法医物证学课件.ppt

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1、法法医医物物证证学学 Forensic genetics一、一、一、一、概述概述 法法法法医医医医物物物物证证证证学学学学是是是是研研研研究究究究与与与与法法法法律律律律有有有有关关关关的的的的生生生生物物物物学学学学检检检检材材材材的的的的个体识别鉴定及亲子鉴定的法医学科。个体识别鉴定及亲子鉴定的法医学科。个体识别鉴定及亲子鉴定的法医学科。个体识别鉴定及亲子鉴定的法医学科。1.1.物物物物证证证证（material material evidenceevidence）：对对对对案案案案件件件件的的的的真真真真实实实实情情情情况况况况有有有有证明作用的物品和痕迹叫作物证。证明作用的物品和痕迹叫

2、作物证。证明作用的物品和痕迹叫作物证。证明作用的物品和痕迹叫作物证。2.2.生生生生物物物物学学学学检检检检材材材材（biological biological materialsmaterials）：涉涉涉涉及及及及人人人人体体体体器器器器官官官官、组组组组织织织织、分分分分泌泌泌泌物物物物及及及及排排排排泄泄泄泄物物物物等等等等的的的的有有有有关关关关物物物物证证证证叫叫叫叫作作作作生生生生物物物物学检材，又称法医物证（或生物物证）。学检材，又称法医物证（或生物物证）。学检材，又称法医物证（或生物物证）。学检材，又称法医物证（或生物物证）。3.3.物物物物证证证证检检检检验验验验：凡凡凡凡

3、以以以以侦侦侦侦察察察察、审审审审判判判判为为为为目目目目的的的的，对对对对与与与与案案案案件件件件有有有有关关关关的的的的物物物物品品品品、痕痕痕痕迹迹迹迹进进进进行行行行检检检检验验验验鉴鉴鉴鉴定定定定，以以以以判判判判定定定定物物物物证证证证是是是是否否否否能能能能够够够够作为肯定或否定证据的过程叫作物证检验。作为肯定或否定证据的过程叫作物证检验。作为肯定或否定证据的过程叫作物证检验。作为肯定或否定证据的过程叫作物证检验。个体识别个体识别 (personal identification)亲子鉴定亲子鉴定 (parentage testing)法医物证学的主要任务法医物证学的主要任务:二

4、二二二 、遗传标记遗传标记遗传标记遗传标记（一）概述（一）概述（一）概述（一）概述 1.1.遗传标记遗传标记遗传标记遗传标记（genetic marker,GMgenetic marker,GM）指指指指人人人人类类类类受受受受遗遗遗遗传传传传控控控控制制制制的的的的个个个个体体体体特特特特征征征征，具具具具有有有有受受受受遗遗遗遗传控制传控制传控制传控制和和和和终身不变终身不变终身不变终身不变两个特征。两个特征。两个特征。两个特征。传传传传统统统统遗遗遗遗传传传传学学学学概概概概念念念念：性性性性状状状状（charactercharacter）。遗遗遗遗传标记主要是指由传标记主要是指由传标记

5、主要是指由传标记主要是指由单基因座单基因座单基因座单基因座控制的性状。控制的性状。控制的性状。控制的性状。遗传标记遗传标记遗传标记遗传标记 检测方法：免疫学技术检测检测方法：免疫学技术检测检测方法：免疫学技术检测检测方法：免疫学技术检测 生物化学方法生物化学方法生物化学方法生物化学方法 分子生物学方法分子生物学方法分子生物学方法分子生物学方法遗传标记的传递遵循遗传标记的传递遵循遗传标记的传递遵循遗传标记的传递遵循孟德尔遗传孟德尔遗传规律：规律：规律：规律：同同同同基基基基因因因因座座座座等等等等位位位位基基基基因因因因在在在在配配配配子子子子形形形形成成成成过过过过程程程程中中中中彼彼彼彼此此

6、此此分分分分离，分别进入各自的配子细胞（离，分别进入各自的配子细胞（离，分别进入各自的配子细胞（离，分别进入各自的配子细胞（分离律分离律分离律分离律）；）；）；）；不不不不同同同同基基基基因因因因座座座座等等等等位位位位基基基基因因因因在在在在配配配配子子子子形形形形成成成成过过过过程程程程中中中中，可可可可分分分分可可可可合合合合，随随随随机机机机组组组组合合合合进进进进入入入入同同同同一一一一配配配配子子子子细细细细胞胞胞胞（自自自自由由由由组合律组合律组合律组合律）。）。）。）。2.遗传学多态性遗传学多态性（genetic polymorphism）通通通通过过过过某某某某类类类类型型型

7、型遗遗遗遗传传传传标标标标记记记记的的的的检检检检测测测测，可可可可以以以以将将将将人人人人群群群群分分分分开成若干类型的现象叫作开成若干类型的现象叫作开成若干类型的现象叫作开成若干类型的现象叫作遗传学多态性遗传学多态性遗传学多态性遗传学多态性。从从从从遗遗遗遗传传传传学学学学角角角角度度度度给给给给遗遗遗遗传传传传学学学学多多多多态态态态性性性性下下下下一一一一个个个个定定定定义义义义：由由由由2 2个个个个或或或或者者者者2 2个个个个以以以以上上上上等等等等位位位位基基基基因因因因控控控控制制制制的的的的性性性性状状状状的的的的个个个个体差异体差异体差异体差异，等位基因频率在，等位基因频

8、率在，等位基因频率在，等位基因频率在0.010.990.010.99之间。之间。之间。之间。3.3.分类分类分类分类 基基基基因因因因表表表表达达达达产产产产物物物物（蛋蛋蛋蛋白白白白）水水水水平平平平标标标标记记记记：血血血血液液液液各各各各成成成成分分分分中中中中的的的的遗遗遗遗传标记均是基因的表达产物，具有个体差异。传标记均是基因的表达产物，具有个体差异。传标记均是基因的表达产物，具有个体差异。传标记均是基因的表达产物，具有个体差异。uu红细胞血型（红细胞血型（红细胞血型（红细胞血型（RBC blood typeRBC blood type）uu 酶型（酶型（酶型（酶型（isoenzym

9、e typeisoenzyme type）uu 血清型（血清型（血清型（血清型（serum typeserum type）uu 白细胞抗原白细胞抗原白细胞抗原白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLAhuman leukocyte antigen,HLA）DNADNA分子水平标记分子水平标记分子水平标记分子水平标记：(二二二二)DNADNA遗传标记遗传标记遗传标记遗传标记 DNADNA多多多多态态态态性性性性原原原原因因因因是是是是在在在在特特特特定定定定的的的的基基基基因因因因座座座座（locuslocus）上上上上，因因因因碱碱碱碱基基基基的的的的突突突突变变变变（

10、mutationmutation）出出出出现现现现了了了了等等等等位位位位基基基基因因因因（alleleallele）；且且且且等等等等位位位位基基基基因因因因在在在在个个个个体体体体得得得得以以以以保保保保留留留留，并并并并按按按按照照照照孟孟孟孟德德德德尔尔尔尔遗遗遗遗传传传传规规规规律律律律由由由由亲亲亲亲代向子代遗传。代向子代遗传。代向子代遗传。代向子代遗传。DNADNA遗传标记等位基因形式遗传标记等位基因形式遗传标记等位基因形式遗传标记等位基因形式:等位基因的片段等位基因的片段等位基因的片段等位基因的片段长度差异长度差异长度差异长度差异；等位基因的等位基因的等位基因的等位基因的序列差

11、异序列差异序列差异序列差异。1.1.DNADNA长度多态性长度多态性长度多态性长度多态性(DNA length polymorphisms)DNA length polymorphisms)人人人人类类类类基基基基因因因因组组组组DNADNA长长长长3103109 9bpbp，编编编编码码码码基基基基因因因因序序序序列列列列约约约约占占占占不不不不到到到到5%5%，非非非非编编编编码码码码序序序序列列列列包包包包括括括括间间间间隔隔隔隔序序序序列列列列，基基基基因因因因调调调调控控控控序序序序列列列列，基基基基因内含子等。因内含子等。因内含子等。因内含子等。真核基因的内含子序列占基因序列的真核

12、基因的内含子序列占基因序列的真核基因的内含子序列占基因序列的真核基因的内含子序列占基因序列的5%30%5%30%。基基基基 因因因因 组组组组 DNADNA中中中中 大大大大 约约约约 10%10%是是是是 串串串串 联联联联 重重重重 复复复复（tandem tandem repeatsrepeats）DNADNA，结结结结构构构构形形形形式式式式是是是是以以以以一一一一个个个个序序序序列列列列相相相相对对对对恒恒恒恒定定定定的的的的DNADNA片片片片段段段段构构构构成成成成核核核核心心心心序序序序列列列列（core core sequencesequence），作作作作为为为为重重重重复

13、复复复单单单单位位位位，首首首首尾尾尾尾相相相相接接接接，串串串串联联联联重重重重复复复复。这这这这种种种种特特特特殊殊殊殊的的的的串串串串联联联联重重重重复复复复序序序序列列列列叫作：叫作：叫作：叫作：卫星卫星卫星卫星 DNADNA(satellite DNA)(satellite DNA)。大大大大卫卫卫卫星星星星：是是是是一一一一类类类类核核核核心心心心序序序序列列列列具具具具有有有有相相相相近近近近的的的的碱碱碱碱基基基基构构构构成，相近的浮力密度的卫星成，相近的浮力密度的卫星成，相近的浮力密度的卫星成，相近的浮力密度的卫星DNADNA。早早早早年年年年对对对对基基基基因因因因组组组组

14、DNADNA等等等等密密密密度度度度梯梯梯梯度度度度离离离离心心心心研研研研究究究究中中中中，在在在在主主主主要要要要区区区区带带带带外外外外存存存存在在在在若若若若干干干干个个个个次次次次要要要要成成成成分分分分，序序序序列列列列分分分分析析析析证证证证实实实实是是是是卫卫卫卫星星星星DNADNA。分分分分卫卫卫卫星星星星、和和和和 卫卫卫卫星星星星等等等等，按按按按照照照照浮浮浮浮力力力力密密密密度度度度相相相相近近近近的的的的分分分分为为为为一一一一类类类类。又又又又称称称称经经经经典典典典卫卫卫卫星星星星DNADNA（classical classical satellite)sate

15、llite)。大大大大卫卫卫卫星星星星中中中中的的的的序列多态性在法医学应用无多大的价值。序列多态性在法医学应用无多大的价值。序列多态性在法医学应用无多大的价值。序列多态性在法医学应用无多大的价值。可变数目串联重复序列可变数目串联重复序列可变数目串联重复序列可变数目串联重复序列 小小小小卫卫卫卫星星星星和和和和微微微微卫卫卫卫星星星星都都都都具具具具有有有有特特特特定定定定的的的的基基基基因因因因座座座座位位位位，其其其其中中中中部部部部分分分分卫卫卫卫星星星星DNADNA序序序序列列列列，因因因因不不不不同同同同个个个个体体体体、不不不不同同同同等等等等位位位位基基基基因因因因之之之之间间间

16、间，重重重重复复复复单单单单位位位位的的的的串串串串联联联联重重重重复复复复的的的的次次次次数数数数不不不不同同同同形形形形成成成成了了了了DNADNA片片片片段段段段长长长长度度度度差差差差异异异异，称称称称作作作作可可可可变变变变数数数数目目目目串串串串联联联联重重重重复复复复序序序序列列列列（variable variable number number of of tandem tandem repeats,repeats,VNTRVNTR），VNTRVNTR序序序序列列列列大大大大约约约约占占占占一一一一半半半半左左左左右右右右，是是是是构构构构成成成成DNADNA片段长度多态性的主

17、要原因。片段长度多态性的主要原因。片段长度多态性的主要原因。片段长度多态性的主要原因。小小小小卫卫卫卫星星星星序序序序列列列列都都都都位位位位于于于于基基基基因因因因组组组组高高高高变变变变区区区区，是是是是基基基基因因因因组组组组中中中中的的的的重重重重组组组组热热热热点点点点。其其其其中中中中VNTRVNTR序序序序列列列列呈呈呈呈现现现现极极极极其其其其复复复复杂杂杂杂的的的的长长长长度多态性。度多态性。度多态性。度多态性。例如：某小卫星例如：某小卫星例如：某小卫星例如：某小卫星VNTRVNTR座位座位座位座位 重复单位重复单位重复单位重复单位17bp17bp，重复次数，重复次数，重复次

18、数，重复次数7070450450次次次次 则最短的基因长：则最短的基因长：则最短的基因长：则最短的基因长：17bp7017bp701190bp1190bp 最长的基因有：最长的基因有：最长的基因有：最长的基因有：17bp45017bp4507650bp7650bp 等位基因数应为：等位基因数应为：等位基因数应为：等位基因数应为：45045070701 1381381个个个个 基因型数为：基因型数为：基因型数为：基因型数为：381(380381(3801)21)27277172771个个个个 早早早早期期期期的的的的法法法法医医医医DNADNA分分分分型型型型是是是是针针针针对对对对小小小小卫卫

19、卫卫星星星星靶靶靶靶序序序序列列列列，应应应应用用用用限限限限制制制制性性性性片片片片段段段段长长长长度度度度多多多多态态态态性性性性（restriction restriction fragment fragment length length polymorphism,polymorphism,RFLPRFLP）分分分分析析析析，RFLP RFLP 图图图图谱谱谱谱具具具具有高度个体特异性，被称为有高度个体特异性，被称为有高度个体特异性，被称为有高度个体特异性，被称为DNA fingerprintDNA fingerprint。以以以以小小小小卫卫卫卫星星星星核核核核心心心心序序序序列列列

20、列为为为为探探探探针针针针，对对对对人人人人类类类类基基基基因因因因组组组组DNADNA作作作作RFLPRFLP分分分分析析析析，显显显显示示示示图图图图谱谱谱谱类类类类似似似似超超超超市市市市商商商商品品品品条条条条码码码码，由由由由10301030条条条条谱谱谱谱带带带带组组组组成成成成，不不不不同同同同个个个个体体体体间间间间，谱谱谱谱带带带带数数数数目目目目不不不不同同同同，谱谱谱谱带带带带的的的的位位位位置置置置不不不不同同同同。人人人人群群群群中中中中随随随随机机机机两两两两个个个个体体体体的的的的DNADNA指指指指纹纹纹纹完完完完全全全全相同的几率为相同的几率为相同的几率为相同

21、的几率为1010-12-121010-19-19。法医物证鉴定：法医物证鉴定：法医物证鉴定：法医物证鉴定：从蛋白质水平进入从蛋白质水平进入从蛋白质水平进入从蛋白质水平进入DNADNA水平水平水平水平 实现从否定到认定的飞跃实现从否定到认定的飞跃实现从否定到认定的飞跃实现从否定到认定的飞跃随机10个体DNA指纹图谱探针：珠蛋白-3-HVR限制酶：HinfI 图中现场血痕与作案凶器上的血痕经过DNA指纹检测，有18条长度相同片段。群体调查汉族人群，每一片段出现平均频率为0.198。按照Jeffreys提供的匹配概率（Pm值）计算方法：Pm0.19818 2.1910-13。微卫星微卫星微卫星微卫星

22、：microminilliteDNADNA DNADNA重复单位重复单位26bp,26bp,重复次数重复次数10301030次，次，又称又称短串联重复序列短串联重复序列短串联重复序列短串联重复序列(shorttandemrepeats(shorttandemrepeats，STRSTR)或或simpletandemrepeatssimpletandemrepeats。其其中中大大约约有有一一半半具具有有VNTRVNTR序序列列特特征征，是目前应用最普遍的一类标记系统。是目前应用最普遍的一类标记系统。目目前前在在人人类类基基因因组组中中发发现现STRSTR座座位位有有80008000余个余个。（

23、3 3）STRSTR分型分型基本技术基本技术PCR-STRPCR-STR分型分型技术技术技术技术：参参照照STRSTR重重复复序序列列的的侧侧翼翼序序列列设设计计引引物物，PCRPCR扩增扩增STRSTR片段长度等位基因。片段长度等位基因。扩扩增增产产物物用用聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺(polyacrylamide(polyacrylamidegelgel，PAG)PAG)凝胶电泳分离，凝胶电泳分离，不不同同长长度度等等位位基基因因按按重重复复次次数数(allelic(allelicladder)ladder)参照参照,以重复次数命名等位基因。以重复次数命名等位基因。银染技术，电泳分离后用银染显带。

24、银染技术，电泳分离后用银染显带。D16S539，D7S820，D13S317，D5S818四STR基因座复合扩增分型图谱。荧光标记荧光标记PCRPCR引物，扩增产物携带荧光，引物，扩增产物携带荧光，毛细管电泳毛细管电泳，然后利用激光激发荧光显色基，然后利用激光激发荧光显色基团，检测仪自动记录荧光波长和迁移率团，检测仪自动记录荧光波长和迁移率(由由genotypergenotyper软件软件)自动分型。自动分型。n n1 1.不同荧光标记引物，致等位基因扩增产物不同荧光标记引物，致等位基因扩增产物携带有荧光示踪基团，按不同波长区分基因携带有荧光示踪基团，按不同波长区分基因座。座。n n2 2.在

25、毛细管电泳中，记录电泳加样点至检测在毛细管电泳中，记录电泳加样点至检测窗口的时间，迁移时间表示片段长度。窗口的时间，迁移时间表示片段长度。AmpFAmpFlSTRSTR Identifiler Identifiler等位基因分型标准参照图等位基因分型标准参照图三个样本的三个样本的Identifiler基因座等位基因分型图基因座等位基因分型图PCR-STRPCR-STR分型的分型的技术优势技术优势技术优势技术优势：1 1高高灵灵敏敏度度，利利用用PCRPCR的的高高灵灵敏敏度度特特征征，理理论论上上单单个个细细胞胞的的DNADNA可可以以扩扩增增出出靶靶DNADNA片片段段。目目前前法法医医学学

26、鉴鉴定定的的灵灵敏敏度度达达到到ngng级级DNADNA水平。水平。2 2高高特特异异性性，针针对对靶靶基基因因座座侧侧翼翼序序列列设设计计的的PCRPCR引引物物，引引物物的的特特异异性性决决定定了了扩扩增增产产物的特异性。物的特异性。3 3等等位位基基因因片片段段长长度度多多在在300bp300bp以以下下，适适用用于于腐腐败、降解、陈旧法医检材。败、降解、陈旧法医检材。4 4种种属属特特异异性性好好，引引物物具具有有人人的的种种属属特特异异性性，材材料料中中混混合合有有动动物物血血痕痕，不不影影响响人人血血的的STRSTR分分析。析。5 5复复合合扩扩增增，提提高高单单次次检检测测的的信

27、信息息量量，常常规规使使用用10-1610-16个个STRSTR基基因因座座，识识别别能能力力达达到到DNADNA指指纹的鉴别水平。纹的鉴别水平。6 6实实现现标标准准化化、自自动动化化的的分分型型，加加上上计计算算机机技技术术辅辅助助，建建立立全全国国范范围围的的罪罪犯犯DNADNA数数据据库库成成为现实。为现实。2.DNA序列多态性序列多态性 在在在在基基基基因因因因组组组组特特特特定定定定的的的的基基基基因因因因座座座座位位位位，等等等等位位位位基基基基因因因因的的的的碱碱碱碱基基基基 序序序序 列列列列 差差差差 异异异异 构构构构 成成成成 的的的的 多多多多 态态态态 性性性性 叫

28、叫叫叫 作作作作 序序序序 列列列列 多多多多 态态态态 性性性性(sequence polymorphism)(sequence polymorphism)。序序序序列列列列多多多多态态态态性性性性形形形形成成成成的的的的主主主主要要要要原原原原因因因因是是是是点点点点突突突突变变变变。在在在在同同同同基基基基因因因因座座座座位位位位上上上上，因因因因为为为为碱碱碱碱基基基基的的的的替替替替换换换换构构构构成成成成不不不不同同同同等等等等位位位位基基基基因因因因的的的的序序序序列列列列差差差差异异异异。可可可可以以以以出出出出现现现现在在在在编编编编码码码码区区区区，也也也也可可可可以以以以

29、出出出出现现现现在在在在非编码区。非编码区。非编码区。非编码区。人类线粒体人类线粒体DNADNA（mitochondrial DNAmitochondrial DNA）mtDNAmtDNA是是唯唯一一的的核核外外DNADNA，呈呈环环状状裸裸露露的的双双 股股 螺螺 旋旋 结结 构构，分分 重重 链链(H)(H)和和 轻轻 链链(L)(L)，长长 度度16569bp16569bp，编编码码3737个个与与氧氧化化磷磷酸酸化化相相关关的的蛋蛋白白质质和和RNARNA。其其中中有有5%7%5%7%的的序序列列为为非非编编码码区区，成成为为控控制制区区（control control regionr

30、egion），长长度度大大约约1100bp1100bp。在在控控制制区区碱碱基基序序列列处处于于高高度度变变异异状状态态。大大约约2/32/3的的碱碱基基有变异，大约有变异，大约90%90%为转换，为转换，10%10%为颠换。为颠换。（三）（三）群体遗传学基础群体遗传学基础群体遗传学基础群体遗传学基础 在在法法医医学学鉴鉴定定中中，为为了了给给法法庭庭说说明明鉴鉴定定结结论论的的意意义义，必必须须将将鉴鉴定定结结论论进进行行量量化化。其中涉及到群体遗传的基础理论。其中涉及到群体遗传的基础理论。1 1 概念概念概念概念：表表型型频频率率(phenotypephenotype frequencef

31、requence)：应应用用分分型型技技术术对对人人群群分分型型检检测测，不不同同表表型型在在人人群群中中所所占占的的比比例例就就叫叫作作表表型型频频率率。例例如如A A在在人人群群中占中占23%23%，B B：19%19%，ABAB：9%9%，O O：49%49%。基基基基因因因因频频频频率率率率(genefrequence)：群群体体中中某某一一等等位位基基因因占占该该群群体体中中可可能能出出现现的的等等位位基基因因总总数数的比例：的比例：例如例如 ；维族调查；维族调查15131513人的人的MNMN血型：血型：MM型型689689人（人（0.38930.3893）；）；MNMN型型713

32、713人（人（0.47120.4712）；）；N N型型211211人（人（0.13950.1395）因此因此*MM(2689(2689713)/(21513)713)/(21513)0.62490.6249*N*N(2211(2211713)/(21513)713)/(21513)0.37510.3751总结计算公式为总结计算公式为：基因频率基因频率=纯合子个体数纯合子个体数 2 2杂合子人数杂合子人数 2 2 观察总人数观察总人数 注意：注意：一个基因座所有等位基因频率的和等于一个基因座所有等位基因频率的和等于1 1 2 遗传平衡定律遗传平衡定律遗传平衡定律遗传平衡定律(Hardy-Wei

33、nbergequilibrium)(Hardy-Weinbergequilibrium)假设前提：假设前提：群体无限大，群体无限大，婚配随机，婚配随机，没有突变，没有突变，没有任何形式的选择。没有任何形式的选择。结论结论：该群体中各等位基因频率保持累代不变。该群体中各等位基因频率保持累代不变。总结上式：总结上式：(pA(pA1 1+qA+qA2 2)2 2 p p2 2A A1 1A A1 1+2pqA+2pqA1 1A A2 2+q+q2 2A A2 2A A2 2 因因此此，在在达达到到遗遗传传平平衡衡的的群群体体：基基因因频频率率和和基基因因型型频频率率间间成成 二二项项式式展展开开数数

34、学学式式 的的关系：关系：(1)(1)纯合子基因型频率纯合子基因型频率=该基因频率的平方。该基因频率的平方。(2)(2)杂合子基因型频率杂合子基因型频率=两基因频率乘积的两基因频率乘积的2 2倍。倍。例如例如：*M=0.6249M=0.6249；*N=0.3751N=0.3751则表型频率为：则表型频率为：MM0.62490.62492 20.39050.3905MNMN20.62490.375120.62490.37510.46990.4699NN0.37510.37512 20.14070.1407按照按照H-WH-W平平衡定律的结论，可以从基因频衡定律的结论，可以从基因频率计算出遗传标记

35、表型的频率，作为率计算出遗传标记表型的频率，作为 匹配匹配概率概率，以评估两份检材是否来自同一个体。，以评估两份检材是否来自同一个体。3 匹配概率匹配概率匹配概率匹配概率：当检材和样本经过分型鉴定，当检材和样本经过分型鉴定，表型一致，称为匹配表型一致，称为匹配(match)(match)。匹配概率匹配概率(matchprobability(matchprobability，Pm)Pm)是指是指需要作个体识别的两份检材，经过鉴定，需要作个体识别的两份检材，经过鉴定，基因型相同。假设基因型相同。假设 检材检材 和和 样本样本 不不是来自同一个体，因为偶然的机会相同的是来自同一个体，因为偶然的机会相

36、同的机会。机会。这个概率就是该基因型在人群中的频率。这个概率就是该基因型在人群中的频率。例如凶器上血痕与被害人血都是例如凶器上血痕与被害人血都是A A型，随机型，随机匹配概率为匹配概率为0.230.23。累计匹配概率累计匹配概率累计匹配概率累计匹配概率(CPm)(CPm)：等于各个标记的表型频率的乘积。条件是各等于各个标记的表型频率的乘积。条件是各等于各个标记的表型频率的乘积。条件是各等于各个标记的表型频率的乘积。条件是各 个遗传标记系统是独立遗传，之间没有遗传个遗传标记系统是独立遗传，之间没有遗传个遗传标记系统是独立遗传，之间没有遗传个遗传标记系统是独立遗传，之间没有遗传 连锁关系（连锁关系

37、（连锁关系（连锁关系（乘法原则乘法原则）。）。）。）。例如：一把匕首上血痕与被害人血经过例如：一把匕首上血痕与被害人血经过例如：一把匕首上血痕与被害人血经过例如：一把匕首上血痕与被害人血经过 8 8个个个个STRSTR基因座测定，结果如下：基因座测定，结果如下：基因座测定，结果如下：基因座测定，结果如下：生物检材的个人识别：生物检材的个人识别：血痕检验血痕检验精液斑检验精液斑检验唾液斑检验唾液斑检验毛发检验毛发检验骨骼检验骨骼检验牙齿检验牙齿检验其它组织的检验其它组织的检验一、血痕检验一、血痕检验 血痕检验的主要内容：血痕检验的主要内容：是否血痕；是否血痕；是人血还是动物血；是人血还是动物血；

38、血痕遗传标记分型检测即个体识别。血痕遗传标记分型检测即个体识别。（一）一）一）一）预试验预试验预试验预试验 预预预预试试试试验验验验属属属属于于于于筛筛筛筛选选选选试试试试验验验验，将将将将不不不不是是是是血血血血痕痕痕痕的的的的斑斑斑斑迹迹迹迹筛筛筛筛选选选选出来。常用灵敏度高，操作简单的试验。出来。常用灵敏度高，操作简单的试验。出来。常用灵敏度高，操作简单的试验。出来。常用灵敏度高，操作简单的试验。联苯胺试验联苯胺试验联苯胺试验联苯胺试验（Benzidine testBenzidine test）原原原原理理理理：血血血血痕痕痕痕中中中中血血血血红红红红蛋蛋蛋蛋白白白白、正正正正铁铁铁铁血

39、血血血红红红红素素素素具具具具有有有有过过过过氧氧氧氧化化化化酶酶酶酶活活活活性性性性，能能能能是是是是过过过过氧氧氧氧化化化化氢氢氢氢释释释释放放放放新新新新生生生生态态态态氧氧氧氧，将将将将无无无无色色色色的的的的联联联联苯胺氧化成联苯胺蓝。苯胺氧化成联苯胺蓝。苯胺氧化成联苯胺蓝。苯胺氧化成联苯胺蓝。试剂：试剂：试剂：试剂：冰醋酸、联苯胺乙醇溶液、冰醋酸、联苯胺乙醇溶液、冰醋酸、联苯胺乙醇溶液、冰醋酸、联苯胺乙醇溶液、30%H30%H2 2OO2 2。操操操操作作作作：取取取取少少少少量量量量可可可可疑疑疑疑血血血血痕痕痕痕置置置置白白白白色色色色反反反反应应应应板板板板上上上上，1 1滴

40、滴滴滴冰冰冰冰醋醋醋醋酸酸酸酸，1 1滴滴滴滴过过过过氧氧氧氧化化化化氢氢氢氢，1 1滴滴滴滴联联联联苯苯苯苯胺胺胺胺液液液液。立立立立即即即即出出出出现现现现兰兰兰兰色色色色为为为为阳阳阳阳性反应。性反应。性反应。性反应。注意事项注意事项注意事项注意事项：高灵敏度，血液高灵敏度，血液高灵敏度，血液高灵敏度，血液5050万倍稀释，仍可出现阳性结果。万倍稀释，仍可出现阳性结果。万倍稀释，仍可出现阳性结果。万倍稀释，仍可出现阳性结果。两类干扰物质：两类干扰物质：两类干扰物质：两类干扰物质：含有过氧化物酶的植物，蔬菜和水果，可以出含有过氧化物酶的植物，蔬菜和水果，可以出含有过氧化物酶的植物，蔬菜和水

41、果，可以出含有过氧化物酶的植物，蔬菜和水果，可以出 现假阳性；现假阳性；现假阳性；现假阳性；氧化剂可直接将联苯胺氧化，呈兰色变化。所氧化剂可直接将联苯胺氧化，呈兰色变化。所氧化剂可直接将联苯胺氧化，呈兰色变化。所氧化剂可直接将联苯胺氧化，呈兰色变化。所 以试验阳性不能认为可疑斑迹是血痕。只能结以试验阳性不能认为可疑斑迹是血痕。只能结以试验阳性不能认为可疑斑迹是血痕。只能结以试验阳性不能认为可疑斑迹是血痕。只能结 论：论：论：论：可能是血痕可能是血痕可能是血痕可能是血痕。联苯胺试验的联苯胺试验的联苯胺试验的联苯胺试验的意义在阴性结果意义在阴性结果意义在阴性结果意义在阴性结果，阴性结果可以排除，阴

42、性结果可以排除，阴性结果可以排除，阴性结果可以排除血痕。血痕。血痕。血痕。（二）（二）确证试验确证试验 血色原结晶试验血色原结晶试验血色原结晶试验血色原结晶试验（hemochromogen crystal testhemochromogen crystal test）原原原原理理理理：在在在在碱碱碱碱性性性性条条条条件件件件下下下下正正正正铁铁铁铁血血血血红红红红素素素素分分分分解解解解成成成成血血血血红红红红素素素素和和和和变变变变性性性性珠珠珠珠蛋蛋蛋蛋白白白白，正正正正铁铁铁铁血血血血红红红红素素素素在在在在还还还还原原原原剂剂剂剂作作作作用用用用下下下下还还还还原原原原成成成成血血血血

43、红红红红素素素素，血血血血红红红红素素素素与与与与含含含含氮氮氮氮物物物物质质质质吡吡吡吡啶啶啶啶结结结结合合合合生生生生成成成成樱樱樱樱桃桃桃桃红红红红色色色色针针针针状状状状、菊花状结晶。菊花状结晶。菊花状结晶。菊花状结晶。试剂：试剂：试剂：试剂：NaOHNaOH，葡萄糖，吡啶，葡萄糖，吡啶，葡萄糖，吡啶，葡萄糖，吡啶.（TakayamaTakayama试剂）试剂）试剂）试剂）操作：操作：操作：操作：出现樱桃红色针状、菊花状结晶为阳性。出现樱桃红色针状、菊花状结晶为阳性。出现樱桃红色针状、菊花状结晶为阳性。出现樱桃红色针状、菊花状结晶为阳性。血色原结晶血色原结晶LessonI Takaya

44、maCrystalTakayamaCrystal注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：特特特特异异异异性性性性好好好好，凡凡凡凡血血血血痕痕痕痕检检检检材材材材可可可可出出出出现现现现阳阳阳阳性性性性结结结结果果果果，凡凡凡凡出出出出现典型的血色原结晶的检材就是肯定是血痕。现典型的血色原结晶的检材就是肯定是血痕。现典型的血色原结晶的检材就是肯定是血痕。现典型的血色原结晶的检材就是肯定是血痕。灵灵灵灵敏敏敏敏度度度度不不不不高高高高，血血血血液液液液稀稀稀稀释释释释200200倍倍倍倍就就就就难难难难以以以以获获获获得得得得典典典典型型型型的的的的血血血血色色色色原原原原结结结结晶晶晶晶。凡凡

45、凡凡稀稀稀稀释释释释、雨雨雨雨淋淋淋淋、细细细细菌菌菌菌污污污污染染染染和和和和腐败血痕难出现典型结晶。腐败血痕难出现典型结晶。腐败血痕难出现典型结晶。腐败血痕难出现典型结晶。所所所所以以以以血血血血色色色色原原原原结结结结晶晶晶晶试试试试验验验验的的的的意意意意义义义义在在在在阳阳阳阳性性性性结结结结果果果果。阴阴阴阴性性性性没有意义，需要继续作种属试验。没有意义，需要继续作种属试验。没有意义，需要继续作种属试验。没有意义，需要继续作种属试验。（三）种属试验（三）种属试验 种种种种属属属属鉴鉴鉴鉴定定定定是是是是血血血血痕痕痕痕鉴鉴鉴鉴定定定定的的的的关关关关键键键键。动动动动物物物物学学学

46、学中中中中存存存存在在在在血血血血型型型型物物物物质质质质，例例例例如如如如鸡鸡鸡鸡有有有有A A型型型型抗抗抗抗原原原原物物物物质质质质，未未未未确确确确证证证证人人人人血血血血即即即即作作作作ABOABO血血血血型型型型测测测测定定定定，可可可可造造造造成成成成错错错错案案案案。自自自自然然然然界界界界广广广广泛泛泛泛存存存存在在在在与与与与人人人人类类类类血血血血型型型型抗抗抗抗原原原原类类类类似似似似的的的的物物物物质质质质，微微微微生生生生物物物物如如如如大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌，肺肺肺肺炎炎炎炎双双双双球球球球菌菌菌菌。细细细细菌菌菌菌污污污污染染染染的的的的腐腐腐腐败败败

47、败血血血血痕痕痕痕可能测定出可能测定出可能测定出可能测定出ABOABO血型。血型。血型。血型。环状沉淀环状沉淀环状沉淀环状沉淀（ring precipitationring precipitation）反应反应反应反应 原原原原理理理理：血血血血痕痕痕痕中中中中HbHb和和和和血血血血清清清清蛋蛋蛋蛋白白白白抗抗抗抗原原原原与与与与相相相相应应应应的的的的沉沉沉沉淀淀淀淀素素素素抗抗抗抗体体体体发发发发生生生生特特特特异异异异性性性性结结结结合合合合，在在在在一一一一定定定定的的的的条条条条件件件件下下下下出出出出现现现现白白白白色色色色沉沉沉沉淀淀淀淀。用用用用已已已已知知知知的的的的抗抗抗

48、抗人人人人HbHb血血血血清清清清或或或或抗抗抗抗人人人人血血血血清清清清与与与与待待待待测测测测血血血血痕痕痕痕浸浸浸浸出出出出液液液液做沉淀反应，阳性结果为人血。阴性结果不是人血。做沉淀反应，阳性结果为人血。阴性结果不是人血。做沉淀反应，阳性结果为人血。阴性结果不是人血。做沉淀反应，阳性结果为人血。阴性结果不是人血。方方方方法法法法：取取取取待待待待测测测测血血血血痕痕痕痕0.5cm0.5cm2 2，剪剪剪剪碎碎碎碎,试试试试管管管管内内内内，0.5ml 0.5ml NSNS，室室室室温温温温下下下下浸浸浸浸泡泡泡泡2h2h，离离离离心心心心，取取取取上上上上清清清清液液液液作作作作抗抗抗

49、抗原原原原液液液液。将将将将抗抗抗抗人人人人血血血血清清清清或或或或者者者者抗抗抗抗人人人人HbHb血血血血清清清清，置置置置毛毛毛毛细细细细沉沉沉沉淀淀淀淀管管管管下下下下层层层层，然然然然后后后后将将将将血血血血痕痕痕痕浸浸浸浸出出出出液液液液叠叠叠叠加加加加在在在在抗抗抗抗血血血血清清清清上上上上，室室室室温温温温下下下下观观观观察察察察30min30min，出现白色沉淀环为阳性。，出现白色沉淀环为阳性。，出现白色沉淀环为阳性。，出现白色沉淀环为阳性。AbAg环环状状沉沉淀淀示示意意图图沉淀管内径沉淀管内径1.51.52mm2mm60min60min内出现沉淀环为阳性内出现沉淀环为阳性6

50、0min60min不出现沉淀环为阴性不出现沉淀环为阴性操作步骤操作步骤注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：陈陈陈陈旧旧旧旧，水水水水洗洗洗洗血血血血痕痕痕痕，浸浸浸浸泡泡泡泡时时时时间间间间不不不不够够够够，抗抗抗抗血血血血清清清清效效效效价价价价不不不不够够够够，会会会会出现假阴性结果。出现假阴性结果。出现假阴性结果。出现假阴性结果。应设置已知人血阳性对照应设置已知人血阳性对照应设置已知人血阳性对照应设置已知人血阳性对照。与与与与动动动动物物物物血血血血出出出出现现现现交交交交叉叉叉叉反反反反应应应应，会会会会出出出出现现现现假假假假阳阳阳阳性性性性结结结结果果果果。应应应应设设设设置置