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1、二 实验操作第1页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基第2页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算称量溶化灭菌倒平板第3页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热?计算第4页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热?可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中，减少误差。计算第5页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板加琼脂的目的是什么?计算第6页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏
2、蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板加琼脂的目的是什么?作为凝固剂计算第7页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？计算第8页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞，在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。计算第9页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板培养皿能否用高压蒸汽灭菌？计算第10页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋
3、白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板培养皿能否用高压蒸汽灭菌？不能，因为培养皿要保持干燥，应该用干热灭菌。计算第11页/共68页倒平板第12页/共68页讨论第13页/共68页讨论用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。第14页/共68页讨论用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。第15页/共68页讨论第16页/共68页讨论平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。第17页/共68页讨论平板冷凝
4、后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第18页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板计算（二）纯化大肠杆菌第19页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板接种方法有：计算（二）纯化大肠杆菌第20页/共68页二 实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法计算（二）纯化大肠杆菌第21页/共
5、68页1.平板划线法第22页/共68页讨论第23页/共68页讨论1.操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。第24页/共68页讨论2.以免接种环温度太高，杀死菌种。第25页/共68页讨论2.以免接种环温度太高，杀死菌种。3.划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能
6、使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第26页/共68页2.稀释涂布法第27页/共68页2.稀释涂布法（1）系列稀释操作：第28页/共68页2.稀释涂布法（1）系列稀释操作：第29页/共68页（2）涂布平板操作第30页/共68页讨论第31页/共68页讨论提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。第32页/共68页（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法计算（二）纯化大肠杆菌（三）将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入3
7、7恒温箱中培养12h和24h后，观察并记录第33页/共68页三 课题延伸菌种的保藏第34页/共68页三 课题延伸1.斜面保藏菌种的保藏第35页/共68页三 课题延伸1.斜面保藏菌种的保藏斜面保藏第36页/共68页三 课题延伸1.斜面保藏临时保存菌种的保藏斜面保藏第37页/共68页三 课题延伸1.斜面保藏临时保存菌种的保藏2.甘油保藏斜面保藏第38页/共68页三 课题延伸1.斜面保藏临时保存菌种的保藏2.甘油保藏长期保存斜面保藏第39页/共68页练习1.获得纯净培养物的关键是A 将用于微生物培养的器皿，接种用具和 培养基等器具进行灭菌B 接种纯种细菌C 适宜环境条件下培养D 防止外来杂菌的入侵第
8、40页/共68页练习1.获得纯净培养物的关键是A 将用于微生物培养的器皿，接种用具和 培养基等器具进行灭菌B 接种纯种细菌C 适宜环境条件下培养D 防止外来杂菌的入侵第41页/共68页练习2.下列操作与无菌技术无关的是A 接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手B 接种前用火焰烧灼接种针C 培养在50左右时搁置斜面D 在酒精灯的火焰旁完成第42页/共68页练习2.下列操作与无菌技术无关的是A 接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手B 接种前用火焰烧灼接种针C 培养在50左右时搁置斜面D 在酒精灯的火焰旁完成第43页/共68页练习3.外科手术器械和罐头食品的处理，要以能够杀死什么为标准A 球菌 B 杆
9、菌 C 螺旋菌 D 芽孢第44页/共68页练习3.外科手术器械和罐头食品的处理，要以能够杀死什么为标准A 球菌 B 杆菌 C 螺旋菌 D 芽孢第45页/共68页练习4.某学校打算开辟一块食用菌栽培基地,以丰富学生的劳动技术课内容,首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理,准备食用菌栽培所需的各种原料和用具,然后从菌种站购来各种食用菌菌种.请回答以下问题:第46页/共68页练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。第47页/共68页练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试
10、管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂第48页/共68页练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂蛋白胨第49页/共68页练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。牛肉膏、蛋白胨、水
11、、无机盐、琼脂蛋白胨牛肉膏第50页/共68页练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂蛋白胨牛肉膏凝固剂第51页/共68页练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.第52页/共68页练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.比例第53页/共68页练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制
12、备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.比例搅拌第54页/共68页练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.比例搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂第55页/共68页练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。第56页/共68页练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅第57页/共68
13、页练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa第58页/共68页练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa121 第59页/共68页练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa121 15 30min第60页
14、/共68页练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa121 15 30min自然降至零后 第61页/共68页练习使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入 _，把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭.第62页/共68页练习使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入 _，把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭.适量水第63页/共68页练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰
15、附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.第64页/共68页练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.外第65页/共68页练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.外冷却第66页/共68页练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.外冷却4第67页/共68页感谢您的观看！第68页/共68页