL=10-6）。选择 SAL 和获得产品样品 该产品的 SAL 选定为 10-6，收集常规生产的标
3、准包装产品，于灭菌前对三个批号进行随机抽样，每批至少抽取 10 个样品，其中取样比例（SIP）为 1。测定初始污染菌 测定至少 30 个样品单元的每件样品的初始污染菌并计算，a)三批中的每一批的平均的单元产品初始污染菌（批平均），和 b)所有的单元产品平均初始污染菌（总平均初始污染菌）。ISO11137-2006 或 GB/T18280-2007 中，测定至少 30 个样品单元的每件样品的初始微污染菌并计算：批平均值和总平均值。当初始污染菌较低（如小于 10）；允许集中检测单独一批中 10 个单元产品来确定批平均初始污染菌。将三批产品的每批平均初始污染菌与总平均初始污染菌比较，确定是否有一批平
4、均值是总平均值的两倍或两倍以上。确定初始污染菌测定中是否提供了校正因子，建立测定校正因子的方法。初始污染菌测定 测定依据：ISO11737-1：1995 试验方法：（平板计数法）1)洗脱液：无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾，磷酸氢二钠，氯化钠，蛋白胨，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。2)样品处理：取样品 10cm2，剪碎，加无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 10ml，浸泡，振摇，作为 1:10 的供试液。3)需气菌培养：取供试液 1ml，置直径 90mm 的无菌平皿中，注入 1520ml 温度不超过 45的溶化的营养琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。4)霉菌培养：取供试液 1ml，
5、置直径 90mm 的无菌平皿中，注入 1520ml 温度不超过 45的溶化的玫瑰红钠培养基，混匀，凝固，倒置培养。5)计数：除另有规定外，细菌培养 48 小时，逐日点计菌落数，一般以 48 小时的菌落数报告；霉菌、酵母菌培养 72 小时，逐日点计菌落数，一般以 72小时的菌落数报告；必要时，可适当延长培养时间至 57 天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于 15，则两个平板的菌落数不能相差1 倍或以上。结果：批 号 样品号 需气菌(cfu/件)霉菌(cfu/件)需气菌(cfu/件)霉菌(
6、cfu/件)需气菌(cfu/件)霉菌(cfu/件)1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均数 批平均初始污染菌为 （cfu/件）总平均初始污染菌为 （cfu/件）根据 ISO11737-1 中描述的初始污染菌的确定方法进行试验，测定校正因子，该因子取自对活菌计数的初始污染菌检测技术的验证。测定依据：ISO11737-1:1995 试验方法：1）标准菌株准备：取枯草杆菌黑色变种（ATCC9372），传代培养，制成 100cfu/ml备用。2）洗脱液准备：无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾，磷酸氢二钠，氯化钠，蛋白胨，加水 1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。3）制备悬液稀释液，使
7、中含有 100 个芽孢。向随机抽取的 10 个产品上接种该稀释悬液，并在层流下进行干燥。4）用洗脱液对接种的产品进行洗脱，测定洗脱的芽孢数，并计算平均值。100除以平均芽孢数即为回收率的校正系数。样品编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 芽孢数 平均芽孢数：校正系数：产品释出物的检验 测定依据：ISO11737-1：1995 试验方法：1)标准菌株准备：取枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）,白色念珠菌（ATCC10231），传代培养，制成 100cfu/ml 备用。2)产品处理：取灭菌产品以无菌操作转移到 100mlSCDB 培养基中，3035培养 24h。3)接种：以无菌操作接种
8、标准菌于上述产品 SCDB 培养基中，2832培养出现阳性结果或是至少培养 7 天。用标准平板计数法进行微生物计数（CFU）。结果：微生物 ATCC 接种量（cfu）产品SCDB标准菌 对照 SCDB+标准菌 枯草杆菌黑9372 色变种 白色念 珠菌 10231 结论：。建立验证剂量 根据初始污染菌的结果和 ISO11137：2006 方法 1 中的表 5，建立合适的验证剂量。具体方法为：a)如果一批或更多批次平均初始污染菌等于或大于总平均初始污染菌的两倍，则使用最高批次值；b)如果批次平均初始污染菌的每一个小于总平均初始污染菌的两倍，则使用总平均初始污染菌。根据初始污染菌的测定试验结果，得到
9、该产品三批的批平均初始污染菌和总平均初始污染菌分别为 （cfu/件）和 （cfu/件），最高批次值为 （cfu/件），因此选择 （cfu/件）作为初始污染菌。（cfu/件）。按照ISO11137 方法1 中的表5 查得该校正过的初始污染菌对应的验证剂量为 kGy(SAL=10-2)，指定这个剂量作为灭菌剂量。如果平均初始菌在表 5 中没有给出，则用比实际计算的初始污染菌大些的，最接近表中数值的平均初始污染菌。完成验证剂量试验 概述 从批次 产品中选择100 件产品进行验证剂量试验，在浙江佳翔辐照技术有限公司进行辐照。采用确定的灭菌剂量进行辐射处理，所照剂量用该公司放置的剂量计测定剂量，保证所测
10、剂量落在规定剂量的10%之内。最高剂量不能超过灭菌验证剂量的 10%，如果计算的辐照样品的平均剂量少于验证剂量的90%，则验证剂量实验要重做。如果样品吸收剂量比验证剂量的 90%少，并且实施无菌实验时，观察到的结果是可接受的（100 个无菌试验的阳性个数不超过 2个，则验证可以接受），则验证实验不需重做。辐照处理试验 剂量计布放 应说明剂量计布放示意图，每一剂量计的测定数据，并通过数据判定所测计量是否在规定剂量的范围内。由于本公司辐照灭菌属委托加工，该部分实验报告可由委托加工公司出具。无菌检验 剂量计测定结果判定合格后，对经辐照处理的样品进行无菌检验。试验依据：ISO11732:1998 试验
11、方法：1)样品测试接种均应按无菌操作法（在 100 级净化工作台内）进行。2)无菌打开包装，用灭菌剪刀、镊子，将产品转移至SCDB 培养基中。3)将样品培养基放 2832温箱中培养 14 天。4)观察有无细菌生长。结果：无菌试验检验结果 试验样品 试验数量 培养基 温度（）培养天数 阳性数 1 50ml SCDB 28-32 结论：经测试，试验产品阳性菌数为 ，经验证剂量辐照后的无菌检查结果为 。建立灭菌剂量 如果实验使用整个产品，并且验证剂量是可以接受的，从表 5 中得到最接近平均初始污染菌的单元产品的灭菌剂量，该初始污染菌与单元产品的平均初始污染菌相等或者跟大，读出达到 10-6SAL 所需的辐照剂量，该剂量定为生物型无菌护创膜产品常规辐照灭菌的最低剂量，最高剂量通常按照最低剂量的两倍来制定。3 辐射灭菌加工确认 该部分用于确认在建立的灭菌剂量下，#产品辐照灭菌过程的有效性，确定辐射灭菌过程运行参数在规定的范围内，保证产品的灭菌质量。该部分应由委托加工公司出具的辐照加工确认报告，应遵守 GB 11137-2006 医疗器械保健产品灭菌辐照灭菌的相关规定。4.验证总结报告书 验证名称 生物型无菌护创膜灭菌确认 产品批号 规格 考察时间点 留样日期 考察日期 报告人 验证过程及记录：评价：建议：审核人（签字）：审核日期：批准人（签字）：批准日期：