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1、影响土壤中蛔虫卵检测结果的相关因素,土壤污染论文蛔虫病是人体最常见的肠道寄生虫病之一，也是我们国家一项较严重的公共卫生问题，严重危害人民群众的身体健康，阻碍经济发展和社会进步。被蛔虫卵污染的土壤是人类感染的主要来源，为了解我们国家农村土壤中蛔虫卵污染情况，卫生部于 2018 年下发了(2018年全国农村环境卫生监测项目技术方案 ，要求对土壤中蛔虫卵进行检测。锦州市选取凌海市为监测点，从 2018 年开场，每年随机选择 20 个行政村进行采样，3 年共采集了 60 份样品。为配合监测工作的开展，科学有效的检测出蛔虫卵，本文通过对 60 份样品的检测结果进行分析，来讨论影响检测结果的相关因素。 1
2、 材料与方式方法 1 1 仪器 CX31 型显微镜( 日本奥林巴斯有限公司) ，ALLegra X 12 型离心机( 美国贝克曼库尔特商贸有限公司) ，XH C 型漩涡混匀器( 常州润华电器有限公司) 。 1 2 试剂 5% 氢氧化钠溶液( 批号: 20200815，生产厂家: 天津市光复科技发展有限公司) ，饱和硝酸钠溶液( 批号: 20200504，生产厂家: 天津市光复科技发展有限公司) 。 1 3 检测方式方法 1 3 1 检测标准 采用饱和硝酸盐漂浮法进行检测，参考(粪便无害化卫生标准( GB7959 1987)，(土源性线虫病防治技术方案( 2018 年版)。 1 3 2 检测步骤
3、 剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土样中的大颗粒; 然后用孔径 3 mm 的铜筛和孔径为2 mm的铜筛过筛，收集过筛后的土样。取 50 ml 大离心管，放入过筛后的土样 10 g，加5%氢氧化钠溶液至40 ml 或 45 ml 刻度线。放入 10 颗钢珠，用橡皮塞紧塞管口，在振荡器上振荡 15 min，可反复 3 次 4 次，待充分混合后，以 2000 r/min，离心 4 min。弃去上部的氢氧化钠，参加饱和硝酸钠溶液充分搅拌混匀，2000 r / min 离心 4 min，再加饱和硝酸钠溶液满至管口，覆上 18 mm 18 mm 盖玻片。静置 15 min 后，将盖玻片迅速翻转取下，置于载玻片
4、上镜检，同时再覆上第 2 张盖玻片，如此反复，共计数 3 张盖玻片。 1 4 质量控制 1 4 1 采样方式方法 统一 采用 1 m2范围内 5 点取样法，采集表层土壤，深度均在 5 cm 20 cm 之间，采样量 50 g. 1 4 2 清洗铜筛 每次将筛过土壤的铜筛进行清洗，晾干后筛下 1 份样品。 1 5 统计分析 采用 SPSS 15 0 统计软件进行数据分析。 2 结 果 2 1 采样季节对检测结果的影响 2018 年 2020年锦州市共采集监测点土壤样品 60 份，每年采集 20份。2018 年 8 月份、2020 年 8 月份采样，2020 年 11月份采样。3 年间蛔虫卵的总体
5、检出率为 58 3%，2020 年检出率最高为 70% ，3 年间检出率差异无统计学意义( 2= 1 782，P 0 05) 。2020 年检出活卵数量最高，200 g 样品检出活卵数为 21 个，2020 年最低为 9 个，3 年间蛔虫卵存活率差异有统计学意义( 2=8 182，P 0 05) ( 表 1) 。【表1】 将 8 月份采集的 40 份样品与 11 月份采集的 20份样品检测结果进行比拟，11 月份采集样品的检出率和存活率均低于 8 月份，存活率下降比例较大。在采样方式方法统一的前提下，随着土壤温度的降低，蛔虫卵的检出率和存活率均有所下降( 表 2) 。【表2】 2 2 振荡工具
6、的使用对检测结果的影响 挑选出检出蛔虫卵的 5 份平行样品进行振荡效果比拟，振荡时间均为 15 min。从 5 份平行样品的检测结果中能够看出，手动振荡的检出数量均多于振荡器振荡。由此可见在本实验室的实验条件下，手动振荡的效果要好于振荡器的振荡效果( 表 3) 。【表3】 2 3 操作手法对检测结果的影响 玻片吸附前要求饱和硝酸钠溶液量要恰当，应到达满而不溢出; 覆上玻片后假如出现气泡，此时若马上换另一张玻片再吸，会降低检出率; 假如再补充液体试图将气泡赶走，成功率也会很低，多数情况下气泡未被赶走，而液体溢出，降低检出率。离心管盖的内壁由于震荡时液体会有一定的吸附，因而盖的内壁也需用硝酸钠溶液
7、进行冲洗，否则会降低检出率。 2 4 镜检对检测结果的影响 镜下计数时要求检测人员把握活卵和死卵之间的形态区别，应将含有幼虫的计为活卵，其他阶段的或单细胞的计为死卵。 3 讨 论 通过锦州市 3 年间采集的 60 份土壤样品中蛔虫卵的检测结果能够看出，在统一采样方式方法和检测方式方法并确保质量控制的前提下，采样季节对蛔虫卵检测有一定影响。随着土壤温度的降低，土壤中的蛔虫卵大部分已经死掉，要想获得较高的蛔虫卵存活率应在7 月 8 月份进行监测采样，这同(辽宁省农村环境卫生监测项目技术方案要求是一致的。振荡器的使用应根据实验室情况而定，检测前可将振荡器的振荡效果进行比拟，进而选择理想的振荡工具，建
8、议本实验室更换振荡效果好的振荡器。另外操作手法、土壤性质、离心的时间与次数等对检出率均有影响。 实验人员只要熟悉把握检测原理和各种影响因素，进而采用科学的检测方式方法，才能获得理想的检测效果进而提高土壤中蛔虫卵的检出率。 以下为参考文献 1 中国人民共和国卫生部 2018 年全国农村环境卫生监测项目技术方案 2018 04 29 2 中国预防医学科学院环境卫生与卫生工程研究所 GB7959 1987 粪便无害化卫生标准S 北京: 中国标准出版社，1987 3 中国人民共和国卫生部土源性线虫病防治技术方案2018 06 17 4 钱颖骏，诸廷俊，王聚君，等4 种漂浮法分离土壤中人蛔虫卵的效果比拟J 中国病原生物学杂志，2008，3( 4) : 305 306 5 叶奕英，许政拱，龙祖培，等 影响土壤蛔虫卵分离因素的实验观察J 广西医学，1982，4( 5) : 230 232 6 朱均勇，张明华，郭枫 寄生虫卵饱和盐溶液浮聚法的比拟研究J 数理医药学杂志，2002，15( 2) : 173