微生物的生长新.pptx

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1、15.1.1 生长与繁殖的概念何谓生长？同化作用大于异化作用时，细胞质的量增加，表现在细胞体积或重量的不断增加，这种现象称生长何谓繁殖？生长一定程度后细胞分裂，这就是细菌的繁殖5.1微生物的生长及其特性第1页/共90页21 单细胞微生物生长：细胞物质增加，体积增大繁殖：细胞数目的增加生长：细胞物质增加，体积增大，细胞数目增加 繁殖：生命个体数目的增加5.1.1 生长与繁殖的概念2 多细胞微生物第2页/共90页3个体的生长和繁殖体现为群体的生长（微生物重量或数目的增加）群体生长个体生长个体繁殖在微生物学中“只有群体的重复”才更有意义，因此“生长”一般指群体生长第3页/共90页41、间歇培养（Ba

2、tch cultivation）和生长曲线（growth curve）接种间歇培养：将一定量细菌接种于封闭的、一定量的液体培养基内，在一定条件下培养。培养过程不投加或取出任何东西。这种培养方式也叫分批培养。生长曲线：细胞量随时间的变化曲线称生长曲线5.1.2 细菌的生长特性第4页/共90页5总细胞数细菌的典型生长曲线：以时间为横坐标，以细菌数为纵坐标，做出一条菌数随时间变化的曲线，即为生长曲线 活细胞数III培养时间细胞个数第5页/共90页600时间细菌数生长速度缓慢期对数期稳定期衰老期活菌数总菌数细菌生长曲线（按细菌数目的对数绘制）第6页/共90页7时间活细菌重量生长率上升阶段生长率下降阶段

3、内源呼吸阶段细菌生长曲线(按细菌重量绘制)第7页/共90页81)停滞期、适应期（lag phase）影响停滞期长短的因素：接种龄：种子(inoculum)处于什么生长期、接种量：即初期微生物浓度与基质浓度的比 培养基成分：总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数特点：生长速率常数近于零，数目变化不大 细胞形态变大 rRNA含量增高 合成代谢较活跃第8页/共90页9产生停滞期的原因：缺乏分解有关基质的酶 缺乏充足的代谢中间产物总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数1)停滞期、适应期（lag phase）第9页/共90页102）指数期（exponential phase）对数期（stationary

4、 phase）最短总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数细胞数(量)以指数形式增加的时间段 特点：生长速率最大,世代时间（generation time）倍加时间（doubling time）酶系活跃、代谢旺盛细胞进行平衡生长，体内各成分最为均匀 教学实验和发酵工业都用对数期 的细胞做实验材料,或“种子”第10页/共90页11代时(generation time):细胞数目增长1倍所需时间 Nt=2n No No 起始细胞数 Ntt时细胞数 n 世代数 lg Nt=lgNo+n lg2 n=(lg Nt-lgNo)/lg2k=n/t 平均生长速度：世代数/小时 g=t/n 平均代时(繁殖一代所

5、需时间）指数期的数学描述第11页/共90页12某些微生物的代时细 菌：大 肠 杆 菌 40C 0.35h 枯草芽孢杆菌 40C 0.43h藻 类：蛋白核小球藻 25C 7.75h原生动物：尾状核草履虫 26C 10.4h真 菌:酿 酒 酵 母 30C 2h第12页/共90页133）稳定期（stationary phase）：恒定期、最高生长期、生长下降期特点：净增长速度为零繁殖与死亡速度相等正生长与负生长相等出现稳定期的原因：营养物尤其是生长因子耗尽 营养物比例失调 代谢物的积累 pH、DO、氧化还原电位的变化第13页/共90页144）衰亡期（decline phase,death phase

6、）内源呼吸期（endogenous respiration phase）内源呼吸:体内贮藏物质酶等一部分细胞物质的氧化特点:细胞形态多型化细胞会发生自溶现象(autolysis)出现死亡期的原因：营养物不足（代谢产物的积累）外界条件恶化总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数第一节 细菌的生长及其特性第14页/共90页155.1.3 生长研究微生物生长的方法1 同步培养是使群体细胞能处于同一生长阶段，并同时进行分裂的生长方式是将一定量的微生物接种在一个封闭的、盛有一定量液体培养基的容器中，不补加新营养物质,不排出产物,保持一定的温度、PH和溶解氧，微生物在其中生长,也叫间歇培养2 分批培养第15

7、页/共90页165.1.3 生长研究微生物生长的方法3 连续培养在微生物的整个培养期间，通过一定的方式使微生物能以恒定的比生长速率生长并能持续生长下去的一种培养方法恒化器：营养物质浓度恒定恒浊器：光电系统控制培养中菌体浓度恒定第16页/共90页17连续培养示意装置图第17页/共90页18连续培养的稀释率连续培养的稀释率例例:20ml/h 20ml/h 的流速连续培养的流速连续培养,培养液体积培养液体积1000ml,1000ml,求稀释率求稀释率:D=20ml/h D=20ml/h 1000ml=0.02/h 1000ml=0.02/h稀释率：D=f/vF培养基流速（ml/h）V 培养液体积（m

8、l）第18页/共90页19连续培养广泛用于连续培养广泛用于酵母菌的生产(含糖废液)乙醇发酵(糖蜜)乳酸发酵石油脱腊污水处理第19页/共90页20 菌种退化、设备要求高、原料利用略低、回用问题连续培养优点与缺点优点:简化了装料、灭菌（节省动力）、清洗等（蒸汽、人力）单元操作；减少非生产时间；提高设备利用率；便于自动控制产品质量稳定缺点：第20页/共90页21（活性污泥等的混合微生物群，也有类似的生长曲线)水处理中如何避免延滞期对数期或代谢旺盛的污泥增加接种量污泥驯化（以后详细讲）微生物维持到对数期可获得高的处理能力，即分解速度，但处理效果 不一定好菌活力大，不易凝聚和沉淀需要充足的营养物，故得不

9、到好的水质第一节 细菌的生长及其特性5.1.4 细菌的生长曲线与废水的生物处理第21页/共90页22处于稳定期污泥虽然生长速度有所下降，但有一定的代谢活性，絮凝沉降性能好。故传统的活性污泥法常运行在这个范围 衰亡期只出现在某些特殊的水处理场合 如延时曝气及污泥消化第一节 细菌的生长及其特性第22页/共90页23食料/微生物代谢速率内源呼吸阶段生长率下降阶段生长率上升阶段（沉降性能好）（沉降性能差）大多数活性污泥处理系统运行范围延时曝气，污泥消化注意：各个阶段的食物/菌量比(F/M)发生变化，相当于活性污泥系统的污泥负荷第一节 细菌的生长及其特性微生物代谢速率与食料/微生物的关系第23页/共90

10、页24 此法通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物的数此法通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物的数量。计数法又分为量。计数法又分为直接计数直接计数和和间接计数间接计数两类。两类。1、计数法5.1.5 微生物生长量的测定方法第24页/共90页25这类方法是利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。此法的缺点不能区分死菌与活菌 直 接 计 数每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数400l000稀释倍数1、计数法第25页/共90页26第26页/共90页27第27页/共90页28此法又称活菌计数法，其原理是每个活细菌在适宜的培养基和

11、良好的生长条件下可以通过生长形成菌落 间 接 计 数每毫升原菌液活菌数同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数稀释倍数1、计数法第28页/共90页29第29页/共90页30例:稀释度 10-6/ml,形成150个菌落,即1.5 x 108/ml细胞凝聚不能有效地分散平板计数：稀释样品,涂于平板表面,通过计算菌落数即可知道样品中活菌数.实验要求稀释度:30-300 个菌落/皿平板计数得到结果称为菌落形成单位CFU (colony forming unit)下列因素导致计数偏低不能保证每个菌落来源于一个细胞第30页/共90页31 然后再把膜放到具有培养液的垫上或培养基上滤 膜 培 养：膜过滤,截流细菌

12、 培养一定时间计算菌落第31页/共90页32实实 验验 过过 程程0.5 um第32页/共90页33滤滤 膜膜 培培 养养应用特定的培养基应用特定的培养基,可得到选择的微生物可得到选择的微生物粪便大肠杆菌培养基麦芽汁琼脂 长出酵母和霉菌远藤氏琼脂普通培养基第33页/共90页34 DNA含量 此法的原理是根据每个细胞有一定的重量而设计的。它可以用于单细胞、多细胞以及丝状体微生物生长的测定微生物湿重微生物干重蛋白质总量2、重量法第34页/共90页35蛋白质总量含氮量6.25蛋 白 质 总 量 细胞总量蛋白质总量(50%80%(或65%)蛋白质总量1.54D N A 含 量 核酸DNA是微生物的重要

13、遗传物质，每个细菌的DNA含量相当恒定，平均为8.410-5ng.第35页/共90页365.2 微生物的生存因子微生物的生存因子 温度对微生物生长的影响：温度对微生物生长的影响：酶的活性酶的活性；细胞细胞膜的流动性膜的流动性；物质的溶解度物质的溶解度微生物对温度变化很敏感高过极限导致死亡：酶、运输载体被破坏，膜崩解；低温：功能受到影响，但化学组分和结构不一定全受到影响5.2.1 温度第36页/共90页37 微生物有各自的最低、最适和最高生长温度范围 据微生物对温度的生长需求，将微生物分四大类，嗜冷菌、嗜中温菌、嗜热菌和嗜超热菌5.2.1 温度基本温度 cardinal temperature：

14、最低温度最适温度最高温度第37页/共90页38 一种生活在蚊子消化道内的原生动物，一种生活在蚊子消化道内的原生动物，22-27C22-27C在简单培养基中就可以生长在简单培养基中就可以生长,但但在在33-34C33-34C下下,必须向培养基中加金属、必须向培养基中加金属、氨基酸、维生素才能生长。氨基酸、维生素才能生长。一种微生物三个基本温度并非不变，依赖于其他因素：5.2.1 温度第38页/共90页39温度对生长速度影响温度对生长速度影响最适温度靠近最高温度,而非最低温度第39页/共90页40微生物生长温度范围举例微生物生长温度范围举例微生物微生物 最低温度最低温度 最适温度最适温度 最高温度

15、最高温度嗜冷芽孢杆菌嗜冷芽孢杆菌 -10 23-24 28-30 大肠杆菌大肠杆菌 10 37 44嗜酸热硫化叶菌嗜酸热硫化叶菌 60 80 85卓越聚球蓝细菌卓越聚球蓝细菌 70 79 84假丝酵母假丝酵母 0 4-15 15酿酒酵母酿酒酵母 1-3 28 40犁型四膜虫犁型四膜虫 6-7 20-25 33 第40页/共90页41五种类型微生物生长温度和最适温度五种类型微生物生长温度和最适温度第41页/共90页42嗜嗜 冷冷 菌菌 psychrophile来源：海洋来源：海洋 近年来在南极洲发现古生菌近年来在南极洲发现古生菌产甲烷菌产甲烷菌基本特征：0oC可生长最适生长温度等于、低于15C最

16、高生长温度20C细胞膜含有大量的不饱和脂肪酸第42页/共90页43兼兼 性性 嗜嗜 冷冷 菌菌 pschrotroph 0-7C 0-7C 生长生长最适生长温度最适生长温度 20-30C20-30C最高生长温度最高生长温度 35C35C污染冷冻食品污染冷冻食品基本特征：第43页/共90页44嗜嗜 温温 菌菌 mesophile最低生长温度最低生长温度 15-20C 15-20C 生长生长最适生长温度最适生长温度 20-45C20-45C最高生长温度最高生长温度 约约45C45C基 本 特 征：大多数微生物属于这个范围，人类致病菌都是嗜温菌，宿主环境37C第44页/共90页45嗜嗜 热热 菌菌

17、thermophile具有高温下发挥功能的热稳定酶和蛋白质合成系统，细胞膜脂类物质具有高温下发挥功能的热稳定酶和蛋白质合成系统，细胞膜脂类物质饱和度高（相比嗜温菌）饱和度高（相比嗜温菌）基本特征：最低生长温度 约45C 生长最适生长温度 55-65C最高生长温度 70C堆肥、自我升温的干草堆、热水管道、温泉等处生长第45页/共90页46超超 嗜嗜 热热 菌菌 hyperthermophile低于低于55C55C通常不能生长通常不能生长少数能在少数能在90C90C以上温度生长；以上温度生长；80-113C 80-113C下生长的原始生物成为超嗜热菌下生长的原始生物成为超嗜热菌基本特征：第46页/

18、共90页47100C 100C 以上温度条件下的微生物以上温度条件下的微生物有证据表明，有证据表明，113 C 113 C 下生长繁殖；下生长繁殖；很可能在更高的温很可能在更高的温度下生长繁殖；度下生长繁殖；265p/460C 265p/460C 海水不沸腾海水不沸腾超嗜热菌研究超嗜热菌研究科学和应用价值极大科学和应用价值极大第47页/共90页48细细 菌：菌：中性或偏碱性中性或偏碱性 pH 6.5-7.5放放 线线 菌：菌：中性偏碱性中性偏碱性pH 7.0-8.0酵母菌霉菌：酵母菌霉菌：酸性酸性pH 5.0-6.0污水净化处理：污水净化处理：瀑气池瀑气池pH 6.58.5有机固体废物：有机固

19、体废物：pH 58 嗜 酸 菌 acidophile pH 0-5.5 嗜中性菌 neutrophile pH 5.5-8.0 嗜 碱 菌 alkalophile pH 8.5-11.5每种微生物都有其生长pH 范围和最适pH5.2.2 pH第48页/共90页49一般好氧微生物：一般好氧微生物：0.30.30.40.4伏，伏，0.10.1伏伏兼性厌氧：兼性厌氧：0.10.1伏，好氧；伏，好氧；0.10.1伏，厌氧伏，厌氧专性厌氧：专性厌氧：-0.2-0.2-0.25-0.25伏，伏，产甲烷菌：产甲烷菌：-0.3-0.3-0.4-0.4伏伏影响因素：氧分压影响因素：氧分压 环境中的环境中的pHp

20、H 可用一些还原剂控制可用一些还原剂控制5.2.3 氧化还原电位第49页/共90页501 1 专性好氧微生物专性好氧微生物:氧分压为氧分压为0.20.2个大气压个大气压2 2 微量好氧微生物微量好氧微生物:氧分压为氧分压为0.003-0.20.003-0.2个大个大气压气压3 3 耐氧厌氧微生物：耐氧厌氧微生物：4 4 兼性厌氧微生物：兼性厌氧微生物：5 5 厌氧微生物：氧分压小于厌氧微生物：氧分压小于0.0050.005个大气压个大气压5.2.4 溶解氧5.2.5 太阳辐射5.2.6 水的活度与渗透压5.2.7 表面张力第50页/共90页515.3 5.3 其它不利因素对微生物影响其它不利因

21、素对微生物影响（2）电离辐射：能使被照射的物质产生电离作）电离辐射：能使被照射的物质产生电离作用用1 紫外辐射和电离辐射（1）紫外辐射 以260nm左右紫外线的杀菌力最强 杀菌机理是作用核酸 穿透力差 光复活现象辐射机理引起水分子的分解5.3.1 物理因素第51页/共90页52 极端高度：杀死微生物极端高度：杀死微生物 极端低温：抑制微生物生长极端低温：抑制微生物生长 应应 用：高温杀菌用：高温杀菌2 超声波：频率大于20,000赫兹，人耳听不见具有强烈的生物学作用，几乎所有的细菌都能被超声波破坏 杀菌机理应用3 极端温度:超高温、超低温,主指超高温的影响4 干 燥第52页/共90页531 重

22、金属重金属2 极端极端 pH3 若干有机物若干有机物 醇、醛和表面活性剂醇、醛和表面活性剂4 抗生素对微生物的影响抗生素对微生物的影响5.3.2 化学因素对微生物的影响第53页/共90页54&微生物的分离和纯培养(供实验课)1无菌技术2用固体培养基分离纯培养3用液体培养基分离纯培养4单细胞(单孢子)分离5选择培养分离6二元培养物7微生物的保藏技术 第54页/共90页55v无菌技术微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且无处不在。因此，在微生物的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。在分

23、离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术(aseptic technique)，它是保证微生物学研究正常进行的关键。第55页/共90页56微生物培养的常用器具及其灭菌试管、玻璃烧瓶、平皿(culture dish，petri dish)等是最为常用的培养微生物的器具，在使用前必须先行灭菌，使容器中不含任何生物。培养微生物的营养物质称为培养基(culture medium)可以加到器皿中后一起灭菌，也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。第56页/共90页57最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分

24、不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌第57页/共90页58为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。第58页/共90页59接种操作用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养容器进行培养，是微生物学研究中最常用的基本操作。由于打开器皿就可能引起器皿内部被环境中的其他微生物污染，因此微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行，其要点是在火焰附近进行熟练

25、的无菌操作，或在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行操作第59页/共90页60v用固体培养基分离纯培养 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌，以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养第60页/共90页61所谓平板，即培养平板(culture plate)的简称，它是指熔化的固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛有固体培养基的平皿。固体培养方法可将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。第61页/共90页62固体培养基(用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基)

26、，可使每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。Koch建立的平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。第62页/共90页63v稀释倒平板法(pour plate method)v涂布平板法(spread plate method)v平板划线分离法(streak plate method)v稀释摇管法(dilution shake culture method)第63页/共90页64稀释倒平板法待分离的材料用无菌水作一系列的稀释，取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50左右的琼脂培养

27、基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间，可能出现在平板表面或琼脂培养基中的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。第64页/共90页65涂布平板法 在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒人无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。第65页/共90页66第66页/共90页67第67页/共90页68v平板划线分离法 用接种环以无菌操

28、作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。第68页/共90页69第69页/共90页70第70页/共90页71第71页/共90页72第72页/共90页73v稀释摇管法 对于那些对氧气更为敏感的厌氧性微生物，纯培养的分离则可采用稀释摇管培养法进行。将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后，冷却并保持在50左右，用这些试管进行梯度稀释待分离材料，试管均匀，冷凝，倾注一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。培养后，

29、菌落形成在琼脂柱的中间，挑取和移植单菌落。第73页/共90页74第74页/共90页75v用液体培养基分离纯培养 接种物在液体培养基中依序稀释，以达高度稀释的效果，使一支试管中分配不到一个微生物。如果稀释后的多数试管中没有微生物生长，则有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。采用稀释法进行液体分离，必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数(一般应超过95%)表现为不生长。第75页/共90页76v单细胞(单孢子)分离 采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养，称为单细胞(单孢子)分离法。单细胞分离法的难度与细胞或个体的大小成反比，较大的微生物如藻类、原生动

30、物较容易，个体很小的细菌则较难。单细胞分离法对操作技术有比较高的要求，多限于高度专业化的科学研究中采用。第76页/共90页77v选择培养分离如果某种微生物的生长需要是已知的，也可以设计一套特定环境使之特别适合这种微生物的生长，因而能够从自然界混杂的微生物群体中把这种微生物选择培养出来，即使在混杂的微生物群体中这种微生物可能只占少数。这种通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术称为选择培养分离。可利用选择培养基进行直接分离或富集培养。第77页/共90页78利用选择培养基进行直接分离主要根据待分离微生物的特点选择不同的培养条件,得到纯培养物。富集培养主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定特

31、定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可据分离的微生物的特点从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等等许多方面。第78页/共90页79v二元培养物 只有一种微生物的培养物称为纯培养物，含有二种以上微生物的培养物称为混合培养物，而如果培养物中只含有二种微生物，而且是有意识地保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。例如二元培养物是保存病毒的最有效途径。对于这些生物，二元培养物是在实验室控制条件下可能达到的最接近于纯培养的培养方法。第79页/共90

32、页80v微生物的保藏技术传代培养保藏冷冻保藏干燥保藏法第80页/共90页81通过分离纯化得到的微生物纯培养物，必须通过各种保藏技术使其在一定时间内不死亡，不会被其他微生物污染，不会因发生变异而丢失重要的生物学性状，否则就无法真正保证微生物研究和应用工作的顺利进行。菌种或培养物保藏是一项最重要的微生物学基础工作，微生物菌种是珍贵的自然资源，具有重要意义。第81页/共90页82菌种保藏就是根据菌种特性及保藏目的的不同，给微生物菌株以特定的条件，使其存活而得以延续。菌种保藏机构：中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM)，中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，美国典型菌种保藏中心(ATCC)，世界菌种保

33、藏联合会(WFGC)。第82页/共90页83v传代培养保藏常用的有琼脂斜面、半固体琼脂柱及液体培养等。选择使用适宜的培养基，并在规定的时间内进行移种。传代培养十分繁琐，容易污染，特别是会由于菌株的自发突变而导致菌种衰退，使菌株的形态、生理特性、代谢物的产量等发生变化 第83页/共90页84v冷冻保藏使微生物处于冷冻状态，代谢作用停止以达到保藏的目的。微生物细胞对低温敏感，可用速冻、快速升温和添加各种保护剂等手段。液氮保藏或-70低温保藏。用普通冰箱冷冻保存菌种的效果往往远低于低温冰箱，应注意经常检查保藏物的存活情况，随时转种 第84页/共90页85v干燥保藏法水分对各种生化反应和一切生命活动至

34、关重要，因此，干燥，尤其是深度干燥是微生物保藏技术中另一项经常采用的手段。沙土管保存和冷冻真空干燥保藏是最常用的二项微生物干燥保藏技术。第85页/共90页86u沙土管保存主要适用于产孢子的微生物，如芽孢杆菌、放线菌等。将菌种接种培养，长出大量的孢子，洗下孢子制备孢子悬液，加入无菌的沙土试管中，减压干燥，抽干水分，最后用石蜡、胶塞等封闭管口，置冰箱保存。此法简便易行，并可以将微生物保藏较长时间，适合一般实验室及以放线菌等为菌种的发酵工厂采用。第86页/共90页87v冷冻真空干燥保藏是将加有保护剂的细胞样品预先冷冻，经真空冰的升华作用除去水分。达到干燥的样品可在真空或惰性气体的密闭环境中置低温保存

35、，从而使微生物处于干燥、缺氧及低温的状态，生命活动处于休眠，可以达到长期保藏的目的。冷冻真空干燥保藏是目前使用最普遍，也是最重要的微生物保藏方法，为大多数专业的菌种保藏机构均采用第87页/共90页88抑菌剂抑菌剂：能抑制微生物的生长，但不能杀死：能抑制微生物的生长，但不能杀死杀菌剂杀菌剂：能杀死微生物，但不能使其溶解：能杀死微生物，但不能使其溶解溶菌剂溶菌剂：不但能杀死而且使其溶解：不但能杀死而且使其溶解灭菌灭菌：杀死物体中包括芽孢在内的一切微生物：杀死物体中包括芽孢在内的一切微生物消毒消毒：杀死或灭活物体中病原微生物的措施：杀死或灭活物体中病原微生物的措施防腐防腐：防止或抑制微生物生长的一种

36、措施：防止或抑制微生物生长的一种措施无菌无菌：不含有活的微生物：不含有活的微生物化疗化疗：利用具有选择毒性的物质（化学物质）：利用具有选择毒性的物质（化学物质）杀死感染微生物而对宿主无害杀死感染微生物而对宿主无害灭菌技术灭菌技术：防止微生物进入机体或物体的技术：防止微生物进入机体或物体的技术有 关 术 语第88页/共90页89干热灭菌焚烧法：最彻底的灭菌法烧灼法：用火焰烧，如接种棒干燥法：160 度，2h湿热灭菌煮沸法：100，大于5min间歇灭菌法：80100,1560min,重复3次巴氏灭菌法：杀无芽孢的病原菌72，5s高压蒸气灭菌法：121，1520min高温灭菌 高 温 灭 菌第89页/共90页90感谢您的观看！第90页/共90页