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1、目的要求a.掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤和关键点b.掌握革兰氏染色法的步骤和关键点c.识别细菌的革兰氏染色结果并画图d.学习无菌操作技术 第1页/共16页材料用具显微镜，擦镜纸，纱布革兰氏染液香柏油,自来水,95%酒精;载玻片,插镜纸,接种环,镊子,酒精灯;金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,未知菌12小时的液体培养液大肠杆菌和酵母菌平板第2页/共16页实验步骤1.涂片左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中去菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜;从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有的一滴自来水中;第3页/共16页实验步骤2.干燥在空气
2、中自然干燥或在火焰快速通过干燥(与热固定同步进行).3.热固定用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过几次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜.第4页/共16页实验步骤4.染色在固定的标本上加结晶紫染液1-2滴,染色1min,轻轻滴加水洗;吸干,加半滴水,盖上盖玻片,滴上半滴镜油油镜检。(到此实际上即为细菌普通染色)揭去盖玻片,吸干水,滴加1-2滴革氏碘液媒染1min,轻轻水洗,吸干。第5页/共16页实验步骤滴加95%乙醇溶液(或30%丙酮乙醇脱色),轻轻摇动玻片至液滴无色,不要过分脱色(约30秒),立即轻轻滴加水洗;吸干。滴加蕃红染液复染3min,轻轻滴加水洗;吸干载玻片背面及标本周围水渍,滴上半滴
3、水，盖上盖玻片,油镜镜检;第6页/共16页实验步骤5.镜检注意标本中细菌的形态,大小,排列,和颜色.革兰氏阳性菌为紫色;革兰氏阴性菌为红色;第7页/共16页金黄色葡萄球菌(24hrs)染色结果第8页/共16页金黄色葡萄球菌(48hrs)染色结果第9页/共16页金黄色葡萄球菌(72hrs)染色结果第10页/共16页大肠杆菌(24hrs)染色结果第11页/共16页讨论记录并描绘革兰氏染色结果,注意形状,排列和颜色,看看与理论上是否相同;如不同,分析原因;分析影响革兰氏染色结果的因素;酵母菌能进行染色吗?结果如何?为什么?第12页/共16页注意事项干净的载玻片,合适取菌量,菌龄,热固定,每一步水洗要彻底而且吸干,和酒精脱色程度是实验成功的关键禁止把染液倒入水池中,回收到废液桶中第13页/共16页实验三结束，准备实验四肉汤蛋白胨培养基的配制（按实验指导61页配方琼脂为2）。400ml/组置500ml三角烧瓶中用封口膜封好瓶口，用记号笔在瓶上标明培养基名称、组号（如周次座次，132）、配制时间，高压灭菌。包平皿10个/包/组、试管4支/包/组、1ml枪头2个/包/组、5 ml枪头1个/包/组、涂布器1个/包/组，高压灭菌。洗平皿10个/组。说明：以上内容全班交叉进行。第14页/共16页Thank you!第15页/共16页感谢您的观看！第16页/共16页