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1、根据不同标本及培养目的，选用不同的接种和培养方法常用的有细菌的分离培养和纯培养，已接种标本或细菌的培养基置于适合的气体环境，需氧菌和兼性厌氧菌置于空气中即可，专性厌氧菌需在无游离氧的环境中培养；病原菌的人工培养一般采用35-37，培养时间多数为18-24小时多数细菌在代谢过程中需要CO2，但分解糖类时产生的CO2已足够其所需，且空气中还有微量的CO2，不必额外补充。只有少数菌如布鲁菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等，初次分离培养时必须在5%-10%的CO2环境中才能生长。第1页/共16页二、培养基培养基由人工方法配置，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。培养基一般PH值为7.2-7.6，少数细
2、菌按生长要求调整至偏酸或偏碱。但许多细菌在代谢过程中分解糖类产酸，故，常在培养基中加入缓冲剂，以保持PH值。培养基制成后必须经过灭菌处理。第2页/共16页培养基分类基础培养基 含多数细菌生长繁殖所需的基本营养成分。它是配制特殊培养基的基础，也可作为一般培养基使用，如：营养肉汤、营养琼脂、蛋白胨水等。第3页/共16页营养培养基若了解某种细菌的特殊营养需求，可配制出适合这种细菌而不适合其它细菌的营养培养基，国内也称之为增菌培养基。在这种培养基上生长的是营养要求相同的细菌群它包括通用营养培养基和专用营养培养基，前者为基础培养基中添加合适的生长因子或微量元素等，以促使某些特殊细菌生长繁殖，如链球菌、肺
3、炎链球菌需在含血液或血清的培养基中生长；后者又称选择性营养培养基，即除固有的营养成分外，再添加特殊抑制剂，有利于目的菌的生长繁殖，如碱性蛋白胨水用于霍乱弧菌的增菌培养第4页/共16页选择培养基在培养基中加入某种化学物质，使之抑制某些细菌生长，而有利于另一些细菌生长，从而将后者从混杂的标本中分离出来，这种培养基称为选择性培养基，例如培养肠道致病菌的SS琼脂，其中的胆盐能抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠埃希菌，因而使致病的沙门氏菌和志贺菌容易分离到第5页/共16页鉴别培养基用于培养和区分不同细菌种类的培养基，利用各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示
4、剂，一般不加抑菌剂，观察细菌再其生长后对底物的作用如何，从而鉴别细菌。如常用的糖发酵管、双糖铁培养基、伊红-美蓝琼脂等第6页/共16页厌氧培养基专供厌氧菌的分离、培养和鉴别。这种培养基营养丰富，含特殊生长因子，氧化还原电势低，并加入美蓝作为氧化还原指示剂。其中心、脑浸液和肝块、肉渣含有不饱和脂肪酸，能吸收培养基中的氧；硫乙醇酸盐和半胱氨酸是较强的还原剂；VitK1、氯化血红素可以促进某些类杆菌的生长。常用的有庖肉培养基、硫乙醇酸盐肉汤等，并在液体培养基表面加入凡士林或液体石蜡以隔绝空气。第7页/共16页此外，根据培养基的物理状态分为：液体、固体、半固体三大类。在液体培养基中加入1.5%的琼脂粉
5、，即凝固成固体培养基；琼脂粉含量在0.3-0.5%时，则为半固体培养基。琼脂在培养基中起赋形剂的作用，不具营养意义。液体培养基可用于大量繁殖细菌，但必须种入纯种细菌；固体培养基常用于细菌的分离和纯化；半固体培养基则用于观察细菌的动力和短期保存细菌第8页/共16页细菌在培养基中的生长情况在液体培养基中：大多数细菌在液体培养基中生长繁殖后呈现均匀浑浊状态；少数链状的细菌则呈沉淀生长；枯草芽孢杆菌、结核分枝杆菌等专性需氧菌呈表面生长，常形成菌膜。第9页/共16页在固体培养基中生长将标本或培养物划线接种在固体培养基表面，因划线的分散作用，使许多混杂的细菌在固体表面散开，称为分离培养。一般经过18-24
6、小时培养后单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团，称为菌落当进行样品活菌计数时，以在平板培养基上形成的菌落数来间接确定其活菌数，以菌落形成单位（CFU）来表示。挑取一个菌落，移种到另一培养基中，生长出来的细菌均为纯种，称为纯培养第10页/共16页以上是从临床标本中检查鉴定细菌很重要的第一步。各种细菌在固体培养基上形成的菌落，在大小、形状、颜色、气味、透明度、表面光滑或粗糙、湿润或干燥、边缘整齐与否，以及在血琼脂平板上的溶血情况等均有不同表现，这有助于识别和鉴定细菌。第11页/共16页细菌菌落分型光滑型菌落（S型菌落）：表面光滑、湿润、边缘整齐第12页/共16页粗糙型菌落（R型菌落）：表面粗糙、干燥、呈皱纹或颗粒状，边缘多不整齐，R型菌落多由S型菌落变异失去菌体表面多糖或蛋白质形成。R型细菌抗原不完整，毒力和吞噬能力较弱。但也有少数细菌新分离的毒力株就是R型，如炭疽芽胞杆菌、结核分枝杆菌等第13页/共16页黏液型菌落（M菌落）：黏稠、有光泽、似水珠样。多见于有厚荚膜或丰富黏液层的细菌，如肺炎克雷伯菌第14页/共16页第15页/共16页感谢您的观看！第16页/共16页