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1、土壤外丹参部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量检测,分析化学论文摘 要： 建立了使用HPLC同时测定丹参地上部分中丹酚酸B和迷迭香酸含量的分析方式方法。在流动相甲醇 (A) -0.8%冰乙酸水溶液 (B) 梯度洗脱, 流速1 m L/min, 柱温35, 检测波长250 nm色谱条件下测定结果表示清楚, 丹酚酸B和迷迭香酸的质量浓度分别在14.0700.0 g/m L (r=1.000 0) 和12600 g/m L (r=0.999 6) 的线性范围内, 有良好的线性关系;丹酚酸B和迷迭香酸的检出限LOD (S/N=3) 分别为0.2, 0.3 g/m L, 定量限LOQ (S/N=10) 分别为
2、1.0, 1.0 g/m L。丹酚酸B和迷迭香酸的平均加样回收率分别为99.16% (RSD=0.735%) 和101.11% (RSD=2.11%) 。该方式方法操作简便、分析效果好、灵敏度高, 具有良好的重复性和回收率, 可同时测得丹参地上部分中水溶性成分丹酚酸B和迷迭香酸的含量。 本文关键词语： 丹参; 丹酚酸B; 迷迭香酸; HPLC; Abstract： To develop a HPLC method for investigate the determination of the content of salvianolic acid B and rosmarinic acid
3、in the aerial part of Salvia miltiorrhiza. Gradient elution in mobile phase methanol (A) -0.8% aqueous glacial acetic acid (B) , flow rate 1 m L/min, column temperature 35 , detection wavelength 250 nm. The results showed that a good linearIity was obtained over 14.0700.0 g/m L (r=1.000 0) for salvi
4、anolic acid B, 12600 g/m L (r=0.999 6) for rosmarinic acid, respectively. The average recoveries of salvianolic acid B and rosmarinic acid were 99.16% (RSD=0.735%) and 101.11% (RSD=2.11%) , respectively. The HPLC method was simple and easy to perform, and the analytical effect is good. The content o
5、f two water-soluble components, salvianolic acid B and rosmarinic acid, can be measured simultaneously. Keyword： Salvia miltiorrhiza; salvianolic acid B; rosmarinic acid; HPLC; 丹参 (Salvia miltiorrhiza Bge) 为唇形科多年生草本植物, 主产于陕西、山东、山西、河南、河北等地1, 以根入药, 具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等成效2, 是心脑血管病及多种炎症的常用药材。由于丹参地上部分约占全草的2
6、/3, 而且每年均可采收, 有更丰富的资源, 但丹参地上部分大多被遗弃, 未得到有效利用, 造成药用资源的浪费和生态环境的污染3。研究表示清楚4, 丹参地上部分含有丰富的丹酚酸类5、黄酮类6、三萜类等化学成分, 具有较强的抗氧化7、降血糖等活性, 并能有效改善脑梗塞、脑缺血等异常感觉和状态8, 华而不实丹酚酸B和迷迭香酸等水溶性成分9在临床上广泛用于治疗心血管系统疾病10。为了开发丹参地上部分药用资源利用, 采用HPLC法对丹参地上部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量进行了分析评价。 1 、材料与方式方法 1.1、 仪器与试剂 Agilent 1200型高效液相色谱仪, 美国安捷伦公司产品;KQ32
7、00DE型数控超声波清洗器, 昆山超声仪器限公司产品;Sarturius BT 124S/BT 25S型电子天平。 丹参地上部分由密山市康华中药材种植专业合作社提供的2021年8月8日采集品;甲醇及其他试剂均为色谱分析纯;水为娃哈哈纯净水;对照品丹酚酸B (98.51%, MUTS-18040503) , 成都曼思特生物科技有限公司提供;迷迭香酸 ( 97%, J1613019) , 阿拉丁试剂有限公司提供。 1.2 、试验方式方法 1.2.1、 色谱条件 色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18型 (4.6 mm 250 mm, 5 m) ;流动相:甲醇 (A) -0.8%冰乙
8、酸水溶液 (B) 梯度洗脱 (03 min, 30%A 31%A;353 min, 31%A 35%A, 5365 min, 35%A 40%A, V/V) ;流速1 m L/min, 进样量5 L, 柱温35, 检测波长250 nm。 1.2.2、 丹酚酸B和迷迭香酸对照品溶液配制 精致细密称取丹酚酸B和迷迭香酸对照品7.0 mg和6.0 mg, 分别置于10 m L容量瓶中, 加适量甲醇溶解并稀释至刻度, 制得质量浓度分别为0.70 mg/m L和0.60 mg/m L的对照品溶液。 1.2.3、 供试品溶液配制 取枯燥至恒质量的丹参地上部分, 精致细密称取粉碎后的丹参地上部分粉末8.42
9、 g, 置于带有回流冷凝器的250 m L圆底烧瓶中, 每次参加80.0 m L甲醇, 加热回流1.5 h, 回流提取3次, 过滤后合并滤液浓缩至恒质量, 得丹参地上部分甲醇提取物。精致细密称取上述醇提物, 配制成质量浓度为5 mg/m L的供试品溶液, 用微孔滤膜 (0.22 m) 滤过, 备用。 1.2.4、 色谱分析 精致细密汲取供试品溶液、丹酚酸B和迷迭香酸对照品溶液各5 L, 在 1.2.1 项的色谱条件下进行分析, 得供试品溶液色谱图和丹酚酸B (DB) 和迷迭香酸 (MD) 的混合对照品溶液色谱图。 供试品溶液色谱图见图1, 迷迭香酸 (MD) 的混合对照品溶液色谱图见图2。 图
10、1 供试品溶液色谱图 2 、结果与分析 2.1、 线性关系及检测限和定量限 精致细密移取丹酚酸B (0.70 mg/m L) 和迷迭香酸 (0.60 mg/m L) 储备液适量, 分别用甲醇稀释至质量浓度为14.0, 35.0, 70.0, 140.0, 700.0 g/m L和12.0, 30.0, 60.0, 300.0, 600.0 g/m L的对照品溶液, 精致细密汲取上述溶液各5 L, 进行高效液相色谱分析, 连续进样3次, 记录峰面积。以质量浓度为横坐标, 所对应的峰面积为纵坐标, 分别对丹酚酸B和迷迭香酸的质量浓度进行线性回归分析, 得回归方程分别为Y=1 177.1X+26.8
11、51, R2=1.0;Y=1 468.9X+112.21, R2=0.999 3。表示清楚丹酚酸B的质量浓度14.0700 g/m L, 迷迭香酸的质量浓度12600 g/m L时有良好的线性关系。 图2 迷迭香酸 (MD) 的混合对照品溶液色谱图 经HPLC测定, 以信噪比 (S/N) 为3和10所对应样品中该物质的质量浓度分别计算检限测 (LOD) 和定量限 (LOQ) , 丹酚酸B和迷迭香酸的检测限检出限LOD (S/N=3) 分别为0.2, 0.3 g/m L;定量限LOQ (S/N=10) 分别为1.0, 1.0 g/m L。 2.2 、精致细密度试验 精致细密汲取对照品溶液丹酚酸B
12、和迷迭香酸5 L, 在 1.2.1 项的色谱条件下进行分析, 连续进样3次, 记录色谱峰面积。分析计算得丹酚酸B和迷迭香酸各峰面积的RSD分别为3.18%和1.99%, 精致细密度良好。 2.3 、稳定性试验 分别精致细密汲取丹酚酸B和迷迭香酸对照品溶液5 L, 依次在0, 4, 8, 12, 16, 18, 24 h进样分析, 记录各色谱峰面积, 计算得其RSD分别为3.42%和3.85%, 表示清楚2种对照品在24 h内都稳定。 2.4、 样品含量测定 精致细密汲取供试品溶液5 L, 在 1.2.1 项的色谱条件下进行分析, 记录色谱峰面积, 用标准曲线法计算丹参地上部分丹酚酸B和迷迭香酸
13、含量分别为5.24%和0.59%。 2.5 、重复性试验 取同一批样品, 精致细密汲取供试品溶液5 L, 连续进样6次, 记录各色谱峰面积, 测定丹酚酸B和迷迭香酸的含量分别为5.23%和0.59%, 其RSD分别为1.32%和1.14%。表示清楚该方式方法重复性好。 2.6 、加样回收率试验 精致细密称取同一批已经知道对照样品含量80%, 100%, 120%的丹参地上部分, 共9份, 每3份1组, 分别参加对照品丹酚酸B和迷迭香酸 (质量浓度分别为0.12, 0.03 mg/m L) 1 m L进样分析, 记录色谱峰面积。结果表示清楚, 丹酚酸B和迷迭香酸的平均回收率分别为99.16%和1
14、01.11%, 其RSD分别为0.735%和2.11%。 3 、结论 丹参作为常用传统中药, 市场上已开发出多种制剂, 但均以根入药, 资源更为丰富的地上部分并未得到有效利用, 随着临床应用范围的扩大, 亟需寻找新药源。据文献11,12可知, 丹参根部中丹酚酸B和迷迭香酸的含量分别在1.81%11.55%和0.11%0.74%, 试验以丹参地上部分为研究对象, 经HPLC法对由密山市康华中药材种植专业合作社提供的丹参地上部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量进行分析, 得丹酚酸B和迷迭香酸的含量分别为5.24%和0.59%, 与根部含量相当, 表示清楚丹参地上部分作为获取丹酚酸类化学成分的新资源具有很
15、好的应用前景。 以下为参考文献 1李生萍.丹参中有效成分的分离、提取、提纯J.中国医药指南, 2020, 11 (4) :78-79. 2肖禾, 宋民宪, 赖娟.国家药品标准中丹参的质量控制情况J.中国药事, 2006, 20 (1) :57-59. 3段金廒, 宿树兰, 郭盛, 等.中药资源产业化经过废弃物的产生及其利用策略与资源化形式J.中草药, 2021, 20 (3) :298-300. 4 孙国平, 徐亚莉, 司亚楠.丹参叶的研究进展J.医药前沿, 2020 (2) :128-129. 5沙秀秀, 宿树兰, 沈飞, 等.不同生长期丹参茎叶及花序中丹酚酸类化学成分的分布与积累动态分析评
16、价J.中草药, 2021, 46 (2) :3 414-3 419. 6李欣, 薛治浦, 朱文学.丹参不同部位总酚酸和总黄酮含量分析及其抗氧化活性研究J.食品科学, 2018, 32 (3) :108-111. 7 Matkowski A, Sylwia Zielinska, Jan Oszmianski, et al.Antioxidant activity of extracts from leaves and roots of Salvia miltiorrhiza Bunge, S. przewalskii Maxim and S. verticillata L.J. Bioresou
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