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1、骨形成中巨噬细胞的作用综述,生理学论文摘 要： 巨噬细胞在骨构成中发挥关键作用，其详细的表现由多个复杂的生物学机制共同调控，巨噬细胞分泌的某些信号分子如抑瘤素M(OSM)、前列腺素E2(PGE2)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)和肿瘤坏死因子-(TNF-)等在成骨经过中具有关键作用。另外，巨噬细胞的极化亚型也在成骨经过中发挥调控作用。本文对近年来巨噬细胞影响骨构成的相关机制研究进展进行综述。本文关键词语 : 巨噬细胞;骨构成;间充质干细胞;Abstract： Macrophages play a key role in bone formation, and their specific pe
2、rformance is regulated by multiple complex biological mechanisms. Specifically, certain signaling molecules secreted by macrophages, such as oncostatin M(OSM), prostaglandin E2(PGE2), bone morphogenetic protein-2(BMP-2), and tumor necrosis factor-(TNF-), have a key role in osteogenesis. In addition,
3、 polarized subtypes of macrophages also play a regulatory role at different stages of osteogenesis. This article reviews the research progress of the related mechanisms of macrophages influencing bone formation in recent years.Keyword： macrophages; osteogenesis; mesenchymal stem cells;巨噬细胞由单核细胞分化而来1
4、,是免疫系统中重要组成部分，在宿主防御和调控炎症反响中发挥着关键作用。在急性炎症经过中，巨噬细胞可吞噬入侵的异物促进组织稳态的恢复，随着组织损伤的去除，巨噬细胞会通过募集祖细胞、分泌抗炎因子及生长因子来促进细胞的分化、血管再生并最终完成组织修复2。骨巨噬细胞是一类广泛分布于骨内膜和骨外膜组织的巨噬细胞群，约占骨髓所有细胞的1/63。越来越多的骨免疫学证据显示，骨巨噬细胞在骨构成经过中具有关键的调控作用，本文将对这一作用以及包含的相关分子机制进行综述。1 、巨噬细胞是促进成骨的关键因素巨噬细胞作为骨稳态的重要调节者，是促进成骨的关键因素。2021年He等4研究结果表示清楚，RAW 264.7细胞
5、系的条件培养基(conditioned media, CM)会促进骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell, BMSC)的增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase ,ALP)的活性，讲明巨噬细胞有利于促进BMSC的成骨向分化。2020年Pirraco等5将巨噬细胞和人骨髓间充质干细胞(human bone mesenchymal stem cell, hBMSC)共培养，发现hBMSC的增殖、ALP活性以及骨钙蛋白(osteocalcin, OCN)和骨桥蛋白(osteopontin, OPN)的表示出水平都升高，进一步证明了巨噬细胞能有效诱导h
6、BMSC成骨向分化。另外，2021年Vi等6敲除小鼠的巨噬细胞后，观察到早期骨骼生长延迟缓慢和进行性骨质疏松症，同时，骨髓间充质祖细胞数量且成骨向分化能力降低； 2021年Schlundt等7观察到，通过氯膦酸盐脂质体处理使巨噬细胞耗竭，会导致骨折愈合延迟。以上研究有力地证实了巨噬细胞通过调控间充质干细胞成骨向分化能力来促进骨构成。2 、巨噬细胞可调控成骨相关细胞因子的表示出2.1、 抑瘤素M(oncostain M,OSM)OSM是IL-6家族中的一类细胞因子，可由单核细胞和巨噬细胞产生，在促进成骨分化中发挥重要作用。2020年Guihard等8研究表示清楚，巨噬细胞产生的OSM能够与间充质
7、干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)中的OSM受体(OSMR)结合，激活信号传导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription3, STAT3)-CCAAT加强子结合蛋白(CCAAT-enhancer-binding protein delta)-C / EBP-核结合因子1(core binding factor alpha 1,Cbfa1)分化途径，进而诱导MSC成骨向分化和基质矿化。2021年Guihard等9利用胫骨损伤的小鼠模型的体内实验进一步证明巨噬细胞的产物OSM通过OSMR和STAT3
8、信号传导，促进间充质祖细胞的成骨分化。另外，Ni等10的研究结果显示OSM可能通过抑制Notch配体、受体和靶基因的表示出，来促进小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的分化。进一步研究证实，OSM的浓度也会影响最后的成骨效果。浓度为5 ng/mL的OSM对MC3T3-E1中ALP表示出无明显作用，但当OSM的浓度超过10 ng/mL后， ALP活性增加，且在50 ng/mL的剂量可观察到最明显的作用(峰值)。综上所述，巨噬细胞可通过分泌OSM促进骨构成，且STAT3途径的激活在这里经过中具有重要意义。2.2 、PGE2前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)是一种重要的
9、骨代谢调节剂，是前列腺素(PG)的一种，与OSM类似，PGE2在骨内可以由巨噬细胞产生。2020年Guihard8等实验证明，在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活巨噬细胞的Toll样受体(Toll-like receptors, TLR)后，环氧酶2(cyclo-oxygen-ase2, COX2)表示出升高，进而增加PGE2分泌。2021年Lu等11研究表示清楚，MSC与巨噬细胞共培养4周后能够调控成骨早期的PGE2分泌进而加强骨矿化作用。2018年Ninomiya等12将PGE2受体的一种亚型EP4受体(eprostanoid receptor 4)选择性冲动剂O
10、NO-4819注入大鼠中，显着增加了骨构成，讲明PGE2主要通过EP4受体介导在骨构成中发挥调节作用。同样，Pilbeam等13指出，给予PGE2或EP2和EP4冲动剂，都能够加速骨骼修复。PGE2除了能够直接促进成骨向分化以外，可以通过诱导巨噬细胞中OSM及骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2, BMP-2)的产生8,14,15,进而间接促进骨构成。由于MSC和巨噬细胞都能够分泌PGE2并调节COX2活性，故MSC和PGE2之间存在一种动态的互相作用，可能通过自分泌和旁分泌信号传导两种方式来加强成骨作用11。故PGE2在巨噬细胞促进成骨以及巨噬细胞与M
11、SC的互相作用中具有重要作用。2.3、 BMP-2BMP-2可由巨噬细胞及MSC产生，已被确定在诱导成骨中起着核心作用。2020年Pirraco等5将巨噬细胞与hBMSC共培养，发现hBMSC的增殖率及ALP表示出都升高，且向培养物中添加抗BMP-2抗体后，该作用被抑制。2020年Chen等16研究表示清楚，小鼠巨噬细胞和-TCP共培养产物可显着加强BMSC的成骨向分化，且BMP-2信号通路相关基因的表示出明显上调，进一步证明BMP-2发挥了关键作用。2020年Haversath等17指出：巨噬细胞释放的BMP-2会激活成骨细胞内信号分子SMAD (mothers against decape
12、ntaplegic homologue),并进一步促进Dlx5和Runx相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)的表示出，进而加强BMSC的成骨分化。除此之外，巨噬细胞还能够诱导MSC产生自体BMP-2。 2018年Omar等18研究表示清楚，巨噬细胞的CM会导致hMSCs中BMP-2表示出的升高，进而促进MSCs的成骨分化。2021年Zhang等19研究表示清楚，M2型巨噬细胞可促进MSCs内源性BMP-2的分泌。综上所述，巨噬细胞可通过直接分泌BMP-2或者通过外泌体诱导MSC产生自体BMP-2两种途径来促进骨构成。2.4、 TN
13、F-肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-,TNF-)是一种促炎因子，主要由巨噬细胞分泌，是骨重塑经过中的重要调节因子。2018年Cho等20用TNF-处理脂肪间充质干细胞(adipose derived mesen-chymal stromal cell, ADSC),发现TNF-通过活化核转录因子-B(nuclear transcription factor-B,NF-B)和具有PDZ结合序列的转录共活化因子(transcriptional coactivator with PDZ- binding motif, TAZ)后续表示出加强成骨作用。2020年Briolay
14、等21指出，在MSC中，TNF-显着增加Wnt5a的水平，进而促进成骨，当Wnt5a被阻断时，成骨细胞的矿化作用减弱。但是，与上述研究结果相反，有研究证实TNF-对成骨分化有一定的抑制作用。2018年Zhao等22研究指出，TNF使小鼠细胞中E3泛素蛋白连接酶1(WW Proteinligase1,Wwp1)表示出显着增加，Wwp1促进JunB的泛素化和降解，进而抑制MSC成骨分化。同时，TNF-还通过促进Notch信号的表示出抑制MSC成骨向分化23。2018年Huang等24的研究结果表示清楚，TNF-在较低浓度时主要激活有丝分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)家族成员，进而对成骨分化产生积极
15、影响。而在较高浓度时导致NF-B信号通路的激活，进而抑制成骨。而长时间的任意浓度TNF-处理都会抑制成骨。综上，巨噬细胞可通过产生TNF-来影响骨构成，且这种调控作用因TNF-浓度25的高低而显示不同的结果。3 、巨噬细胞极化亚型在骨构成中发挥关键作用在不同的环境刺激下，巨噬细胞可向不同亚型极化3:促炎型巨噬细胞M1型(经典活化的巨噬细胞)和抗炎型巨噬细胞M2型(替代性活化的巨噬细胞)。不同亚型的巨噬细胞在成骨分化的不同阶段发挥不同的作用。2018年Omar等18研究表示清楚：M1型巨噬细胞的CM可促进hMSC中Runx2和ALP基因表示出上调，而M2型巨噬细胞未产生明显影响。2020年Gui
16、hard等8实验证明通过LPS激活TLR后，M1型巨噬细胞可产生OSM,进而促进成骨。然而，有其他实验得出了相反的结论。2021年Zhang等19实验表示清楚， 与M2型巨噬细胞共培养后，ADMSC矿化作用明显加强，而在与M1型或M0型巨噬细胞共培养中未发现一样的结果。2021 年Gong等26将不同亚型巨噬细胞与MSC共培养，研究结果显示MSC中成骨向分化相关基因的表示出在与M2型巨噬细胞共培养后上调，而与M1型巨噬细胞共培养后相关基因表示出下降。上述实验结果的差异可能与实验设计有关，如使用巨噬细胞条件培养基来培养MSC或将巨噬细胞与MSC共培养可能得出不同的结论，另外，MSC有诱导巨噬细胞
17、从M1型向M2型转化的趋势2,故在共培养经过中可以能发生巨噬细胞亚型的波动19。除此之外，还有其他因素可以能在一定程度上影响结果，如干细胞的来源(骨髓或者脂肪组织),共培养的时长，以及巨噬细胞与干细胞的比例等。最后，不同亚型的巨噬细胞可能在不同的阶段发挥作用。2021年Zheng27等实验指出，M1型巨噬细胞促进了间充质干细胞迁移，而M2型巨噬细胞显着加强了细胞增殖和成骨向分化。2021年Lu等11实验结果证明，早期将MSCs暴露于高密度的促炎型M1型巨噬细胞中，可使MSC分泌更高层次水平的PGE2和其他抗炎信号，进而加强成骨分化，讲明短暂的早期炎症阶段对成骨至关重要。同时，2021年Loi等
18、28实验结果指出，在共培养72 h后，通过IL-4处理巨噬细胞将其调节为M2表型，可进一步加强成骨作用。2020年Guo等29研究发现固有骨诱导材料上培养的巨噬细胞在培养4 d后更易向M2型巨噬细胞极化，讲明在适当的时候促进M1向M2极能构成利于成骨的环境。最佳的转化时间还遭到性别的影响，2022年Nathan等30发现，在男性共培养物中从M1过渡到M2的最佳时间为96 h, 而在女性中为72 h, 可能与男性和女性之间类固醇受体的差异有关。4 、总结骨骼系统和免疫系统严密相关，作为免疫系统中重要的组成部分，巨噬细胞在华而不实起着关键作用。正确认识巨噬细胞在调控骨构成中的作用机制对于促进骨构成
19、具有重要意义。当前已有大量文献报道，巨噬细胞可通过分泌各种因子来促进骨构成，如OSM、PGE2、BMP-2等，但同时巨噬细胞在成骨中的作用可能不仅仅仅是通过单一介质起作用，而是多因素的综合作用；另外，巨噬细胞的极化经过在促进成骨中也具有重要意义，说明华而不实的作用机制对于将来骨免疫学的发展具有重要意义，同时这些发现也将有助于为治疗骨科疾病提供一种新的思路。以下为参考文献1 Epelman S,Lavine KJ,Randolph GJ Origin and functions of tssue macrophages 凹 Immunity,2020.41(1):21-35.2 Pajarine
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