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1、大小鼠眼眶取血方法附图大小鼠眼眶取血方法附图第1页，本讲稿共22页交流提纲交流提纲实验环境实验环境实验材料实验材料动物处理动物处理取取血血容容量量时间安排时间安排具体操作具体操作.血样处理血样处理问题讨论问题讨论大鼠大鼠 PK PK取血取血第2页，本讲稿共22页环境 材料B 毛细管 0.9mm 100mm，看个人习惯使用，经常一管三断，30mm/管，弃去中间段。EP 管 加入0.1%肝素钠（150U/mg）0.1 mL，均匀润湿，50以下干燥；适用 1mL 全血的抗凝，效果良好。取血时必须提前检查管的质量，标号分组，适当多备。C 抗凝EP管D 计时工具A 通风台面 长时间操作，透气通风 宽敞台
2、面，便于多组多步骤同时操作Page 3第3页，本讲稿共22页Page 4动物处理动物处理 实验期间，补充体液，目前常规为：取血后灌胃给予等统计生理盐水/葡萄糖溶液。动物 体重要求 一般 不低于250g给药前 禁食12-24h，给药前 提前 0.5-1.0h 按0.5-1.0%（V/W）给水实验之后，外用消炎药涂布眼部第4页，本讲稿共22页Page 5容量 时间 注射 一般 呈现 降低 趋势，给药后较短时间内采集的点数适当增加；灌胃 存在Cmax-tmax，需通过考察tmax，根据一般原则，适当调整时间间隔。取取血血 容容量量 时间时间 安排安排选点一般原则选点一般原则预实验建立药物性质药物性质
3、给药途径给药途径分布相分布相分布相分布相 3-4 3-4个点个点个点个点吸收相吸收相吸收相吸收相 3-4 3-4个点个点个点个点吸收相吸收相吸收相吸收相 3-4 3-4个点个点个点个点 一般12h内取血 不超过动物质量 2.0%（v/w）每次0.25-0.5 mL 第5页，本讲稿共22页Page 6大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程6 6样品摇匀样品摇匀1.1.将大鼠按压在将大鼠按压在鼠鼠笼笼上上，拇拇+中中+食食指指固定固定住头部住头部3.3.右手持毛细管右手持毛细管从从眼眼内内眦眦部部，与鼠面成，与鼠面成4545 夹夹角，角，旋转刺旋转刺入入2.2.紧握颈部，压迫颈两紧握颈部，压迫颈两侧，使
4、侧，使眼突出眼突出，眶后静，眶后静脉丛充血脉丛充血4.4.固定身体，固定身体，压压住住后肢后肢，放放松手指松手指，调整毛细管，调整毛细管，流畅出血。流畅出血。5.5.取血完成，立即取血完成，立即除除去颈去颈部压力，将采血器部压力，将采血器拔拔出，出，按压按压止止血。血。6 6血样管轻血样管轻轻混匀轻混匀，防止，防止凝血、溶血。凝血、溶血。2 2压迫颈部压迫颈部3 3旋转旋转刺入刺入4 4固定采血固定采血5 5去管止血去管止血1 1左手保定左手保定第6页，本讲稿共22页1 1左手保定左手保定Step1.Step1.将大鼠按压将大鼠按压在在鼠鼠笼笼上上，拇拇+中中+食食指指固定住头部固定住头部St
5、ep 1Step 1A A 建议笼子内放置建议笼子内放置重物重物 防止摇晃；防止摇晃；B B 一定要带手套；一定要带手套；C C 开始必须开始必须牢牢固定住头部牢牢固定住头部 头部乱动，头部乱动，扎位置容易得偏离扎位置容易得偏离，且易被咬伤；，且易被咬伤；D D 可在此时将大鼠取血侧的可在此时将大鼠取血侧的胡须胡须剪掉，防止剪掉，防止接触凝血。接触凝血。Page 7大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程第7页，本讲稿共22页2 2压迫颈部压迫颈部Step2Step2.紧握颈部，压迫紧握颈部，压迫颈两侧，使颈两侧，使眼突出眼突出，眶，眶后静脉丛充血后静脉丛充血 Step2 Step2A A 可用管试探
6、性触碰眼球是否已经突出；可用管试探性触碰眼球是否已经突出；B B 此时大鼠反抗挣扎最厉害，保证抓紧的同时，此时大鼠反抗挣扎最厉害，保证抓紧的同时，不能太过，使其窒息死亡。不能太过，使其窒息死亡。Page 8大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程第8页，本讲稿共22页3 3旋转旋转刺入刺入Step3.Step3.眼眼内内眦部，眦部，4545 夹角，旋转刺夹角，旋转刺入入，旋转退出。，旋转退出。Step3Step3 A A 针头斜面先向眼球，刺入后再转一定角针头斜面先向眼球，刺入后再转一定角度使斜面对着眼眶后界；度使斜面对着眼眶后界；B B 刺入深度，小鼠约刺入深度，小鼠约2-3mm2-3mm，大鼠约，
7、大鼠约4-5mm4-5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，管退出约当感到有阻力时即停止推进，同时，管退出约0.10.1-0.5mm0.5mm，边退边旋转；，边退边旋转；C C 不要使用管的尖锐锋利端插入，易留玻不要使用管的尖锐锋利端插入，易留玻璃碎片在眼内，造成持续伤害，使得下次反抗璃碎片在眼内，造成持续伤害，使得下次反抗增加；增加；D D 拿管的手要保持干净，带血渍的手指拿管的手要保持干净，带血渍的手指不要接触管的两端，易造成凝血，可用醇水不要接触管的两端，易造成凝血，可用醇水擦洗。擦洗。Page 9大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程第9页，本讲稿共22页4固定采血固定采血Step4.Ste
8、p4.固定身体，固定身体，压压住住后肢后肢，放，放松手指松手指，调整调整毛细管毛细管，流畅出血。，流畅出血。Step 4Step 4A A 一般血流速度快，证明插破了眼眶动脉，如一般血流速度快，证明插破了眼眶动脉，如果血流速度慢，证明要调整毛细管的位置，血液果血流速度慢，证明要调整毛细管的位置，血液都流到组织中了，没顺毛细管流出来；都流到组织中了，没顺毛细管流出来；B B 出血过程中如遇到出血不畅出血过程中如遇到出血不畅 不用着急拔毛不用着急拔毛细管细管 可以调整一下毛细管的扎入位置可以调整一下毛细管的扎入位置 或深或浅或深或浅的挑正一下的挑正一下 血会重新流出；血会重新流出；C C 如看见血
9、液已经在毛细管中凝固如看见血液已经在毛细管中凝固 必须迅速拔必须迅速拔除毛细管，再搽干净眼睛，重新换管扎针；除毛细管，再搽干净眼睛，重新换管扎针；D D 等到出血后等到出血后 将将力道转移到大鼠的身体力道转移到大鼠的身体上上 大大鼠出现乱动的情况很大的一部分力是他的鼠出现乱动的情况很大的一部分力是他的后肢后肢使使出来的出来的 保证她的后肢无法乱蹬就能很好的保定大鼠，保证她的后肢无法乱蹬就能很好的保定大鼠，然后将中指和食指处然后将中指和食指处解除一半的力道解除一半的力道，可以保证血，可以保证血液的顺畅液的顺畅Page 10大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程第10页，本讲稿共22页5去管止血去管止血
10、Step5.Step5.取血完成，立即取血完成，立即除除去颈部压力，将采血去颈部压力，将采血器器拔拔出，按压出，按压止止血血Step 5Step 5 A A 当得到所需的血量后，即当得到所需的血量后，即除除去去加于颈部的加于颈部的压力压力，同时，将采血器，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。拔出，以防止术后穿刺孔出血。B B 尽量把眼睛周围的血渍搽干净，尽量把眼睛周围的血渍搽干净，避免结块影响下次取血。避免结块影响下次取血。6样品摇匀样品摇匀Step6.Step6.血样管轻血样管轻轻混匀轻混匀，防止凝血、溶血防止凝血、溶血Page 11大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程第11页，本讲稿共2
11、2页大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程Page 12第12页，本讲稿共22页大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程Page 13第13页，本讲稿共22页大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程Page 14第14页，本讲稿共22页Page 15第15页，本讲稿共22页大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程Page 16第16页，本讲稿共22页Page 17大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程第17页，本讲稿共22页Page 18大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程第18页，本讲稿共22页Page 1919大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程第19页，本讲稿共22页大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程Page 20第20页，本讲稿共22页大鼠眼眶取血流程大鼠眼眶取血流程Page 21第21页，本讲稿共22页血样处理血样处理 血样处理血样处理血清血清 不抗凝不抗凝血浆血浆 肝素钠抗凝肝素钠抗凝 A全血全血37水浴水浴0.51h，短时间内短时间内（30 min）低速（低速（4000）离心（离心（10min）离心离心，取上清液，取上清液，低温保存低温保存B全血全血 室温静置室温静置 0.5-1h，低温低温冰箱冰箱 过夜过夜）离心离心，取上清液，取上清液，低温保存低温保存Page Page 2222血浆/全血（V/V）前五点低于40%-后续60%第22页，本讲稿共22页