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1、脓汁中病原性球菌和粪便中脓汁中病原性球菌和粪便中致病性杆菌的鉴定致病性杆菌的鉴定目的要求目的要求1.掌握血浆凝固酶试验和玻片凝集试验的操作方法；2.熟悉血浆凝固酶试验和玻片凝集试验的原理；3.了解病原性球菌和杆菌的一般鉴定过程。脓汁中病原性球菌的鉴定脓汁中病原性球菌的鉴定形态学鉴定形态学鉴定革兰染色，观察细菌的染色性状和排列特点。G-球菌球菌 双球菌 结合临床进行判断G+菌链状排列或成对排列菌链状排列或成对排列 肺炎链球菌 胆汁溶菌；菊糖发酵胆汁溶菌；菊糖发酵；奥普托辛奥普托辛 甲链 A群链球菌 乙链 丙链菊糖发酵实验菊糖发酵实验肺炎双球菌 +甲型溶血性链球菌 奥普托辛实验奥普托辛实验奥普托辛
2、能干扰肺双叶酸的合成，故对肺炎双球菌的抑制作用比较大。肺双的抑菌圈直径一般大于20mm为阳性；甲链的抑菌圈直径小于12mm为阴性；如果介于1220mm之间时应重复试验。G+菌葡萄串状排列菌葡萄串状排列 首先观察菌落特点：色素；溶血情况；进一步鉴定：血浆凝固酶实验；耐热核酸酶实验；甘露醇的发酵凝固酶凝固酶v是指能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或兔的血浆发生凝固的酶类物质。v致病性葡萄球菌大多能产生凝固酶v凝固酶分为两种：游离凝固酶、结合凝固酶方法方法v试管法试管法 适合于游离凝固酶的检查v玻片法玻片法 适合于结合凝固酶的检查原理原理游离凝固酶类似凝血酶原物质凝血酶样物质协同因子纤维蛋白原液液 态
3、态纤维蛋白固固 态态玻片法凝固酶试验玻片法凝固酶试验纤维蛋白原受体（结合凝固酶）原理原理致病菌纤维蛋白原材料材料v菌种：金黄色葡萄球菌，白色葡萄球菌v兔血浆v试剂：生理盐水（N.S）v玻片：方法方法1.分区2.制备细菌悬液3.滴加兔血浆4.观察结果2.制备细菌悬液制备细菌悬液v每区分别加N.S 1滴,分别挑取金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌培养物少许，各置N.S中制成均匀的细菌悬液，观察无自凝现象者可继续后续实验步骤。3.滴加兔血浆滴加兔血浆v于每滴细菌悬液内各加兔血浆一滴，混匀。4.观察结果观察结果v如出现颗粒状凝集现象即为阳性。如不立即发生凝集，可稍待1-2min，并轻摇玻片加速反应，若仍无凝
4、集则为阴性。粪便中致病性杆菌的鉴定粪便中致病性杆菌的鉴定肠杆菌的一般鉴定程序肠杆菌的一般鉴定程序 标本标本 直接涂片直接涂片 分离培养分离培养：（：（SSSS，EMB/MACEMB/MAC）（染色镜检）（染色镜检）可疑菌落可疑菌落 TSIA TSIA或或KIAKIA 药物敏感试验药物敏感试验 生化，血清学鉴定生化，血清学鉴定，动物试验，动物试验肠道杆菌的生长结果肠道杆菌的生长结果 SS SS 双糖铁双糖铁双糖铁双糖铁大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌 粉红色大菌落粉红色大菌落粉红色大菌落粉红色大菌落 黄色黄色黄色黄色痢疾杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌 无色细小无色细小无色细小无色细小 上红下黄上红
5、下黄上红下黄上红下黄 半透明菌落半透明菌落半透明菌落半透明菌落伤寒杆菌伤寒杆菌伤寒杆菌伤寒杆菌 无色细小无色细小无色细小无色细小 上红下黄上红下黄上红下黄上红下黄 半透明菌落半透明菌落半透明菌落半透明菌落 黑色沉淀黑色沉淀黑色沉淀黑色沉淀血清学鉴定血清学鉴定凝集反应：试管凝集；玻片凝集玻片凝集。玻片法凝集反应玻片法凝集反应 原理：颗粒性抗原原理：颗粒性抗原(未知细菌未知细菌)+抗体抗体(已知已知)电解质电解质 凝集凝集(+);未凝集未凝集(-)材料，方法：材料，方法：伤寒血清伤寒血清伤寒血清伤寒血清+待测菌待测菌待测菌待测菌 伤寒血清伤寒血清伤寒血清伤寒血清+待测菌待测菌待测菌待测菌 结果：凝
6、集结果：凝集+；无凝集；无凝集。结果判断结果判断 SS平板：菌落的形态，颜色；平板：菌落的形态，颜色；双糖铁培养基上生化特点；双糖铁培养基上生化特点；革兰染色：形态，排列，染色特点；革兰染色：形态，排列，染色特点；玻片凝集的反应结果。玻片凝集的反应结果。操作内容操作内容1 革兰染色：每台2张玻片，染1张球菌和1张杆菌；2 血浆凝固酶实验：每台1张玻片；3 玻片凝集反应：每台1张玻片；4 接种双糖铁培养基：每台2管双糖铁培养基（穿刺+斜面）。观察内容观察内容 1 脓汁标本细菌在血平板上的生长现象；2 肠杆菌在SS平板上生长的菌落特点；3 肠杆菌在双糖铁培养基上生长的特点。多种 肺炎肺炎细菌均可引
7、起大叶性肺炎，但绝大多数为肺炎链球菌，其中以型致病力最强。肺炎链球菌为革兰阳性球菌，有荚膜，其致病力是由于高分子多糖体的荚膜对组织的侵袭作用。少数为肺炎杆菌、金黄*色葡萄球菌、溶血性链球菌、流感嗜血杆菌等。肺炎链球菌为口腔及鼻咽部的正常寄生菌群，若呼吸道的排菌自净功能及机体的抵抗力正常时，不引发肺炎。当机体受寒、过度疲劳、醉酒、感冒、糖尿病、免疫功能低下等使呼吸道防御功能被削弱，细菌侵入肺泡通过变态反应使肺泡壁毛细血管通透性增强，浆液及纤维素渗出，富含蛋白的渗出物中细菌迅速繁殖，并通过肺泡间孔或呼吸细支气管向邻近肺组织蔓延，波及一个肺段或整个肺叶。大叶间的蔓延系带菌的渗出液经叶支气管播散所致。编辑本段编辑本段临床表现临床表现多数起病急骤，常有受凉淋雨、劳累、病毒感染等诱因，约1/3患病前有上呼吸道感染。病程710天。（一）寒战、高热：典型病例以突然寒战起病，继之高热，体温可高达3940，呈稽留热型，常伴有头痛、全身肌肉酸痛，食量减少。抗生素使用后热型可不典型，年老体弱者可仅有低热或不发热。精品PPT课件 浏览免费 下载后可以编辑修改。