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1、实验五实验五 培养基的配制与灭菌培养基的配制与灭菌 一、实验目的一、实验目的 1.1.了解配制微生物培养基的基本原理；了解配制微生物培养基的基本原理；2.2.掌握配制、分装培养基的方法；掌握配制、分装培养基的方法；本实验通过常用的细菌培养基的配制，本实验通过常用的细菌培养基的配制，从而了解常规的配制培养基的过程；从而了解常规的配制培养基的过程；3.3.学会各类物品的包装、配制和灭菌。学会各类物品的包装、配制和灭菌。二、概述二、概述 培养异养细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白培养异养细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基（普通培养基）。培养基的种类很多，胨培养基（普通培养基）。培养基的种类很多，根据
2、营养物质的来源不同，可分为天然培养基、根据营养物质的来源不同，可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基等。多数培养基配制合成培养基和半合成培养基等。多数培养基配制是采用一部分天然有机物作碳源、氮源和生长因是采用一部分天然有机物作碳源、氮源和生长因子的来源，再适当加入一些化学药品，就叫半合子的来源，再适当加入一些化学药品，就叫半合成培养基，其特点是使用含有丰富营养的天然物成培养基，其特点是使用含有丰富营养的天然物质，再补充适量的无机盐配制十分方便，能充分质，再补充适量的无机盐配制十分方便，能充分满足微生物的营养需要，大多数微生物都能在此满足微生物的营养需要，大多数微生物都能在此培养基上生长。本
3、实验配制的培养基就属此类。培养基上生长。本实验配制的培养基就属此类。三、主要内容三、主要内容 本实验除了配制培养基以外，还必须准本实验除了配制培养基以外，还必须准备各种无菌物品，包括培养皿、移液管的包备各种无菌物品，包括培养皿、移液管的包装，稀释水的准备等。装，稀释水的准备等。1.1.玻璃器皿的准备玻璃器皿的准备 (1)(1)培养皿的包装培养皿的包装 (2)(2)移液管的包装移液管的包装 (3)(3)棉塞的制作棉塞的制作 3.3.培养基的配制培养基的配制 (1)(1)牛肉膏蛋白胨培养基的配方：牛肉膏蛋白胨培养基的配方：水水100mL 100mL 琼脂琼脂2.0g NaCl 0.5g 2.0g
4、NaCl 0.5g 蛋白蛋白胨胨1g 1g 牛肉膏牛肉膏 0.5g 0.5g pH 7.2 pH 7.27.47.4 本实验配本实验配120mL120mL培养基。培养基。灭菌条件：灭菌条件：121121（相对蒸汽压力（相对蒸汽压力 0.103 0.103 MPaMPa，151520min20min。(2)(2)配制过程：配制过程：a.a.称量：取少于总量的水于烧杯中，按配方称称量：取少于总量的水于烧杯中，按配方称取各种药品，逐一加入水中。取各种药品，逐一加入水中。b.b.加热溶解：将烧杯放在石棉网上，用文火加加热溶解：将烧杯放在石棉网上，用文火加热，并注意搅拌，待所有药品溶解后再补充水分之热，
5、并注意搅拌，待所有药品溶解后再补充水分之所需要量。所需要量。c.c.调节调节pHpH：一般刚配好的培养基是偏酸性的，：一般刚配好的培养基是偏酸性的，故要用故要用1mol/L NaOH 1mol/L NaOH 调调pH pH 至至7.27.27.47.4。应缓慢加。应缓慢加入入NaOHNaOH，边加边搅拌，并不时地用，边加边搅拌，并不时地用pH pH 试纸测试。试纸测试。d.d.分装：分装锥形瓶，分装试管（图分装：分装锥形瓶，分装试管（图13-913-9）。）。图图13-9 13-9 培养基的分装培养基的分装 图图13-10 13-10 斜面培养基的搁置斜面培养基的搁置图图13-13 HVE-5
6、013-13 HVE-50型高压灭菌型高压灭菌器器 e.e.加棉塞、包装后灭菌（见教材灭菌过程）。加棉塞、包装后灭菌（见教材灭菌过程）。f.f.灭菌：因微生物学实验一般都要求对所研究灭菌：因微生物学实验一般都要求对所研究的实验材料进行无自然杂菌的纯培养，所以，实验的实验材料进行无自然杂菌的纯培养，所以，实验中所用的材料、器皿、培养基等都要经包装灭菌后中所用的材料、器皿、培养基等都要经包装灭菌后才可使用。现以才可使用。现以HVE-50HVE-50型高压灭菌器（图型高压灭菌器（图13-1213-12）为）为例，介绍其操作步骤：例，介绍其操作步骤：加水至水位；加水至水位；依次码放物品；依次码放物品；
7、打开电源，盖上盖子；打开电源，盖上盖子；预置灭菌温度和时间；预置灭菌温度和时间；加热加热-灭菌；灭菌；结束，待显示器上温度下降至约结束，待显示器上温度下降至约9090时，可打开盖子取物。时，可打开盖子取物。关上电源。关上电源。g.g.斜面的制作：灭菌后如需制成斜面培养基，应斜面的制作：灭菌后如需制成斜面培养基，应在培养基冷却至在培养基冷却至50506060时，将试管搁置成一定的时，将试管搁置成一定的斜度，斜面高度不超过试管总高度的斜度，斜面高度不超过试管总高度的1/21/21/31/3（图（图13-1013-10）。）。四、实验材料、器皿四、实验材料、器皿 加压蒸汽灭菌器、培养皿、试管、移液加压蒸汽灭菌器、培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、量筒、药物天平、玻棒、管、锥形瓶、烧杯、量筒、药物天平、玻棒、玻璃珠、石棉网、角匙、铁架、表面皿、玻璃珠、石棉网、角匙、铁架、表面皿、pHpH试纸和棉花等；牛肉膏、蛋白胨、试纸和棉花等；牛肉膏、蛋白胨、NaClNaCl、NaOHNaOH和琼脂等。和琼脂等。五、注意事项五、注意事项 使用煤气、各种玻璃器皿等，更要注意使用煤气、各种玻璃器皿等，更要注意安全。安全。