血细胞分析仪检验-课件.ppt

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1、全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 血细胞分析仪及其临床应用血细胞分析仪及其临床应用滨州市人民滨州市人民医院检验科医院检验科张张 芳芳全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 血液分析仪检测原理血液分析仪检测原理仪器基本结构仪器基本结构 机械系统机械系统 电学系统电学系统 光学系统光学系统 检测方法：电阻抗法、光散射法检测方法：电阻抗法、光散射法 两大功能：细胞计数、细胞分类两大功能：细胞计数、细胞分类 第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 库尔特原理库尔特原理“当一个不良导体颗当一个不良导体颗 粒，例如血细粒，例如血细 胞，通过两个电极之间胞，通过两个电极之间 时时

2、，导，导 致电致电 路的电路的电 阻抗发生变化，产生脉冲电信号。阻抗发生变化，产生脉冲电信号。”脉冲次数脉冲次数细胞数量，脉冲大小细胞数量，脉冲大小细胞体积。细胞体积。第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 电阻抗原理示意图电阻抗原理示意图负压负压血细胞悬液外电极外电极内电极内电极小孔小孔小孔管小孔电流小孔电流样品杯小孔近观库尔特原理三要库尔特原理三要素：小孔、负压、素：小孔、负压、电极电极检测：阻抗大小检测：阻抗大小-细胞体积，细胞体积，脉冲脉冲数量数量-细胞个数细胞个数第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 1 1、电阻抗法、电阻抗法血细胞分析技

3、术血细胞分析技术（1）电阻抗原理(principle of electrical impedance)，又称库尔特原理（Coulter principle）第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 电阻抗原理电阻抗原理血细胞相对非导电，悬浮在电解质溶液中血细胞相对非导电，悬浮在电解质溶液中受负压吸引通过计数小孔时，引起电阻瞬受负压吸引通过计数小孔时，引起电阻瞬间变化产生脉冲信号，脉冲振幅代表细胞间变化产生脉冲信号，脉冲振幅代表细胞体积，脉冲数量即细胞个数。体积，脉冲数量即细胞个数。用于红细胞、白细胞、血小板计数和体积用于红细胞、白细胞、血小板计数和体积测定测定第三章 血液分

4、析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学（1）电阻抗法白细胞检测原理）电阻抗法白细胞检测原理 35-450fl范围内分析白细胞（计数和范围内分析白细胞（计数和 体积三分类）体积三分类）%35 90 160 300 400 450(fl)第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 检测区域白细胞白细胞通过小孔白细胞通过小孔白细胞计数示意图白细胞计数示意图示波镜示波镜第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 白细胞体积白细胞体积生理状态下：单核细胞生理状态下：单核细胞嗜酸细胞嗜酸细胞中性粒细胞中性粒细胞嗜碱细胞嗜碱细胞淋巴细胞淋巴细胞溶血素处理后：溶血素

5、处理后：中性粒细胞中性粒细胞嗜酸细胞嗜酸细胞单核细单核细胞胞嗜碱细胞嗜碱细胞淋巴细胞淋巴细胞第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 三分类原理：三分类原理：白白细细胞胞经经溶溶血血素素处处理理，胞胞质质渗渗出出，细细胞胞皱皱缩缩，胞膜紧裹核与颗粒，体积发生变化胞膜紧裹核与颗粒，体积发生变化第第一一群群（3590fl）小小细细胞胞区区：淋淋巴巴细细胞胞（体体积最小，一般积最小，一般在在3590fl）。）。第第二二群群（90160fl）是是单单个个核核细细胞胞区区（中中间间细细胞胞）：包包括括单单核核细细胞胞、嗜嗜酸酸性性粒粒细细胞胞、嗜嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞

6、等碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等第第三三群群（160fl）大大细细胞胞区区：嗜嗜中中性性粒粒细细胞胞（体积最大，一般在（体积最大，一般在135-350fl）。）。第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 LymphocyteMonocyteGranulocyte小细胞小细胞单个核细胞单个核细胞粒细胞粒细胞淋巴淋巴嗜碱嗜碱单核单核嗜酸嗜酸中性粒细胞中性粒细胞第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 仪器组成 1.信号发生器信号发生器 2.放大器放大器 3.阈值调节阈值调节 4.甄别器甄别器 5.整形器整形器 6.技术系统技术系统第三章 血液分析仪检

7、验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学（2）电阻抗法红细胞检测原理）电阻抗法红细胞检测原理 红细胞计数和血细胞比容测定 36-360fl范围内计数红细胞 100 200 300 400(fl)%第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 检测区域红细胞红细胞通过小孔红细胞通过小孔红细胞计数示意图红细胞计数示意图Oscilloscope示波镜示波镜第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 血红蛋白检测原理血红蛋白检测原理溶血剂破坏红细胞释放血红蛋白，溶血剂破坏红细胞释放血红蛋白，Hb与溶与溶血剂某些成分结合成血红蛋白衍生物，特血剂某些成分结合成血红蛋白衍生

8、物，特定波长下比色，吸光度变化与血红蛋白含定波长下比色，吸光度变化与血红蛋白含量成正比量成正比ICSHICSH和和WHOWHO推荐氰化高铁血红蛋白法推荐氰化高铁血红蛋白法第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学（3 3）电阻抗法血小板检测原理）电阻抗法血小板检测原理 血小板计数：血小板计数：2-20fl2-20fl范围计数为血小板范围计数为血小板 因体积较小，可与红细胞在一个系统中进行检测。因体积较小，可与红细胞在一个系统中进行检测。直方图在230fl（不同仪器范围有差异）。血小板平均体积（mean platelet volume,MPV）。10 20 30(fl)10 2

9、0 30(fl)%第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 检测原理：检测原理：组合应用组合应用 电学电学 光学光学 细胞化学等细胞化学等光散射法血细胞分析技术光散射法血细胞分析技术第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 从三分群到五分类从三分群到五分类三分群：淋巴细胞单个核细胞中性粒细胞五分类：淋巴细胞单核细胞中性粒细胞嗜酸细胞嗜碱细胞第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 3 3、光散射法、光散射法血细胞分析方法血细胞分析方法（1）容量、电导、光散射（）容量、电导、光散射（VCS）测量法测量法（2）电阻抗与射频技术联合检测法）

10、电阻抗与射频技术联合检测法（3）光散射与细胞化学技术联合检测法）光散射与细胞化学技术联合检测法（4）多角度偏振光散射检测法）多角度偏振光散射检测法第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学（1）容量、电导、光散射（）容量、电导、光散射（VCS）测量法测量法第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 白细胞接近原态的分析白细胞接近原态的分析Scatter Pak双试剂系统的作用溶血剂(E-lyse):溶解红细胞终止剂(S-lyse):令溶解作用停止，并使白细胞恢复到“接近原态”第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 接近原态的接近原态的W

11、BCWBC分析分析接近原态的白细胞进入流式通道进入流式通道第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 正常压力差：标本压力大于鞘流压力正常压力差：标本压力大于鞘流压力第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 体积检测体积检测(V)(V)V 是以库尔特原理检测细胞的体积获得的是完全的细胞体积VCS-DC第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 细胞内部结构检测细胞内部结构检测(C)C 运用高频电磁探针检测细胞的内部结构获得细胞核复杂程度、核质比例的信息区分分叶核和非分叶核细胞VCS-RF第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基

12、础检验学 VCS-LaserS 是激光单色光束扫描细胞产生宽角度的散射光（10-70）来测量细胞表面形态及颗粒构型和质量，更好地根据颗粒特性区分淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸细胞细胞颗粒特性检测细胞颗粒特性检测(S)第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 VCSVCS检测检测八千多个白细胞逐个、直八千多个白细胞逐个、直接、同时地在流式通道内接、同时地在流式通道内接受接受VCS三重检测，得到各三重检测，得到各自的三维座标值自的三维座标值VCS第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 五分类五分类VCSVCS技术技术运用运用V V、C C、S S三种探针三种探

13、针,在在流式通道的某一位点流式通道的某一位点,对通对通过的单列白细胞，进行逐过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检个的、同时的、三重的检测，以及三维分析测，以及三维分析,以确定以确定其亚群性质。其亚群性质。V-V-低频波，分析细胞体低频波，分析细胞体积；积；C-C-高频波，分析细胞核高频波，分析细胞核型；型；S-S-激光，分析细胞的颗激光，分析细胞的颗粒特性。粒特性。第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 三维细胞定位三维细胞定位第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 VCSVCS三

14、维分析的技术特点三维分析的技术特点接近原态的白细胞分析接近原态的白细胞分析一个分类试剂包一个分类试剂包增强型流式通道，增强型流式通道，VCSVCS直接、同时、三重检测直接、同时、三重检测分析细胞的视角与手工相似分析细胞的视角与手工相似真正的三维检测真正的三维检测VCSVCS，汇集最全面的物理检测工具汇集最全面的物理检测工具三维分析的高分辨率三维分析的高分辨率 (256(256 256 256 256)256)白细胞五项分类白细胞五项分类1010多种异常细胞的检测多种异常细胞的检测第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 血液分析仪的不足血液分析仪的不足起筛查作用起筛查作用识

15、别异常细胞和幼稚细胞有局限性识别异常细胞和幼稚细胞有局限性识别血液寄生虫能力不足识别血液寄生虫能力不足血涂片显微镜形态学检查补充不足血涂片显微镜形态学检查补充不足第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学（2 2）电阻抗与射频法）电阻抗与射频法（能透入细胞内，测量核的大小及颗粒的多少）：RF:射频电流射频电流 细胞内部结构信息细胞内部结构信息DC:直流电直流电 细胞大小的信息细胞大小的信息 第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 嗜酸性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统5种白细胞分类检测系统：直流电（direct current，DC）为横坐标，以射频（

16、radio frequency，RF）为纵坐标的二维分析图。幼稚细胞检测系统：第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 （3 3）激光与细胞化学法）激光与细胞化学法 1）过氧化物酶检测通道；2）嗜碱性粒细胞/分叶核检测通道。第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 1）过氧化物酶光散射检测光散射测细胞大小，根据过氧化物酶含量高低区分为嗜酸粒细胞、中性粒细胞、单嗜酸粒细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、嗜碱粒细胞核细胞、淋巴细胞、嗜碱粒细胞物理、化学联合检测物理、化学联合检测第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 2）嗜碱性粒细胞/

17、分叶核检测通道 当血液进入嗜酸性粒细胞通道时，红细当血液进入嗜酸性粒细胞通道时，红细胞被溶解，除嗜碱性粒细胞外，其余所有胞被溶解，除嗜碱性粒细胞外，其余所有白细胞膜均被破坏，胞质溢出，仅剩裸核。白细胞膜均被破坏，胞质溢出，仅剩裸核。激光照射嗜碱性粒细胞后，产生散射光的激光照射嗜碱性粒细胞后，产生散射光的变化，形成二维细胞图。变化，形成二维细胞图。第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学（4 4）多多角角度度偏偏振振光光散散射射 （multi-angle multi-angle polarized polarized scatter scatter separation se

18、paration of of white white cell,cell,MAPSSMAPSS）法法0 0：前角散射光：前角散射光（1 13 3），可粗略测定细胞大小。），可粗略测定细胞大小。1010：狭狭角角散散射射光光（7 71111），可可测测定定细细胞胞内内部部结结构相对特征。构相对特征。9090：垂垂直直散散射射光光（7070110110），测测定定细细胞胞内内部部颗颗粒和胞质情况。粒和胞质情况。9090：消消偏偏振振光光散散射射（7070110110），区区分分嗜嗜酸酸性性粒粒细胞与其他细胞。细胞与其他细胞。第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 第三章 血液

19、分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 光散射法红细胞检测原理光散射法红细胞检测原理 低低角角度度(2(23 3)光光散散射射：测测量量红红细细胞胞体积与数量体积与数量高高角角度度(5(51515)光光散散射射：测测定定单单个个红红细胞血红蛋白浓度细胞血红蛋白浓度得到得到MCVMCV、MCHMCH、MCHCMCHC测定值。测定值。第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 光散射法血小板检测原理光散射法血小板检测原理 MieMie理理论论（Mie Mie theory theory of of light light scatter scatter for for

20、homogeneous homogeneous spheresspheres）：当当球球形形化化的的血血小小板一个一个通过激光照射区时：板一个一个通过激光照射区时：第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 低角度低角度（2 23 3）：测量细胞大小，）：测量细胞大小，高高角角度度（5 51515）：检检测测细细胞胞折折射射指指数数（reactive indexreactive index，RIRI）与细胞密度有关；与细胞密度有关；大大血血小小板板与与各各种种碎碎片片如如果果体体积积相相似似，但但由由于于内内容容物不同，物不同，RIRI相差较大，二维散射图能鉴别。相差较大，二

21、维散射图能鉴别。折射系数折射系数:血小板血小板 1.351.351.401.40RBCRBC含高浓度含高浓度HbHb 1.35 1.351.441.44 第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 4、血红蛋白检测原理、血红蛋白检测原理 比色法比色法第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 血红蛋白检测原理血红蛋白检测原理溶血剂破坏红细胞释放血红蛋白，溶血剂破坏红细胞释放血红蛋白，Hb与溶与溶血剂某些成分结合成血红蛋白衍生物，特血剂某些成分结合成血红蛋白衍生物，特定波长下比色，吸光度变化与血红蛋白含定波长下比色，吸光度变化与血红蛋白含量成正比量成正比ICS

22、HICSH和和WHOWHO推荐氰化高铁血红蛋白法推荐氰化高铁血红蛋白法第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 二二 血细胞分析仪检验参数血细胞分析仪检验参数（一）检测参数 中高档仪器检测参数：20项左右至超过40项（二）相关参数的临床应用第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 血细胞参数介绍血细胞参数介绍WBC、NE%、NE#、LY%、LY#、MO%、MO#、EO%、EO#、BA%、BA#；RBC、Hgb、Hct、MCV、MCH、MCHC、RDWPLT、MPV、PCT、PDWRET%、RET#、MRV、RMI第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划

23、教材临床基础检验学 三三 血液分析仪检验图形血液分析仪检验图形（一）、血细胞直方图 横坐标为血细胞体积大小纵坐标为不同体积细胞的相对频率（数量或百分比）。1.白细胞直方图白细胞直方图 第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学（1）.正常白细胞直方图正常白细胞直方图%35 90 160 300 400 450(fl)第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 （2）异常白细胞直方图）异常白细胞直方图 淋单区：异淋、嗜酸、嗜碱、淋单区：异淋、嗜酸、嗜碱、原始细胞增多原始细胞增多单粒区：未成熟单粒区：未成熟N、嗜酸、嗜酸、异常细胞增多异常细胞增多PLT聚集、巨大

24、聚集、巨大PLT、NRBC、未溶未溶RBC、脂质颗粒脂质颗粒中性粒细胞增多中性粒细胞增多第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 2.红细胞直方图（1）.正常红细胞分布：50200fl 100 200 300 400(fl)第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 （2）.异常红细胞直方图 波峰左移（波峰左移（MCV减小），减小），峰底变宽（峰底变宽（RDW增大），增大），见于缺铁性贫血见于缺铁性贫血 波峰左移（波峰左移（MCV减小），减小），峰底基本正常（峰底基本正常（RDW正正常），见于常），见于 珠蛋白生成珠蛋白生成障碍障碍第三章 血液分析仪检验全

25、国高等学校医学规划教材临床基础检验学 异常红细胞直方图波峰右移（波峰右移（MCV增大），增大），峰底变宽（峰底变宽（RDW增大），增大），见于巨幼细胞贫血见于巨幼细胞贫血出现双峰，见于铁粒出现双峰，见于铁粒幼细胞性贫血、贫幼细胞性贫血、贫血治疗后血治疗后第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 3.血小板直方图 （1）.正常血小板直方图呈左偏态分布：230fl分布，主要在220fl。数数量量体积体积fl第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学（2）.异常血小板直方图波峰右移（波峰右移（MPV增大），增大），与横坐标接近或重合点右与横坐标接近或重合点右移，

26、见于巨大血小板增多移，见于巨大血小板增多波峰左移（波峰左移（MPV减小），减小），与横坐标接近或重合点左与横坐标接近或重合点左移，见于小血小板增多移，见于小血小板增多第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 异常血小板直方图波峰右移（波峰右移（MPV增大），增大），不与横坐标重合，见于不与横坐标重合，见于 血小板聚集干扰血小板聚集干扰峰右侧明显抬高上扬，可峰右侧明显抬高上扬，可能是小红细胞或红细胞能是小红细胞或红细胞碎片干扰碎片干扰第三章 血液分析仪检验全国高等学校医学规划教材临床基础检验学 血细胞分析专利技术脉冲编辑脉冲编辑重叠校正重叠校正三孔计数三孔计数延长计数延长计数扫流技术扫流技术拟合曲线拟合曲线燃烧电路燃烧电路酶清洁剂酶清洁剂第三章 血液分析仪检验