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1、2.2.培养基的分类培养基的分类（1 1）按存在的物理状态分 液体培养基 （不含凝固剂）半固体培养基（凝固剂琼脂含0.2-0.2-0.5%0.5%）固体培养基 （凝固剂琼脂含1.5-1.5-2.0%2.0%）。（2 2）按照培养基的用途差异分 基础培养基 加富培养基 选择培养基 鉴别培养基第1页/共25页（3）按组成成分分）按组成成分分天然培养基合成培养基半合成培养基琼脂的特性：成分是多缩半乳糖，绝大多数微生物不能分解利用。96溶解，45凝固对微生物生长没有毒害作用培养基的作用：微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。第2页/共25页3.3.培养基配制原则培养基配制原则选择适宜的选择适宜的营养物质
2、营养物质营养物质浓度及营养物质浓度及配比配比合适合适控制控制pH条件条件控制氧化还原电位控制氧化还原电位原料来源的选择原料来源的选择根据培养根据培养目的目的不同调配不同调配灭菌处理灭菌处理第3页/共25页4.配制培养基的步骤v原料的预处理原料的预处理v计算用量计算用量v称量称量v溶解溶解v调调pHpHv过滤过滤 v分装：分装：v试管：固体：试管：固体：1/51/5试管；液体：试管；液体：1/4-1/51/4-1/5。v三角瓶：三角瓶：1/3-1/21/3-1/2v包扎包扎v灭菌：灭菌：v一般培养基，一般培养基，121 121 0 0C,15-30minC,15-30min；v含糖培养基：含糖培
3、养基：112 112 0 0C,15-30minC,15-30min；v易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合v摆斜面（固体，试管）摆斜面（固体，试管）v无菌检查无菌检查第4页/共25页第5页/共25页四、作业2人1组配制阿须贝培养基2000ml（全班），每组用250ml三角瓶装120ml；装蒸馏水3支，每支4.5 ml 第6页/共25页注 意 事 项1 1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；2 2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；3 3、配制固体培养基时，先将其他药
4、品加热溶解到快沸时，再将称好、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；4 4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的的1/51/5，液体培养基的装量约为管高的，液体培养基的装量约为管高的1/41/4，三角瓶的装量不超过瓶体，三角瓶的装量不超过瓶体的的1/2 1/2；5 5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，
5、以免沾污棉塞、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。而引起污染。第7页/共25页实验12 12 灭菌和消毒 一、实验目的一、实验目的学习微生物实验的一些准备方法（灭菌培养皿的准备、灭菌吸管的准备、无学习微生物实验的一些准备方法（灭菌培养皿的准备、灭菌吸管的准备、无菌水的准备、培养基平板和斜面的准备等），为后续实验做准备。菌水的准备、培养基平板和斜面的准备等），为后续实验做准备。了解消毒与灭菌应用范围及基本原理，学习并掌握实验室常用消毒与灭菌的了解消毒与灭菌应用范围及基本原理，学习并掌握实验室常用消毒与灭菌的方法方法第8页/共25页二、实验原理 灭菌灭菌是应用理化方
6、法杀灭物体上是应用理化方法杀灭物体上所有所有微生微生物物 消毒消毒是应用理化方法杀灭物体上是应用理化方法杀灭物体上部分部分微生微生物物（主要是病原微生物）（主要是病原微生物）。三、灭菌的常用方法 物理法：高温灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌 化学法：化学药剂杀菌第9页/共25页高温灭菌高温灭菌干热灭菌(dry heat sterilization)1.1.火焰灭菌：酒精灯、接种环2.2.干燥热空气箱灭菌：干燥热空气箱160-170160-170,2,2小时小时（利用热空气灭菌（利用热空气灭菌)适用范围：金属器皿、玻璃器皿第10页/共25页湿热灭菌湿热灭菌(moist heat sterilizati
7、on)(moist heat sterilization)利用饱和热蒸汽灭菌。利用饱和热蒸汽灭菌。高压蒸汽灭菌锅采用高压蒸汽灭菌锅采用高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌的一种。是湿热灭菌的一种。利用水利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升以达到高的沸点随水蒸气压力的增加而上升以达到高温灭菌目的的方法温灭菌目的的方法a 方法方法：一般：一般121（1kg/cm2或或15磅磅/英寸英寸2）20-30min。b 适用适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。c 注意事项注意事项：灭菌开始排净冷空气；灭菌终了，自：灭菌开始排净冷空气；灭菌终了，自然缓慢降压回零；
8、灭菌结束，趁热取出物品。然缓慢降压回零；灭菌结束，趁热取出物品。第11页/共25页高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅原理：原理：利用饱和热蒸汽灭菌。利用利用饱和热蒸汽灭菌。利用水的沸点随水蒸气压力的增加而水的沸点随水蒸气压力的增加而上升以达到高温灭菌的目的。上升以达到高温灭菌的目的。方法：方法：一般一般121（1kg/cm2或或15磅磅/英寸英寸2）20-30min。适用：适用：耐高温物品如培养基，无菌水，耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。培养皿。注意事项：注意事项：灭菌开始，外筒加水，桶灭菌开始，外筒加水，桶盖对称拧紧，排净冷空气；盖对称拧紧，排净冷空气；灭菌终了，自然缓慢降压回零；灭菌终了，自
9、然缓慢降压回零；灭菌结束，趁热取出物品。灭菌结束，趁热取出物品。第12页/共25页四四、高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌操作步骤(1)灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适量的水，将内桶放入。(2)装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以两两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。(3)加热排气：接通电源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，维持3-5min，锅内空气排尽，关上排气阀。(4)升温保压：压力为1.05kg/cm2,121.3,2030min(5)出锅；隔断热源，自然降温，待压力表指针回到零，打开排气阀，稍等一些时间，再开盖取物。第13页/共25页实验13 13
10、微生物的纯系分离 1 了解土壤微生物的分离纯化及测数的基本原理。2 学习并掌握微生物分离纯化技术方法。3 学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。第14页/共25页二、基本原理二、基本原理 土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。第15页/共25页图14-1 从土壤中分离微生物操作过程第16页/共25页三、实验步骤土壤样品采集在待测田块上，若田
11、块面积小于5050平方米则按对角线三点采样；若田块面积大于5050平方米按对角线五点采样。采样一般定点于耕作层0-20cm0-20cm，先除去表土1-2cm1-2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。第17页/共25页固氮菌的分离纯化及测数1.1.制备土样稀释液2.培养基的准备3.倾注法接种4.保温培养5.分区划线法纯化6.计数第18页/共25页1 1 制备土样稀释液吹吸三次混匀，无菌操作第19页/共25页2 2 培养基的准备 融化阿须贝培养基，融化后保温在4848。并取3 3个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明1010-2 2、1010-3-3、1010-4-4。3 3 倾注法
12、接种 先按1010-4-4 、1010-3-3 、1010-2-2 的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中（每个平皿接入1ml1ml），再向每个平皿倾注约15 ml15 ml的阿须贝培养基（5050）待冷凝，混合均匀。4 4 保温培养 将已经接种的平皿静置10min10min后，放入温箱倒置培养7 7日（3030），观察结果。第20页/共25页第21页/共25页5 菌种纯化平板划线分离，其划线方法有以下两种：分段划线 连续划线第22页/共25页第23页/共25页6 计数：要求30300之间计数。作业：P 10-12P 10-12下次实验：实验十五、十六第24页/共25页感谢您的观看。第25页/共25页