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1、神对大鼠肝脏Nrf2-ARE结合能力的影响及银杏叶片的干预作用王祺I张爱华.贵州医科大学公共卫生学院毒理学教研室环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室（;*责任作者：）摘要：【目的】检测研呻毒大鼠肝脏细胞核内核因子-E2-相关因子-2（Nrf2）与抗氧化反应元件（ARE） 结合能力及其下游基因转录和蛋白表达，探讨碑对Nrf2-ARE结合能力的影响及其银杏叶片的干预 作用和机制。【材料和方法】神中毒大鼠模型建立：健康断乳Wistar大鼠30只，随机分为正常对照 A组（常规喂养），饮水型伸中毒组（饮用含硅100mg/L水），燃煤型碎中毒组（低、中、高神粮 食污染组：喂饲高碑煤烘烤玉米粉配制的含
2、珅饲料，含硅量分别为25、50、lOOmg/kg）,每组6只， 实验周期90天；银杏叶片干预模型建立：健康断乳Wistar大鼠30只，随机分为正常对照B组（常 规喂养135天），单纯银杏叶片组（常规喂养90天后，银杏叶片25mg/kgbw灌胃45天，6d/周）， 饮水型神中毒对照组（饮用含神io。mg/L水90天后，饮用灭菌自来水45天），高神粮食污染对照 组（喂饲含种l（X）mg/kg的饲料90天后，喂饲标准饲料45天），银杏叶片治疗组（喂饲含珅lOOmg/kg 的饲料90天后，喂饲标准饲料45天，喂饲标准饲料期间银杏叶片25mg/kgbw灌胃，6d/周），每 组6只。实验终期采集大鼠肝脏组
3、织，凝胶电泳迁移试验（EMSA）法检测大鼠肝脏细胞核内Nrf2-ARE 结合能力；实时荧光定量PCR （qPCR）检测大鼠肝脏醍NADH脱氢能I （NQ01）和血红素氧合酶 1 （HO-I） mRNA表达;免疫印迹法（Western blowing）检测大鼠肝脏NQO1和HO-1蛋白表达。【结 果】随染碑浓度的升高，大鼠肝脏Nrf2-ARE结合能力、NQ01和HO-lmRNA及蛋白表达逐渐增强， 与正常对照A组比较，差异有统计学意义（PV0.05）；高碑粮食污染组与饮水型碑中毒组比较，各 指标差异均无统计学意义（P0.05）；相关性分析显示，神中毒大鼠肝脏Nrf2-ARE结合能力与NQO1 和
4、HO-lmRNA表达量及NQ01和HO-1蛋白表达均呈正相关关系（P0.01） ,银杏叶片干预后，其 结果与正常对照B组比较，单纯银杏叶片组大鼠肝脏Nrf2-ARE结合能力、NQO1和HO-lmRNA及 蛋白表达均增强：与高碑粮食污染对照组比较，银杏叶片治疗组大鼠肝脏Nrf2-ARE结合能力、NQO1 和HO-lmRNA及蛋白表达亦增强，差异均有统计学意义（P0.（）5）。【结论】珅可在一定程度上激活 Keapl/NrfZARE抗氧化防御通路，但其作用有限，尚不能阻抗种的毒性作用；银杏叶片可改善碑所 致大鼠肝损伤，该作用与其进一步有效增强Keapl/Nrf2-ARE通路的抗氧化防御功能有关。关键词：碑中毒，煤，Nrf2, ARE,银杏叶片基金项目：国家自然科学基金（、）；黔科合人才团队基金（2012） 4003